GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定

中华人民共和国国家标准

—

GB5009.1682016

食品安全国家标准

食品中脂肪酸的测定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

前言

本标准代替/—《食品中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定》、

GBT5009.1682003

/—《、()、()》、

食品中总脂肪饱和脂肪酸不饱和脂肪酸的测定水解提取气相色谱法

GBT222232008-

—《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》、/—《肉

GB5413.272010GBT9695.22008

与肉制品脂肪酸测定》、/—《动植物油脂脂肪酸甲酯制备》、/—《动

GBT173762008GBT173772008

植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析》、/—《出口食品中和的测定气相

SNT29222011EPADHA

色谱法》、/—《油菜籽中油的芥酸的测定气相色谱法》。

NYT911988

/—,:

本标准与GBT5009.1682003相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定

———增加了内标法和归一化法;

———,。

修改了原标准中的色谱柱将玻璃柱改为毛细管色谱柱

Ⅰ

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

食品安全国家标准

食品中脂肪酸的测定

1范围

本标准规定了食品中脂肪酸含量的测定方法。

、()、()。

本标准适用于食品中总脂肪饱和脂肪酸不饱和脂肪酸的测定

;

本标准中水解提取法适用于食品中脂肪酸含量的测定酯交换法适用于游离脂肪酸含量不大于

-

;

的油脂样品的脂肪酸含量测定乙酰氯甲醇法适用于含水量小于的乳粉和无水奶油样品的脂

2%-5%

肪酸含量测定。

第一法内标法

2原理

:,

水解提取法加入内标物的试样经水解乙醚溶液提取其中的脂肪后在碱性条件下皂化和甲酯

2.1--

,,,。

化生成脂肪酸甲酯经毛细管柱气相色谱分析内标法定量测定脂肪酸甲酯含量依据各种脂肪酸甲

、()、()、()。

酯含量和转换系数计算出总脂肪饱和脂肪酸单不饱和脂肪酸多不饱和脂肪酸含量

,。

动植物油脂试样不经脂肪提取加入内标物后直接进行皂化和脂肪酸甲酯化

():,,

2.2酯交换法适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂将油脂溶解在异辛烷中加入内标物后加

,,,。

入氢氧化钾甲醇溶液通过酯交换甲酯化反应完全后用硫酸氢钠中和剩余氢氧化钾以避免甲酯皂化

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

盐酸()。

3.1.1HCl

氨水(·)。

3.1.2NHHO

32

焦性没食子酸()。

3.1.3CHO

663

乙醚()。

3.1.4CHO

410

:。

3.1.5石油醚沸程30℃~60℃

乙醇()()。

3.1.6CHO95%

26

():。

3.1.7甲醇CHOH色谱纯

3

氢氧化钠()。

3.1.8NaOH

[()]:。

3.1.9正庚烷CHCHCH色谱纯

3253

,。

3.1.10三氟化硼甲醇溶液浓度为15%

无水硫酸钠()。

3.1.11NaSO

24

氯化钠()。

3.1.12NaCl

1

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

[()()]:。

3.1.13异辛烷CHCHCHCCH色谱纯

32233

硫酸氢钠()。

3.1.14NaHSO4

氢氧化钾()。

3.1.15KOH

3.2试剂配制

(/):,,,。

盐酸溶液量取盐酸用水稀释混匀室温下可放置个月

3.2.18.3molL250mL110mL2

():,。

乙醚石油醚混合液取等体积的乙醚和石油醚混匀备用

3.2.2-1+1

():,。

3.2.3氢氧化钠甲醇溶液2%取2g氢氧化钠溶解在100mL甲醇中混匀

:,,。

3.2.4饱和氯化钠溶液称取360g氯化钠溶解于1.0L水中搅拌溶解澄清备用

(/):,,

3.2.5氢氧化钾甲醇溶液2molL将13.1g氢氧化钾溶于100mL无水甲醇中可轻微加热加入无

,,。

水硫酸钠干燥过滤即得澄清溶液

3.3标准品

3.3.1十一碳酸甘油三酯(,号:)。

CHOCAS13552-80-2

36686

3.3.混合脂肪酸甲酯标准品。

2

:。

3.3.3单个脂肪酸甲酯标准品见附录A

3.4标准溶液配制

(/):()十一碳酸甘油三酯

3.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液5.00mmL准确称取2.5g精确至0.1mg

g

,,,。

至烧杯中加入甲醇溶解移入容量瓶后用甲醇定容在冰箱中冷藏可保存个月

500mL1

:,

3.4.2混合脂肪酸甲酯标准溶液取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至到10mL容量瓶中用正庚烷稀

,,。

释定容贮存于以下冰箱有效期个月

-10℃3

:,

3.4.3单个脂肪酸甲酯标准溶液将单个脂肪酸甲酯分别从安瓿瓶中取出转移到10mL容量瓶中用

,,,,

正庚烷冲洗安瓿瓶再用正庚烷定容分别得到不同脂肪酸甲酯的单标溶液贮存于-10℃以下冰箱

有效期个月。

3

4仪器设备

4.1匀浆机或实验室用组织粉碎机或研磨机。

:()。

4.2气相色谱仪具有氢火焰离子检测器FID

:,,,。

4.3毛细管色谱柱聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相柱长100m内径0.25mm膜厚0.2m

μ

:,。

4.4恒温水浴控温范围40℃~100℃控温±1℃

:。

4.5分析天平感量0.1mg

4.6旋转蒸发仪。

5分析步骤

5.1试样的制备

,。,

在采样和制备过程中应避免试样污染固体或半固体试样使用组织粉碎机或研磨机粉碎液体试

,。

样用匀浆机打成匀浆于-18℃以下冷冻保存分析用时将其解冻后使用

2

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

5.2试样前处理

水解提取法

5.2.1-

试样的称取

(,)

称取均匀试样0.1~10精确至0.1m约含脂肪100m~200m移入到250mL平底烧瓶

ggggg

,。,,

中准确加入2.0mL十一碳酸甘油三酯内标溶液加入约100mg焦性没食子酸加入几粒沸石再加

,。,;

入2mL95%乙醇和4mL水混匀根据试样的类别选取相应的水解方法乳制品采用碱水解法乳酪

;;。

采用酸碱水解法动植物油脂直接进行步骤其余食品采用酸水解法

:,,。

注根据实际工作需要选择内标对于组分不确定的试样第一次检测时不应加内标物观察在内标物峰位置处是

,,

否有干扰峰出现如果存在可依次选择十三碳酸甘油三酯或十九碳酸甘油三酯或二十三碳酸甘油三酯作为

内标。

试样的水解

:():,。

酸水解法食品除乳制品和乳酪加入盐酸溶液10mL混匀将烧瓶放入70℃~80℃水浴中

。,。,

水解40min每隔10min振荡一下烧瓶使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入溶液中水解完成后取出

烧瓶冷却至室温。

:():,。

碱水解法乳制品乳粉及液态乳等试样加入氨水5mL混匀将烧瓶放入70℃~80℃水浴中

。,。,

水解20min每5min振荡一下烧瓶使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入溶液中水解完成后取出烧瓶

冷却至室温。

::,。。每隔

酸碱水解法乳酪加入氨水5mL混匀将烧瓶放入70℃~80℃水浴中水解20min

,。,继续水解

10min振荡一下烧瓶使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入溶液中接着加入盐酸10mL

,,。,

20min每10min振荡一下烧瓶使黏附在烧瓶壁上的颗粒物混入溶液中水解完成后取出烧瓶冷却

至室温。

脂肪提取

,,。,

水解后的试样加入10mL95%乙醇混匀将烧瓶中的水解液转移到分液漏斗中用50mL乙醚

,,。,。将醚

石油醚混合液冲洗烧瓶和塞子冲洗液并入分液漏斗中加盖振摇5min静置10min层提取

。,

液收集到烧瓶中按照以上步骤重复提取水解液次最后用乙醚石油醚混合液冲洗分液漏

250mL3

,。,。

斗并收集到250mL烧瓶中旋转蒸发仪浓缩至干残留物为脂肪提取物

脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化

,,,

在脂肪提取物中加入氢氧化钠甲醇溶液连接回流冷凝器水浴上回流直至

2%8mL80℃±1℃

。,

油滴消失从回流冷凝器上端加入7mL15%三氟化硼甲醇溶液在80℃±1℃水浴中继续回流

。。,,。

2min用少量水冲洗回流冷凝器停止加热从水浴上取下烧瓶迅速冷却至室温

,,,。

准确加入10mL~30mL正庚烷振摇2min再加入饱和氯化钠水溶液静置分层吸取上层正

,,,,,

庚烷提取溶液大约至试管中加入大约无水硫酸钠振摇静置吸

5mL25mL3~51min5min

gg

取上层溶液到进样瓶中待测定。

5.2.2酯交换法

适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂样品。

试样称取

称取试样至具塞试,,。

60.0mg管中精确至0.1mg准确加入2.0mL内标溶液

3

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

甲酯制备

,,

加入4mL异辛烷溶解试样必要时可以微热使试样溶解后加入200L氢氧化钾甲醇溶液盖上

μ

。,,。,

玻璃塞猛烈振摇30s后静置至澄清加入约1g硫酸氢钠猛烈振摇中和氢氧化钾待盐沉淀后将

,。

上层溶液移至上机瓶中待测

5.3测定

5.3.1色谱参考条件

,。

取单个脂肪酸甲酯标准溶液和脂肪酸甲酯混合标准溶液分别注入气相色谱仪对色谱峰进行定性

,。

脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图见附录B

):,,,。

a毛细管色谱柱聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相柱长100m内径0.25mm膜厚0.2m

μ

)进样器温度:。

b270℃

)检测器温度:。

c280℃

):,;

d程序升温初始温度100℃持续13min

,/,;

100℃~180℃升温速率10℃min保持6min

,/,;

180℃~200℃升温速率1℃min保持20min

,/,。

200℃~230℃升温速率4℃min保持10.5min

):。

e载气氮气

)分流比:。

f100∶1

)进样体积:。

g1.0L

μ

)检测条件应满足理论塔板数()/,()。

hn至少2000m分离度R至少1.25

5.3.2试样测定

试样溶液的测定

,。

在上述色谱条件下将脂肪酸标准测定液及试样测定液分别注入气相色谱仪以色谱峰峰面积定量

6分析结果的表述

6.1试样中单个脂肪酸甲酯含量

():

试样中单个脂肪酸甲酯含量按式计算

1

AiC11×VC11×1.0067

ρ

………()

XF1001

=×××

ii

AC11m

式中:

———,(/);

试样中脂肪酸甲酯含量单位为克每百克

Xiig100g

———脂肪酸甲酯的响应因子;

Fii

———试样中脂肪酸甲酯的峰面积;

Aii

AC11———试样中加入的内标物十一碳酸甲酯峰面积;

———,(/);

十一碳酸甘油三酯浓度单位为毫克每毫升mmL

C11g

ρ

———,();

VC11试样中加入十一碳酸甘油三酯体积单位为毫升mL

———十一碳酸甘油三酯转化成十一碳酸甲酯的转换系数;

1.0067

———,();

m试样的质量单位为毫克mg

100———将含量转换为每100g试样中含量的系数。

4

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

():

脂肪酸甲酯的响应因子按式计算

iFi2

Si×A11

ρ

…………()

Fi=2

ASi×11

ρ

式中:

———脂肪酸甲酯的响应因子;

Fii

———,(/);

混标中各脂肪酸甲酯的浓度单位为毫克每毫升

immL

Sig

ρ

A11———十一碳酸甲酯峰面积;

ASi———脂肪酸甲酯i的峰面积;

———,(/)。

混标中十一碳酸甲酯浓度单位为毫克每毫升mmL

11g

ρ

()

6.2试样中饱和脂肪酸含量

()(),():

试样中饱和脂肪酸含量按式计算试样中单饱和脂肪酸含量按式计算

34

…………()

XSaturatedFat=∑XSFAi3

…………()

XSFA=XFAME×FFAME-FA4

iiii

式中:

———(),(/);

XSaturatedFat饱和脂肪酸含量单位为克每百克g100g

———,(/);

XSFAi单饱和脂肪酸含量单位为克每百克g100g

———,(/);

XFAMEi单饱和脂肪酸甲酯含量单位为克每百克g100g

FFAME-FA———脂肪酸甲酯转化成脂肪酸的系数。

ii

脂肪酸甲酯转换为脂肪酸的转换系数参见附录。脂肪酸甲酯转化成为脂肪酸的系数

FDi

FAME-FA

ii

():

按照式计算

5

MFAi

…………()

FFAME-FA=5

iiMFAMEi

式中:

FFAME-FA———脂肪酸甲酯转化成脂肪酸的转换系数;

ii

MFAi———脂肪酸i的分子质量;

———

MFAMEi脂肪酸甲酯i的分子质量。

()

6.3试样中单不饱和脂肪酸含量

()()(),

试样中单不饱和脂肪酸含量X按式计算试样中每种单不饱和脂肪酸甲酯含

Mono-UnsaturatedFat6

():

量按式计算

7

…………()

XMono-UnsaturatedFat=∑XMUFAi6

…………()

XMUFA=XFAME×FFAME-FA7

iiii

式中:

———(),(/);

XMono-UnsaturatedFat试样中单不饱和脂肪酸含量单位为克每百克g100g

———,(/);

XMUFAi试样中每种单不饱和脂肪酸含量单位为克每百克g100g

———,(/);

XFAMEi每种单不饱和脂肪酸甲酯含量单位为克每百克g100g

。

FFAME-FA———脂肪酸甲酯i转化成脂肪酸的系数

ii

脂肪酸甲酯转化成脂肪酸的系数F参见附录D。

FAME-FA

ii

()

6.4试样中多不饱和脂肪酸含量

()()(),():

试样中多不饱和脂肪酸含量按式计算单个多不饱和脂肪酸含量按式计算

XPol-UnsaturatedFat89

y

5

/w42020228/w42020228

—

GB5009.1682016

…………()

XPol-UnsaturatedFat=∑XPUFA8

yi

…………()

XPUFA=XFAME×FFAME-FA9

iiii

式中:

———(),(/);

XPol-UnsaturatedFa