GB 5009.33-2010 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定

中华人民共和国国家标准

GB5009.33—2010

食品安全国家标准

食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定

Nationalfoodsafetystandard

Determinationofnitriteandnitrateinfoods

2010-03-26发布2010-06-01实施

中华人民共和国卫生部发布

GB5009.33—2010

前言

本标准代替GB/T5009.33-2008《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》。

本标准与GB/T5009.33-2008相比，主要变化如下：

——第一法中增加粉状婴幼儿配方食品的淋洗条件；

——删除第三法示波极谱法，增加“乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定”作为第三法。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

——GB5009.33-1985、GB/T5009.33-1996、GB/T5009.33-2003、GB/T5009.33-2008。

I

GB5009.33—2010

食品安全国家标准

食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定

1范围

本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法。

本标准适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。

第一法离子色谱法

2原理

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子

交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。

3试剂和材料

3.1超纯水：电阻率＞18.2MΩ•cm。

3.2乙酸（CH3COOH）：分析纯。

3.3氢氧化钾（KOH）：分析纯。

3.4乙酸溶液（3%）：量取乙酸（3.2）3mL于100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀。

3.5亚硝酸根离子（NO2-）标准溶液（100mg/L，水基体）。

3.6硝酸根离子（NO3-）标准溶液（1000mg/L，水基体）。

3.7亚硝酸盐（以NO2-计，下同）和硝酸盐（以NO3-计，下同）混合标准使用液：准确移取亚硝酸根

离子（NO2-）和硝酸根离子（NO3-）的标准溶液各1.0mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶

液每1L含亚硝酸根离子1.0mg和硝酸根离子10.0mg。

4仪器和设备

4.1离子色谱仪：包括电导检测器，配有抑制器，高容量阴离子交换柱，50μL定量环。

4.2食物粉碎机。

4.3超声波清洗器。

4.4天平：感量为0.1mg和1mg。

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4.5离心机：转速≥10000转/分钟，配5mL或10mL离心管。

4.60.22μm水性滤膜针头滤器。

4.7净化柱：包括C18柱、Ag柱和Na柱或等效柱。

4.8注射器：1.0mL和2.5mL。

注：所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol/L氢氧化钾和水分别浸泡4h，然后用水冲洗3次～5次，晾干备用。

5分析步骤

5.1试样预处理

5.1.1新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分

法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。

5.1.2肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。

5.1.3乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品(不包括干酪)：将试样装入能够容纳2倍试样体积的

带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。

5.1.4发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。

5.1.5干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热

量。

5.2提取

5.2.1水果、蔬菜、鱼类、肉类、蛋类及其制品等：称取试样匀浆5g（精确至0.01g，可适当调整试

样的取样量，以下相同），以80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每隔5min振摇一次，

保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤

后，取部分溶液于10000转/分钟离心15min，上清液备用。

5.2.2腌鱼类、腌肉类及其它腌制品：称取试样匀浆2g（精确至0.01g），以80mL水洗入100mL容

量瓶中，超声提取30min，每5min振摇一次，保持固相完全分散。于75℃水浴中放置5min，取出放

置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000转/分钟离心15min，上清液备

用。

5.2.3乳：称取试样10g（精确至0.01g），置于100mL容量瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，

加入3%乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，

取上清液备用。

5.2.4乳粉：称取试样2.5g（精确至0.01g），置于100mL容量瓶中，加水80mL，摇匀，超声30min，

加入3%乙酸溶液2mL，于4℃放置20min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，

取上清液备用。

5.2.5取上述备用的上清液约15mL，通过0.22μm水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面3mL（如果

氯离子大于100mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和Na柱，弃去前面7mL），收集后面

洗脱液待测。

固相萃取柱使用前需进行活化，如使用OnGuardIIRP柱（1.0mL）、OnGuardIIAg柱（1.0mL）

和OnGuardIINa柱（1.0mL）1，其活化过程为：OnGuardIIRP柱（1.0mL）使用前依次用10mL甲

醇、15mL水通过，静置活化30min。OnGuardIIAg柱（1.0mL）和OnGuardIINa柱（1.0mL）用10

1给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用

这些等效的产品。

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GB5009.33—2010

mL水通过，静置活化30min。

5.3参考色谱条件

5.3.1色谱柱：氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱，如DionexIonPacAS11-HC

4mm×250mm（带IonPacAG11-HC型保护柱4mm×50mm）1，或性能相当的离子色谱柱。

5.3.2淋洗液

5.3.2.1一般试样：氢氧化钾溶液，浓度为6mmol/L～70mmol/L；洗脱梯度为6mmol/L30min，70

mmol/L5min，6mmol/L5min；流速1.0mL/min。

5.3.2.2粉状婴幼儿配方食品：氢氧化钾溶液，浓度为5mmol/L～50mmol/L；洗脱梯度为5mmol/L33

min，50mmol/L5min，5mmol/L5min；流速1.3mL/min。

5.3.3抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置。

5.3.4检测器：电导检测器，检测池温度为35℃。

5.3.5进样体积：50μL（可根据试样中被测离子含量进行调整）。

5.4测定

5.4.1标准曲线

移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成系列标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为

0.00mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L；硝酸根

离子浓度为0.0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的混合

标准溶液，从低到高浓度依次进样。得到上述各浓度标准溶液的色谱图（图1）。以亚硝酸根离子或硝

酸根离子的浓度（mg/L）为横坐标，以峰高（μS）或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归

方程。

图1亚硝酸盐和硝酸盐混合标准溶液的色谱图

5.4.2样品测定

分别吸取空白和试样溶液50μL，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据

保留时间定性，分别测量空白和样品的峰高（μS）或峰面积。

6分析结果的表述

试样中亚硝酸盐（以NO2-计）或硝酸盐（以NO3-计）含量按式（1）计算：

3

GB5009.33—2010

(c−c0)×V×f×1000

X…………（1）

m×1000

式中：

X——试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

c——测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

c——试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

0

V——试样溶液体积，单位为毫升（mL）；

f——试样溶液稀释倍数；

m——试样取样量，单位为克（g）。

说明：试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5，即得亚硝酸盐（按亚硝酸钠计）含量；

试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37，即得硝酸盐（按硝酸钠计）含量。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

7精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的10%。

第二法分光光度法

8原理

亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用镉柱还原法测定。

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙

二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸

盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。

9试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的二级水或去离子水。

9.1亚铁氰化钾（KFe(CN)·3HO）。

462

9.2乙酸锌（Zn(CHCOO)·2HO）。

322

9.3冰醋酸（CH3COOH）。

9.4硼酸钠（NaBO·10HO）。

2472

9.5盐酸（ρ＝1.19g/mL）。

9.6氨水（25%）。

9.7对氨基苯磺酸(CHNOS）。

673

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9.8盐酸萘乙二胺(CHN·2HCl）。

12142

9.9亚硝酸钠（NaNO2）。

9.10硝酸钠（NaNO3）。

9.11锌皮或锌棒。

9.12硫酸镉。

9.13亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾（9.1），用水溶