GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定

ICS67.040

C53

中华人民共和国国家标准

GB/T5009.192-2003

动物性食品中克伦特罗残留量的测定

Determinationof4-amino-3,5-dichloro-a

[(tert-butylamino)methyl]-benzylalcohol

(clenbuterol)residuesinanimalfoods

2003-08-11发布2004-01-01实施

中华人民共和国卫生部**

中国国家标准化管理委员会.，.‘

GB/T5009.192-2003

目J1吕

本标准修改采用了EUR15127-EM兽药残留，动物性食品及制品—参考物质和分析方法，2nd

Ed,Sg2.1,Cg2.3,Sg2.4和Cy2.3欧盟兽药残留方法:动物性食品中兽药残留的测定方法))(1994年

英文第二版)。

本标准与欧盟《动物性食品中兽药残留的测定方法)Sg2.l,Sg2.3,Sg2.4和Cy2.3不同之处为:

-Sg2.1,Sg2.3,Sg2.4和C卯3为动物性食品中拼兴奋剂的多组分残留检测方法.

本标准仅提出动物性食品中克伦特罗单一组分残留的检测方法。

一一Sg2.1为牛尿液中民兴奋剂的GC-MS筛选方法，Sg2.3为牛尿液中份兴奋剂的ELISA筛选

方法,Sg2.4为牛肝、肾和肉中卜兴奋剂的GC-MS筛选方法,Cy2.3为牛尿液中卜兴奋剂的

GC-MS确证方法。本标准则提出从酶联免疫法(ELISA)筛选、高效液相色谱法H〔PLC)定量

到气质联机法(GC-MS)确证和定量的一套方法，以满足我国动物性食品中克伦特罗残留监控

的需要。

—本标准中酶联免疫法(ELISA)筛选和气质联机法(GC-MS)的测定原理、操作过程和要求、主

要技术参数及检测灵敏度与欧盟方法一致。本标准中的高效液相色谱法(HPLC)是根据实验

资料及验证结果提出的。

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准起草单位:中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所、中国肉类食品综合研究中心、北京

市疾病预防控制中心。

本标准主要起草人:吴永宁、苗虹、赵云峰、赵京玲、赵榕、吴国华、王凌瑛。

GB/T5009.192-2003

引言

克伦特罗，为强效选择性N一受体激动剂，有强而持久的松弛支气管平滑肌的作用，用于治疗哮喘。

克伦特罗可促进动物生长，改善动物体内脂肪分配，并增加瘦肉率。20世纪90年代，我国错误地将其

作为科研成果开始以饲料添加剂引人并推广，被俗称为“瘦肉精”。一连串因食用含克伦特罗的食物而

引起的中毒事件发生后，使克伦特罗成了世界上普遍禁用的饲料添加剂。1997年以来，我国有关行政

部门多次明令禁止畜牧行业生产、销售和使用盐酸克伦特罗。但我国各地克伦特罗中毒事件仍然频繁

发生，说明非法使用克伦特罗现象依然存在。为了对畜禽产品中的克伦特罗开展监测，加强市场监督检

验力度，预防中毒事件的发生，必须建立有效的检测方法。

我国在这方面的检测工作起步较晚，伴随着国际和国内对克伦特罗的禁用和监控要求，迫切需要发

展适合我国国情的从筛选到确证的一套检测方法。为此，本标准提出了从酶联免疫法(ELISA)筛选、高

效液相色谱法(HPI-C)定量到气质联机法(GC-MS)确证和定量这一套方法来满足我国动物性食品中克

伦特罗残留监控的需要。

GB/T5009.192-2003

动物性食品中克伦特罗残留童的测定

范围

本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。

本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。

本标准也适用于生物材料(人或动物血液、尿液)中克伦特罗的测定。

本方法检出限:第一法气相色谱一质谱法为0.5pg/kg;第二法高效液相色谱法为。.5pg/kg，第三

法酶联免疫法为。5pg/kg。线性范围:第一法气相色谱一质谱法为0.025ng-2.5ng;第二法高效液相

色谱法为0.5ng-4ng;第三法酶联免疫法为0.004ng^-0.054ng,

第一法气相色谱一质谱法(GC-MS)

2原理

固体试样剪碎，用高氯酸溶液匀浆。液体试样加人高氯酸溶液，进行超声加热提取，用异丙醇+乙

酸乙醋(40+60)萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇+浓氨水((98+2)溶液洗脱，洗

脱液浓缩，经N,Q双三甲基硅烷三氟乙酞胺(BSTFA)衍生后于气质联用仪上进行测定。以美托洛尔

为内标，定量。

3试剂

3.1克伦特罗(clenbuterolhydrochloride)，纯度)99.5%.

3.2美托洛尔(metoprolol)，纯度妻99%.

3.3磷酸二氢钠。

3.4氢氧化钠。

3.5氯化钠。

3.6高抓酸。

3.7浓氨水。

3.8异丙醉。

3.9乙酸乙酷。

3.10甲醇;HPLC级。

3.11甲苯:色谱纯。

3.12乙醇。

3.13衍生剂:N,(}双三甲基硅烷三氟乙酞胺(BSTFA).

3.14高氯酸溶液(0.1mol/L),

3.15氢氧化钠溶液(1mol/L)。

3.16磷酸二氢钠缓冲液((0.1mol/L,pH=6.0).

3.17异丙醇十乙酸乙醋(40+60).

3.18乙醇+浓氨水(98+2)。

3.19美托洛尔内标标准溶液:准确称取美托洛尔标准品，用甲醇溶解配成浓度为240mg/L的内标储

备液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成2.4mg/L的内标使用液。

3.20克伦特罗标准溶液:准确称取克伦特罗标准品，用甲醇溶解配成浓度为250mg/L的标准储备

液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成。.5mg/L的克伦特罗标准使用液。

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GB/T5009.192-2003

3.21弱阳离子交换柱(LC-WCX)(3mL),

3.22针筒式微孔过滤膜(0.45um，水相)。

4仪器

4.1气相色谱一质谱联用仪(GC/MS)o

4.2磨口玻璃离心管:11.5cm(长)X3.5cm(内径)，具塞。

4.35mL玻璃离心管。

4.4超声波清洗器。

4.5酸度计。

4.6离心机。

47振荡器。

4.8旋转蒸发器。

4.9涡漩式混合器。

4.10恒温加热器。

4.11Nz一蒸发器。

4.12匀浆器。

5分析步赚

5.1提取

5.1.1肌肉、肝脏、肾脏试样

称取肌肉、肝脏或肾脏试样10g(精确到。.01g)，用20mL0.1mol/L高氛酸溶液匀浆，置于磨口

玻璃离心管中;然后置于超声波清洗器中超声20min，取出置于80℃水浴中加热30min