GB 5009.111-2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定

中华人民共和国国家标准

—

GB5009.1112016

食品安全国家标准

食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

及其乙酰化衍生物的测定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

—

GB5009.1112016

前言

本标准代替/—《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》、/—

GBT5009.1112003GBT23503

《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、/—

2009SNT15712005

《进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法》。

/—,:

本标准与GBT5009.1112003相比主要变化如下

———“

标准名称修改为食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测

定”;

———增加了方法的适用范围;

———增加了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇乙酰化衍生物的测定;

———增加了同位素稀释液相色谱串联质谱法;

-

———增加了固相萃取柱净化的前处理方式;

———增加了免疫亲和柱净化高效液相色谱法;

-

———增加了商业化免疫亲和柱评价技术参数要求。

Ⅰ

—

GB5009.1112016

食品安全国家标准

食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

及其乙酰化衍生物的测定

1范围

本标准规定了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定方法。

,、、、、

第一法为同位素稀释液相色谱串联质谱法适用于谷物及其制品酒类酱油醋酱及酱制品中脱

-

、。

氧雪腐镰刀菌烯醇乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定

3-15-

,、、、、

第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法适用于谷物及其制品酒类酱油醋酱及酱制品中

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。

,,

第三法为薄层色谱测定法第四法为酶联免疫吸附筛查法适用于谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌

烯醇的测定。

第一法同位素稀释液相色谱串联质谱法

-

2原理

、

试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和

3-15-

,,、,

乙腈的混合溶液提取提取上清液经固相萃取柱或免疫亲和柱净化浓缩定容和过滤后超高压液相色

,,。

谱分离串联质谱检测同位素内标法定量

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():。

3.1.1乙腈CHCN色谱纯

3

():。

3.1.2甲醇CHOH色谱纯

3

正己烷()。

3.1.3CH

614

氨水(·)。

3.1.4NHHO

32

3.1.5甲酸(HCOOH)。

():。

3.1.6氮气N2纯度≥99.9%

3.2试剂配制

():,。

乙腈水溶液量取水加入到乙腈中混匀

3.2.1-84+16160mL840mL

:,,

3.2.2乙腈饱和的正己烷溶液量取200mL正己烷于250mL分液漏斗中加入少量乙腈剧烈振摇

,,。

数分钟静置分层弃去下层乙腈层即得

1

—

GB5009.1112016

():,。

甲醇水溶液量取甲醇加入到水中混匀

3.2.3-5+955mL95mL

:,()。

氨水溶液取氨水加入到水中混匀仅供离子源模式为时使用

3.2.40.01%100L1000mLESI-

μ

:,()。

3.2.50.1%甲酸溶液取1mL甲酸加入到1000mL水中混匀仅供离子源模式为ESI+时使用

3.3标准品

(,,:):,

脱氧雪腐镰刀菌烯醇号纯度或经国家认证并授予

3.3.1DONCHOCAS51481-10-8≥99%

15206

标准物质证书的标准物质。

(,,:):,

乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇号纯度或经国家

3.3.23-3-ADONCHOCAS50722-38-8≥99%

17226

认证并授予标准物质证书的标准物质。

(,,:):,

乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇号纯度或经国

3.3.315-15-ADONCHOCAS88337-96-6≥99%

17226

家认证并授予标准物质证书的标准物质。

131313

(,):/,。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇同位素标准溶液纯度

3.3.4C-C-DONCHO25mL≥99%

1515206μg

131313

(,):/,

乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇同位素标准溶液纯度

3.3.5C-3--C-3-ADONCHO25mL

1717226μg

≥99%。

3.4标准溶液配制

(/):、(),

标准储备溶液分别称取和准确至分

3.4.1100mLDON3-ADON15-ADON1m0.01m

μggg

。,,。

别用乙腈溶解并定容至将溶液转移至试剂瓶中在下密封保存有效期年

10mL-20℃1

(/):/、

混合标准工作溶液准确吸取和标准储备液

3.4.210mL100mLDON3-ADON15-ADON

μgμg

,。,。

各1.0mL于同一10mL容量瓶中加乙腈定容至刻度在-20℃下密封保存有效期半年

混合同位素内标工作液(/):准确吸取13和13同位素内标

3.4.31mLC-DONC-3-ADON

μg1517

(/),。,

各于同一容量瓶中加乙腈定容至刻度在下密封保存有效期

25mL1mL25mL-20℃

μg

半年。

:,

3.4.4标准系列工作溶液准确移取适量混合标准工作溶液和混合同位素内标工作液用初始流动相

配制成/、/、/、/、/、/、/的混合标准

10nmL20nmL40nmL80nmL160nmL320nmL640nmL

ggggggg

,/。,。

系列其中同位素内标浓度为100nmL标准系列溶液于4℃保存有效期7d

g

4仪器和设备

:。

液相色谱串联质谱仪带电喷雾离子源

4.1-

:。

4.2电子天平感量0.01g和0.00001g

:/。

4.3高速粉碎机转速10000rmin

4.4匀浆机。

筛网:孔径。

4.50.5mm~1mm

/。

4.6超声波涡旋振荡器或摇床

4.7氮吹仪。

:/。

4.8高速离心机转速不低于12000rmin

:。

移液器量程和

4.910L~100L100L~1000L

μμμμ

4.10固相萃取装置。

:()()

4.11通用型固相萃取柱兼具亲水基团吡咯烷酮基团和疏水基团二乙烯基苯吸附剂填料的固相

,,,。

萃取小柱200m6mL或相当者

g

,。

4.12DONs专用型固相净化柱或相当者

:()。

4.13脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱柱容量≥1000ng柱容量和柱回收率验证方法参见A.2

2

—

GB5009.1112016

水相微孔滤膜:。

4.140.22m

μ

5分析步骤

5.1试样制备

:,,,

5.1.1谷物及其制品取至少1kg样品用高速粉碎机将其粉碎过筛使其粒径小于0.5mm~1mm

,,,,。

孔径试验筛混合均匀后缩分至100g储存于样品瓶中密封保存供检测用

:,、(),

酒类取散装酒至少对于袋装瓶装等包装样品至少取个包装同一批次或号将所有液

5.1.21L3

,(),,。

体试样在一个容器中用均质机混匀后缩分至100mL储存于样品瓶中密封保存供检测用含二

g

,。

氧化碳的酒类样品使用前应先置于4℃冰箱冷藏30min过滤或超声脱气后方可使用

、、:,、(

酱油醋酱及酱制品取至少样品对于袋装瓶装等包装样品至少取个包装同一批次或

5.1.31L3

),,(),,

号将所有液体样品在一个容器中用匀浆机混匀后缩分至100mL储存于样品瓶中密封保存供

g

检测用。

5.2试样提取

:(),

5.2.1谷物及其制品称取2g准确至0.01g试样于50mL离心管中加入400L混合同位素内标

μ

。(),/

工作液振荡混合后静置加入乙腈水溶液置于超声波涡旋振荡器或摇床

30min20.0mL-84+16

。/,。

中超声或振荡离心收集上清液于干净的容器中备用

20min10000rmin5minA

:(),

5.2.2酒类称取5g准确至0.01g试样于50mL离心管中加入200L混合同位素内标工作液振

μ

,,,/

荡混合后静置30min用乙腈定容至10mL混匀置于超声波涡旋振荡器或摇床中超声或振荡

。/,。

离心收集上清液于干净的容器中备用

20min10000rmin5minB

、、:(),

5.2.3酱油醋酱及酱制品称取2g准确至0.01g试样于50mL离心管中加入400L混合同位

μ

。(),/

素内标工作液振荡混合后静置加入乙腈水溶液置于超声波涡旋振荡器

30min20.0mL-84+16

。/,。

或摇床中超声或振荡离心收集上清液于干净的容器中备用

20min10000rmin5minC

5.3试样净化

:,,。

注下述试样的净化方法可根据实际情况选择其中一种方法即可

5.3.1通用型固相萃取柱净化

,

取上清液或上清液或上清液置于离心管中加入乙腈饱和正己烷溶

5mLABC50mL10mL

,,/,,,

液涡旋混合2min5000rmin离心2min弃去正己烷层后于40℃~50℃下氮气吹干加入4mL

,。

水充分溶解残渣待净化

,。

将固相萃取柱连接到固相萃取装置先后用3mL甲醇和3mL水活化平衡将4mL上述水复溶

,。、。

液上柱控制流速为每秒滴滴用水甲醇水溶液依次淋洗柱子后彻底抽干用

1~23mL1mL5%-

,。,

4mL甲醇洗脱收集全部洗脱液后在40℃~50℃下氮气吹干加入1.0mL初始流动相溶解残留物

,,。

涡旋混匀用微孔滤膜过滤于进样瓶中待进样

10s0.22m

μ

5.3.2DONs专用型固相净化柱净化

,

取上清液或上清液或上清液至专用型固相净化柱的玻璃管内将净化柱的填

8mLABCDONs

,。

料管插入玻璃管中并缓慢推动填料管至净化液析出移取5mL净化液于40℃~50℃下氮气吹干加

,,,。

入初始流动相溶解残留物涡旋混匀用微孔滤膜过滤于进样瓶中待进样

1.0mL10s0.22m

μ

:,、,

注使用不同厂商的DONs专用型固相净化柱在上样净化等操作方面可能略有不同可按照说明书要求进行

操作。

3

—

GB5009.1112016

5.3.3免疫亲和柱净化

事先将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

,,

准确移取上清液或上清液或上清液于下氮气吹干加入水充分

5mLABC40℃~50℃2mL

,,。

溶解残渣待免疫亲和柱内原有液体流尽后将上述样液移至玻璃注射器筒中将空气压力泵与玻璃注

,,,。

射器相连接调节下滴速度控制样液以每秒滴的流速通过免疫亲和柱直至空气进入亲和柱中用

1

,,

缓冲盐溶液和水先后淋洗免疫亲和柱流速约为每秒滴滴直至空气进入亲和注

5mLPBS5mL1~2

,,。

中弃去全部流出液抽干小柱

,,,

准确加入甲醇洗脱亲和柱控制每秒滴的下滴速度收集全部洗脱液至试管中在下

2mL150℃

,,,,

用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干加入1.0mL初始流动相涡旋30s溶解残留物0.22m滤膜过滤

μ

收集滤液于进样瓶中以备进样。

:,、,

注使用不同厂商的免疫亲和柱在样品上样淋洗和洗脱的操作方面可能略有不同应该按照说明书要求进行

操作。

()

液相色谱串联质谱参考条件可根据实际情况参考其中一种方法即可

5.4-

+

离子源模式:

5.4.1ESI

液相色谱质谱参考条件列出如下:

-

):(,;),;

a液相色谱柱C柱柱长100mm柱内径2.1mm填料粒径1.7m或相当者

18μ

)::;:;

流动相相甲酸溶液相甲酸乙腈

bA0.1%B0.1%-

)梯度洗脱:(),(),(

c2%B0min~0.8min24%B3.0min~4.0min100%B6.0min~

),();

6.9min2%B6.9min~7.0min

)流速:/;

d0.35mLmin

)柱温:;

e40℃

)进样体积:;

f10L

μ

):;:;:;:/;

g毛细管电压3.5kV锥孔电压30V脱溶剂气温度350℃脱溶剂气流量900Lh

)脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物质谱条件参考表。

h1

+

表脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物质谱参考条件()

1ESI

化合物母离子锥孔电压定量离子碰撞电压定性离子碰撞电压

名称(/)(/)(/)

mzeVmzeVmzeV

DON297202491020316

3-ADON339172311320313

15-ADON3391813793217

13C-DON312202631024516

13

C-3-ADON3561724513——

13

注:和为同分异构体,可选用作为同位素内标进行相应的定量计算。

3-ADON15-ADON15-ADONC-3-ADON