GB 4789.10-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验

中华人民共和国国家标准

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GB4789.102016

食品安全国家标准

食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验

2016-12-23发布2017-06-23实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

国家食品药品监督管理总局

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GB4789.102016

前言

本标准代替—《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、

GB4789.102010

/—《进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法》、/—《进出口食品中凝固酶

SNT01722010SNT21542008

阳性葡萄球菌检测方法兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基技术》。

—,:

本标准与GB4789.102010相比主要变化如下

———试验用增菌液统一为7.5%氯化钠肉汤。

Ⅰ

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GB4789.102016

食品安全国家标准

食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验

1范围

本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌()的检验方法。

Stahlococcusaureus

py

;

本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的

;。

食品中金黄色葡萄球菌的计数第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品中金黄色葡萄球菌的计数

2设备和材料

,:

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外其他设备和材料如下

恒温培养箱:。

2.136℃±1℃

冰箱:。

2.22℃~5℃

恒温水浴箱:。

2.336℃~56℃

:。

2.4天平感量0.1g

2.5均质器。

2.6振荡器。

:()、()。

无菌吸管具刻度具刻度或微量移液器及吸头

2.71mL0.01mL10mL0.1mL

:、。

2.8无菌锥形瓶容量100mL500mL

:。

2.9无菌培养皿直径90mm

2.10涂布棒。

2.11H计或H比色管或精密H试纸。

ppp

3培养基和试剂

:。

3.17.5%氯化钠肉汤见A.1

:。

3.2血琼脂平板见A.2

:。

3.3Baird-Parker琼脂平板见A.3

():。

脑心浸出液肉汤见

3.4BHIA.4

:。

3.5兔血浆见A.5

::。

3.6稀释液磷酸盐缓冲液见A.6

:。

3.7营养琼脂小斜面见A.7

:。

3.8革兰氏染色液见A.8

:。

3.9无菌生理盐水见A.9

第一法金黄色葡萄球菌定性检验

4检验程序

金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1。

1

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GB4789.102016

图金黄色葡萄球菌检验程序

1

5操作步骤

5.1样品的处理

称取样品至盛有氯化钠肉汤的无菌均质杯内,//均质

25g225mL7.5%8000rmin~10000rmin

,,

1min~2min或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均质袋中用拍击式均质器拍打1min~

。,(

2min若样品为液态吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶瓶内可预置适

),。

当数量的无菌玻璃珠中振荡混匀

5.2增菌

将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h~24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊

生长。

5.3分离

,,

将增菌后的培养物分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板血平板36℃±1℃培养18h~

。平板培养。

24hBaird-Parker36℃±1℃24h~48h

5.4初步鉴定

,、、、,

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形表面光滑凸起湿润菌落直径为2mm~3mm

,,(),(),

颜色呈灰黑色至黑色有光泽常有浅色非白色的边缘周围绕以不透明圈沉淀其外常有一清晰

。。,

带当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感有时可见到不分解脂肪的菌株除没有不透明圈和清

,。,,

晰带外其他外观基本相同从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落其黑色常较典型菌落浅些

,。,,、、、(

且外观可能较粗糙质地较干燥在血平板上形成菌落较大圆形光滑凸起湿润金黄色有时为白

2

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GB4789.102016

),。。

色菌落周围可见完全透明溶血圈挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验

5.5确证鉴定

:,,,,

5.5.1染色镜检金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌排列呈葡萄球状无芽胞无荚膜直径约为

0.5m~1m。

μμ

:(),

血浆凝固酶试验挑取平板或血平板上至少个可疑菌落小于个全选分别接

5.5.2Baird-Parker55

种到和营养琼脂小斜面,培养。

5mLBHI36℃±1℃18h~24h

,,,,

取新鲜配制兔血浆0.5mL放入小试管中再加入BHI培养物0.2mL~0.3mL振荡摇匀置

,,,(,

36℃±1℃温箱或水浴箱内每半小时观察一次观察6h如呈现凝固即将试管倾斜或倒置时呈现

),。

凝块或凝固体积大于原体积的一半被判定为阳性结果同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌

。,,。

菌株的肉汤培养物作为对照也可用商品化的试剂按说明书操作进行血浆凝固酶试验

,,,。

结果如可疑挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI36℃±1℃培养18h~48h重复试验

()

5.6葡萄球菌肠毒素的检验选做

,

可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定应按附录检测葡萄球

B

菌肠毒素。

6结果与报告

:、,。

6.1结果判定符合5.45.5可判定为金黄色葡萄球菌

:()。

6.2结果报告在25mL样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌

g

第二法金黄色葡萄球菌平板计数法

7检验程序

金黄色葡萄球菌平板计数法检验程序见图2。

图金黄色葡萄球菌平板计数法检验程序

2

3

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GB4789.102016

8操作步骤

8.1样品的稀释

:

8.1.1固体和半固体样品称取25g样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯

,//,,

内8000rmin~10000rmin均质1min~2min或置于盛有225mL稀释液的无菌均质袋中用拍

,。

击式均质器拍打1min~2min制成1∶10的样品匀液

:

8.1.2液体样品以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形

(),,。

瓶瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠中充分混匀制成1∶10的样品匀液

,

用无菌吸管或微量移液器吸取样品匀液沿管壁缓慢注于盛有磷酸盐

8.1.31mL1∶101mL9mL

(),

缓冲液或生理盐水的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面振摇试管或换用支

11mL

,。

无菌吸管反复吹打使其混合均匀制成1∶100的样品匀液

,。,

按操作程序制备倍系列稀释样品匀液每递增稀释一次换用次无菌吸管或

8.1.48.1.31011mL

吸头。

8.2样品的接种

,(),

根据对样品污染状况的估计选择个个适宜稀释度的样品匀液液体样品可包括原液在进

2~3

,、、

行倍递增稀释的同时每个稀释度分别吸取样品匀液以接种量分别

101mL0.3mL0.3mL0.4mL

,,。,

加入三块Baird-Parker平板然后用无菌涂布棒涂布整个平板注意不要触及平板边缘使用前如

,,。

Baird-Parker平板表面有水珠可放在25℃~50℃的培养箱里干燥直到平板表面的水珠消失

8.3培养

,,,,

在通常情况下涂布后将平板静置10min如样液不易吸收可将平板放在培养箱36℃±1℃培

;,。

养1h等样品匀液吸收后翻转平板倒置后于36℃±1℃培养24h~48h

8.4典型菌落计数和确认

,、、、

8.4.1金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上呈圆形表面光滑凸起湿润菌落直径为2mm~

,,,(),(),

3mm颜色呈灰黑色至黑色有光泽常有浅色非白色的边缘周围绕以不透明圈沉淀其外常有一

。。,

清晰带当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感有时可见到不分解脂肪的菌株除没有不透明圈

,。,

和清晰带外其他外观基本相同从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落其黑色常较典型菌落浅

,,。

些且外观可能较粗糙质地较干燥

,

选择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板且同一稀释度个平板所有菌落数合计在

8.4.2320CFU~

,。

200CFU之间的平板计数典型菌落数

()。,

从典型菌落中至少选个可疑菌落小于个全选进行鉴定试验分别做染色镜检血浆凝固

8.4.355

();