GB 4789.29-2020 食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)

GB

中华人民共和国国家标准

GB4789.29-2020

食品安全国家标准

食品微生物学检验

唐富蒲伯克霍尔德氏菌

（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验

2020-09-11发布2021-03-11实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

国家市场监督管理总局

GB4789.29-2020

前同＝－

本标准代替GB/T4789.29-2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》，

本标准与GB/T4789.292003相比，主要变化如下g

标准名称修改为“食品安全国家标准食品微生物学检验唐富蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单

胞菌酵米面亚种）检验”g

一一修改了范围；

一一修改了设备和材料P

修改了培养基和试剂g

修改了检验程序s

增加了结果报告e

增加了附录A"

I

GB4789.29-2020

食晶安全国家标准

食晶微生物学检验

唐富蒲伯克霍尔德氏菌

（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验

1范围

本标准规定了食品中唐富蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）[Burkholderiagladioli

(Pseudo隅。nascocovenenanssubsp.farinofermentans）］的检验方法。

本标准适用于食品中唐富蒲伯克霍尔德民菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）的检验。

2设备和材料

2.1实验室常规灭菌设备。

2.2冰箱：2℃～8℃、－20℃～－30℃。

2.3恒温培养箱，26℃±1℃、36℃±1℃。

2.4恒温水浴锅：46℃土1℃。

2.5显微镜，10倍～100倍。

2.6均质器。

2.7离心机，3000r/min。

2.8电子天平s感量0.1g。

2.9比浊计。

2.10锥形瓶2容量100mL、500mLo

2.11元菌培养皿z直径90mm、直径150mmo

2.12元菌透明玻璃纸、滤纸．

2.13元菌灌胃器，1mLo

2.14微生物生化鉴定系统。

2.15小鼠，18g~20g，每一批次试验应使用同一品系的KM或ICR小鼠。

3培养基和试剂

3.1GVC增菌液．见A.I。

3.2改良马铃薯葡萄糖琼脂（mPDA）：见A.2。

3.3马铃薯葡萄糖琼脂CPDA）：见A.2.lo

3.4PCFA培养基＝见A.3。

3.5马铃薯葡萄糖半固体琼脂z见A.40

3.6卵黄琼脂＝见A.50

3.7革兰氏染色液z见A.60

3.8氧化酶试剂＝见A.7o

1

GB4789.29-2020

3.9Hugh-Leifson培养基（0/F试撞用）：见A.8..

3.10蛋白陈水〈能基质试验用）：见A.9.

3.11缓冲葡萄糖蛋白陈水（MR和V-P试验用）＇见A.lo.

3.12西蒙民梓糠酸盐培养基z见A.13.

3.13苯丙氨酸培养基：见A.14.

3.14糖发酷管z见A.15.

3.15半固体琼脂z见A.16.

3.16抗0多价血清、型特异性因子血清（0-ill、0－町、0-V、0－咽、0－砸、0－回〉．

3.17生化鉴定试剂盒．

4撞撞程序

唐富蒲伯克霍尔德民菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种〉撞撞程序见图lo

检样

1.鲜银耳tg+20mLGVC增留液

2.其他食品25g(mL)+225mLGVC增菌液

36℃士1℃I20h~24h

ml'DA和PCFA

36℃±l℃I241、～48h

革兰氏染色氧化酶试验

卵黄琼脂平板

36℃士1℃148h士2h

PDA平板

36'C±I'Cl24h士2h

每位试验

血泊学分型｛可选择项〉

生化试验

26'C士1℃15d

米喜事商酸测定

结果报告

固1唐菌葡伯克霍尔德氏菌〈椰霉假单胞菌醉米面亚种〉栓验程序

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GB4789.29-2020

5操作步骤

5.1样晶处理

元菌操作称取25g(mL）样品，置人盛有225mLGVC增菌液的无菌均质袋中（鲜银耳样品取1g,

用剪刀剪碎，加入盛有20mLGVC增菌液的无菌均质袋中），用拍击式均质器拍打1min~2min；或置

人盛有225mLGVC增菌液的元菌均质杯中，以8000r/min~10000r/min均质1min~2min；若样

品为液态，振荡混匀。

5.2增菌

将上述样品增菌液置36℃±1℃培养20h~24h。

5.3分离

用直径3mm的接种环取增菌液一环，分别划线接种于mPDA平板和PCFA平板，36℃土1℃培

养24h~48h。观察各个平板上生长的菌落，各个平板上菌落特征见表L

表1唐富蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）在不同分商平板上的菌落特征

菌落特征

培养基

培养24h后，菌落1mm~Zmm，紫色，光滑、湿润、边缘整齐；培养48h后，部分

mPDA平板

菌落中心可有呈草帽状凸起

PCFA平板培养24h后，菌落0.5mm~1mm，灰白色，光滑、湿润、边缘整齐

培养24h后，菌落2mm～3m皿，表面光滑、湿润s培养48h后，菌落周围形成乳

卵黄琼脂平板

白色混浊环，斜射光下可见菌落及周围培养基表面呈虹彩现象

5.4初筛试验

自选择性琼脂平板上分别挑取5个以上典型或可疑菌落（低于5个全选），分区划线接种于卵黄琼

脂平板，36℃土1℃培养。挑取培养18h~24h的菌落进行革兰民染色及氧化酶试验。对于革兰氏染

色阴性、氧化酶试验阴性的菌继续培养至48h土2h，对于卵磷脂酶阳性，带有虹彩环的单个菌落，接种

PDA平板，36℃士1℃培养24h土2h0

5.5生化试验

从纯培养的PDA平板上挑取菌苔进行生化鉴定。唐富蒲伯克霍尔德民菌（椰毒假单胞菌酵米面

亚种）生化特征见表20可选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统。

表2唐菌蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）生化特征

征

生化试验特

十

O/F试验（氧化型〉

氧化

葡萄糖+

3

GB4789.29-2020

表2（续）

生化试验特征

果糖+

木糖+

十

半乳糖

底糖

十

阿拉伯糖

甘露酶+

侧金盏花酶+

肌醇+

卫茅醇+

动力+

十

卵磷脂酶

氧化酶

十

尿素

明胶液化+

硝酸盐还原+

拧棱酸盐利用+

+

精氨酸

石施牛乳+

青童基质

V-P

MR

苯丙氨酸脱氨酶

H,S产生

注：＋表示阳性$表示阴性。

5.6血清学分型（可选择项〉

5.6.1菌体抗原的制备

将PDA平板36℃±1℃培养24h±2h的培养物用无菌生理盐水洗下，沸水浴(100℃）2h,

3000r/min10min离心弃上清液，再用无菌生理盐水稀释至5×10'CFU/mL~1×10'CFU/mL

菌悬液，作为凝集试验用抗原。

5.6.2菌体抗原的鉴定

用多价血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。与多价血清凝集者，依次用0-III、0－町、0-

V、OVI、OVII、0回因子血清做试管凝集试验。根据试验结果，判定菌体抗原型。在生理盐水中自凝

者不能分型。生化特征符合，但不能与以上血清凝集者，需保留菌株做进一步鉴定。

4

GB4789.29-2020

5.7毒性试验

5.7.1产毒培养

将初步鉴定为唐富蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）的菌株接种PDA平板，36℃±1

℃，培养24h士2h，用灭菌接种环刮取适量菌苔，加到3mL无菌生理盐水的试管中，配成1麦氏浓度

(McFarla时，MCF）的菌悬液（约为1