GB/T 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定

ICS67040

C53

GF3

中华人民共和国国家标准

GB/T5009.22-2003

代替Gs/T5009.22-1996

食品中黄曲霉毒素Bl的测定

DeterminationofaflatoxinB,infoods

2003-08-11发布2004-01-01实施

中华人民共和国卫生部**

中国国家标准化管理委员会‘’.1

GB/T5009.22-2003

oli舀

本标准代替GB/T5009.22-1996食《品中黄曲霉毒素B，的测定方法》。

本标准与GB/T5009.22-1996相比主要修改如下:

—修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食《品中黄曲霉毒素B，的测定》;

一一按照GB/T20001.4-2001标《准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行了

修改。

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准第一法由中国预防医学科学院营养及食品卫生研究所、中华人民共和国青岛进出口商品检

验局负责起草。

本标准第二法由卫生部食品卫生监督检验所、北京市营养源研究所负责起草。

本标准第二法主要起草人:计融、路戈、罗雪云、张铺、王健伟。

本标准于1985年首次发布，于1996年第一次修订，本次为第二次修订。

GB/T5009.22-2003

食品中黄曲霉毒素B,的测定

范围

本标准规定了粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B,的测

定方法

本标准适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B，的

测定。

在第一法中，薄层板上黄曲霉毒素B,的最低检出量为。.0004f}g，检出限为5Kg/kg。第二法对

黄曲霉毒素B，的检出限为。.01u刃kw

第一法

原理

试样中黄曲霉毒素B;经提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据

其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。

3试荆

划三抓甲烷。

23正己烷或石油醚(沸程300C-60℃或600C^900C),

口

︺甲醇。

月

:.﹃

苯。

段︺‘乙睛。

3.0行无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水。

段，了丙酮。

以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行重蒸。

3.8硅胶G:薄层色谱用。

3.9三氟乙酸。

3.10无水硫酸钠。

3.11氯化钠。

3.12苯一乙睛混合液:量取98mL苯，加2mL乙睛，混匀。

3.13甲醇水溶液:55+45.

3.14黄曲霉毒索B,标准溶液

3.14.1仪器校正:测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素。准确称取25mg

经干燥的重铬酸钾(基准级)，用硫酸((0.5+1000)溶解后并准确稀释至200mL，相当于[c(K2Crz07)=

0.0004mot/I.]。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸((0.5+1000)稀释至刻度，相当

于0.0002mot/L溶液。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸((0.5+1000)稀释至刻度，

相当于0.0001mol/L溶液。用1cm石英杯，在最大吸收峰的波长(接近350nm处)用硫酸((0.5+

1000)作空白，测得以上三种不同浓度的摩尔溶液的吸光度，并按式(1)计算出以上三种浓度的摩尔消

光系数的平均值。

179

GB/T5009.22-2003

A。……，.··。。二(1)

式中:

E:—重铬酸钾溶液的摩尔消光系数;

A—测得重铬酸钾溶液的吸光度;

。—重铬酸钾溶液的摩尔浓度。

再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值316。比较，即求出使用仪器的校正因素，按式(2)进

行计算。

了=3F_160(2)

式中:

了—使用仪器的校正因素;

E—测得的重铬酸钾摩尔消光系数平均值。

若f大于。95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可略而不计。

3.14.2黄曲霉毒素B,标准溶液的制备:准确称取1mg-1.2mg黄曲霉毒素B，标准品，先加人2mL

乙睛溶解后，再用苯稀释至100m1_,避光，置于4℃冰箱保存。该标准溶液约为10pg/mL。用紫外分

光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。

结果计算:黄曲霉毒素B,标准溶液的浓度按式(3)进行计算。

AXMX1000X

(3)

E2

式中:

X—黄曲霉毒素B,标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(pg/mL);

A测得的吸光度值;

了—使用仪器的校正因素;

M—黄曲霉毒素B，的分子量312;

及—黄曲霉毒素B，在苯一乙睛混合液中的摩尔消光系数19800,

根据计算，用苯一乙睛混合液调到标准溶液浓度恰为10.0pg/mL，并用分光光度计核对其浓度。

3.14.3纯度的测定:取5pL10pg/mL黄曲霉毒素B,标准溶液，滴加于涂层厚度。.25mm的硅胶G

薄层板上，用甲醇一三氯甲烷((4+96)与丙酮一三氯甲烷(8+92)展开剂展开，在紫外光灯下观察荧光的产

生，应符合以下条件:

3.14.3.、在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点。

3.14.3.2原点上没有任何残留的荧光物质。

3.15黄曲霉毒素B,标准使用液:准确吸取1mL标准溶液(10pg/mL)于10mL容量瓶中，加苯一乙睛

混合液至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于1.0pg黄曲霉毒素B-吸取11..0mL此稀释液，置于5mL

容量瓶中，加苯一乙睛混合液稀释至刻度，此溶液每毫升相当于。.2t}g黄曲霉毒素B,。再吸取黄曲霉毒

素B,标准溶液((0.2pg/mL)1.0mL置于5mL容量瓶中，加苯一乙睛混合液稀释至刻度。此溶液每毫

升相当于。.04Kg黄曲霉毒素B-

3.16次氯酸钠溶液(消毒用):取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠

(Na,M·IOH}O)溶于500mL温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。此滤液含次抓酸浓度约为

25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50g/L。污染的玻璃仪器用

10g/L次抓酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。

仪器

41小型粉碎机。

IA0

GB/T5009.22-2003

4.2样筛。

4.3电动振荡器。

4.4全玻璃浓缩器。

4.5玻璃板:5cmX20cm,

4.6薄层板涂布器。

4.7展开槽:内长25cm、宽6cm、高4cm.

4.8紫外光灯:100W-125W，带有波长365nm滤光片。

4.9微量注射器或血色素吸管。

5分析步骤

5.1取样

试样中污染黄曲霉毒素高的霉粒一粒可以左右测定结果，而且有毒霉粒的比例小，同时分布不均

匀。为避免取样带来的误差，应大量取样，并将该大量试样粉碎，混合均匀，才有可能得到确能代表一批

试样的相对可靠的结果，因此采样应注意以下几点。

5.1.1根据规定采取有代表性试样。

5.1.2对局部发霉变质的试样检验时，应单独取样。

5.1.3每份分析测定用的试样应从大样经粗碎与连续多次用四分法缩减至。.5kg-1kg，然后全部粉

碎。粮食试样全部通过20目筛，混匀。花生试样全部通过10目筛，混匀。或将好、坏分别测定，再计算

其含量。花生油和花生酱等试样不需制备，但取样时应搅拌均匀。必要时，每批试样可采取3份大样作

试样制备及分析测定用，以观察所采试样是否具有一定的代表性。

5.2提取

5.2.1玉米、大米、麦类、面粉、.千、豆类、花生、花生奋等