GB 5009.25-2016 食品安全国家标准 食品中杂色曲霉素的测定

中华人民共和国国家标准

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GB5009.252016

食品安全国家标准

食品中杂色曲霉素的测定

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

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GB5009.252016

前言

/—《》/—《

本标准代替GBT5009.252003植物性食品中杂色曲霉素的测定和SNT24832010进出口

粮谷中柄曲霉素含量检测方法液相色谱法》。

/—,:

本标准与GBT5009.252003相比主要变化如下

———“”;

标准名称修改为食品安全国家标准食品中杂色曲霉素的测定

———增加了液相色谱串联质谱法;

-

———增加了液相色谱法。

Ⅰ

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GB5009.252016

食品安全国家标准

食品中杂色曲霉素的测定

1范围

本标准规定了液相色谱串联质谱法和高效液相色谱法测定杂色曲霉素的测定方法。

-

、、、。

本标准适用于大米玉米小麦黄豆及花生中杂色曲霉素的测定

第一法液相色谱串联质谱法

-

2原理

,、、,,

试样中的杂色曲霉素乙腈水溶液提取经涡旋超声离心取上清液经稀释通过固相萃取柱或免

-

、、、,,,

疫亲和柱净化浓缩甲醇水溶液定容微孔滤膜过滤液相色谱分离电喷雾离子源离子化多反应离

-

,。

子监测检测同位素内标法定量

3试剂和材料

,,/。

除非另有说明本方法使用的试剂均为分析纯水为GBT6682规定的一级水

3.1试剂

():。

3.1.1乙腈CHCN色谱纯

3

():。

3.1.2甲醇CHOH色谱纯

3

氯化钠()。

3.1.3NaCl

磷酸氢二钠()。

3.1.4NaHPO

24

磷酸二氢钾()。

3.1.5KHPO

24

3.1.6盐酸。

氯化钾()。

3.1.7KCl

3.2试剂配制

():,,。

乙腈水溶液取乙腈加水混匀

3.2.1-80+20800mL200mL

():,,。

乙腈水溶液取乙腈加水混匀

3.2.2-40+60400mL600mL

():,,。

甲醇水溶液取甲醇加水混匀

3.2.3-40+60400mL600mL

():,,。

甲醇水溶液取甲醇加水混匀

3.2.4-70+30700mL300mL

():,(

3.2.5磷酸盐缓冲溶液以下简称PBS称取8.0g氯化钠1.2g磷酸氢二钠或2.92g十二水磷酸氢

),,,,,

二钠磷酸二氢钾氯化钾用水溶解用盐酸调节至用水定容

0.2g0.2g900mLpH7.4

至1000mL。

1

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GB5009.252016

3.3标准品

(,:):,

杂色曲霉素标准品号纯度或经国家认证并授予标准物

3.3.1CHOCAS10048-13-2≥99%

18126

质证书的标准物质。

13:/,。

杂色曲霉素同位素内标或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质

3.3.2C-25mL

18μg

3.4标准溶液配制

(/):(),

3.4.1标准储备溶液100mL准确称取杂色曲霉素标准品1.00m准确至0.01m用甲醇溶

μggg

。,,。

解并定容至溶液转移至试剂瓶中后密封后下保存保存期个月

10mL-20℃6

(/):,

3.4.2标准工作液1mL准确移取1.00mL的杂色曲霉素标准储备溶液至100mL容量瓶中用

μg

。,。

甲醇定容下保存保存期个月

-20℃3

同位素内标工作液(/):准确移取杂色曲霉素同位素内标(/)至

3.4.31.0mL25mL0.40mL

μgμg

,。,。

容量瓶中用甲醇定容下保存保存期个月

10mL-20℃3

:,/

3.4.4标准系列工作溶液准确移取标准工作液适量至5mL容量瓶中加入50L1.0mL的同位

μμg

,()(/、/、

素内标工作液用甲醇水溶液定容至刻度含杂色曲霉素浓度为

-70+301nmL2nmL

gg

/、/、/、/、/、/),。

5nmL10nmL20nmL30nmL40nmL50nmL系列标准溶液临用前配制

gggggg

3.5材料

:()。

3.5.1免疫亲和柱柱容量≥600ng柱容量验证方法参见B.2

:(/),。

固相萃取柱乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯共聚物填料柱或相当者使用前

3.5.2N-200m6mL

g

分别用5mL甲醇和5mL水活化。

微孔滤膜:。

3.5.30.22m

μ

4仪器和设备

:。

液相色谱串联质谱仪配电喷雾离子源

4.1-

4.2高速粉碎机

4.3涡旋混合器。

4.4超声波发生器。

:。

4.5天平感量为0.01g和0.00001g

:/。

4.6离心机转速≥6000rmin

()。

4.7固相萃取装置带真空泵

4.8氮吹仪。

试验筛:孔径。

4.91mm~2mm

5分析步骤

5.1试样制备

,。

样品用高速粉碎机将其粉碎后过1mm~2mm孔径试验筛混合均匀后取试样100g用于检测

5.2试样提取

()(:),

称取5g均质试样精确至0.01g至50mL离心管中花生和黄豆样品称取2g均质试样加入

2

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GB5009.252016

,(),,/

同位素内标工作液加入乙腈水溶液涡旋混匀后超声在下

100L20.0mL-80+2010min6000rmin

μ

,。

离心10min取上清液备用

5.3净化

5.3.1固相萃取柱净化

准确移取2.0mL上述上清液用水稀释至8mL待上样。

,/。,

将上样液转移至活化好的固相萃取柱中控制样液以约3mLmin的速度稳定下滴上样完毕后

()、()。,

依次加入的乙腈水溶液的甲醇水溶液淋洗待淋洗结束后用真空泵

5mL-40+605mL-40+60

,,/,,

抽干固相萃取柱加入6mL乙腈洗脱控制流速为约3mLmin用真空泵抽干固相萃取柱收集洗脱

。,(),,

液在下用氮气缓缓吹至干用甲醇水溶液定容至涡旋溶解残留物

60℃-70+301.0mL30s

,。。

0.22m滤膜过滤收集滤液于进样瓶中以备进样按同一操作方法做空白试验

μ

5.3.2免疫亲和柱净化

,。

准确移取2mL上述上清液加入28mLPBS混匀

。,,

将50mL一次性注射器筒与亲和柱的顶部相连将上述样液移至注射器筒中调节下滴速度控

/。,

制样液以约的速度稳定下滴待样液滴完后往注射器筒内依次加入和

3mLmin10mLPBS10mL

,。,。

水以稳定流速淋洗免疫亲和柱待水滴完后用真空泵抽干亲和柱在亲和柱下部放置10mL刻度

,,,/,

试管取下50mL的注射器筒加入2mL乙腈洗脱亲和柱控制约3mLmin的自然下滴速度收集全

,。,

部洗脱液至刻度试管中用真空泵抽干亲和柱在下用氮气缓缓地将洗脱液吹至干用甲醇水溶

60℃-

(),,,。

液70+30定容至1.0mL涡旋30s溶解残留物0.22m滤膜过滤收集滤液于进样瓶中以备进样

μ

按同一操作方法做空白试验。

:,。

注可根据实验室实际情况选择上述净化方法中的一种净化方法即可

5.4仪器参考条件

5.4.1色谱参考条件

):,,,,;

a液相色谱柱C柱柱长100mm内径2.1mm粒径1.8m或相当色谱柱

18μ

)::,:;

流动相相水相甲醇

bAB

)梯度洗脱条件:(),(),();

c70%B0min~5min100%B5min~8min70%B8min~12min

)流速:/;

d0.2mLmin

)色谱柱柱温:;

e40℃

)进样量:。

f10L

μ

5.4.2质谱参考条件

):();

a检测方式多离子反应监测MRM

)质谱条件及离子选择参数参见表;

bA.1

)子离子扫描图参见图图;

cA.1~A.2

)液相色谱质谱图见图。

d-A.3

5.5标准曲线制作

,,

将标准系列工作溶液按浓度由低到高注入液相色谱串联质谱仪中测得相应色谱峰的