GB 4789.3-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数

中华人民共和国国家标准

GB4789.3—2010

食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

Nationalfoodsafetystandard

Foodmicrobiologicalexamination:Enumerationofcoliforms

中华人民共和国卫生部发布

2010-03-26发布2010-06-01实施

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GB4789.3—2010

I

前言

本标准代替GB/T4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。

本标准与GB/T4789.3-2008相比，主要修改如下：

——修改了标准的中英文名称；

——“第二法大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“15CFU～150CFU”；

——删除了“第三法大肠菌群PetrifilmTM测试片法”。

本标准的附录A、附录B为规范性附录。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

——GB4789.3-1984、GB4789.3-1994、GB/T4789.3-2003、GB/T4789.3-2008。

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食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

1范围

本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。

本标准适用于食品中大肠菌群的计数。

2术语和定义

2.1大肠菌群coliforms

在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2.2最可能数mostprobablenumber，MPN

基于泊松分布的一种间接计数方法。

3设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

3.1恒温培养箱：36℃±1℃。

3.2冰箱：2℃～5℃。

3.3恒温水浴箱：46±1℃℃。

3.4天平：感量0.1g。

3.5均质器。

3.6振荡器。

3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

3.8无菌锥形瓶：容量500mL。

3.9无菌培养皿：直径90mm。

3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3.11菌落计数器。

4培养基和试剂

4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1。

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4.2煌绿乳糖胆盐（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉汤：见附录A中A.2。

4.3结晶紫中性红胆盐琼脂（VioletRedBileAgar，VRBA）：见附录A中A.3。

4.4磷酸盐缓冲液：见附录A中A.4。

4.5无菌生理盐水：见附录A中A.5。

4.6无菌1mol/LNaOH：见附录A中A.6。

4.7无菌1mol/LHCl：见附录A中A.7。

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第一法大肠菌群MPN计数法

5检验程序

大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1大肠菌群MPN计数法检验程序

6操作步骤

6.1样品的稀释

6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,

8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋

中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。

6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶

（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

6.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。

36℃±1℃48h±2h

36℃±1℃48h±2h

检样

25g(mL)样品+225mL稀释液，均质

10倍系列稀释

选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管

产气不产气

BGLB肉汤

不产气产气

大肠菌群阳性大肠菌群阴性

查MPN表

报告结果

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6.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液

或生理盐水的无菌试管