GBZ/T(卫生) 240.16-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第16部分：亚急性经皮毒性试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.162011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分亚急性经皮毒性试验

16

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part16Sub-acutedermaltoxicittest

y

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.162011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分亚急性经皮毒性试验

16

1范围

/(/)、、

GBZT240的本部分规定了动物亚急性经皮毒性试验21d28d的试验目的试验概述试验方

、、。

法数据处理与结果评价评价报告和结果解释

(/)。

本部分适用于检测化学品的亚急性经皮21d28d毒性

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

/ㅤㅤㅤㅤ。

GBZT240.1确立的术语和定义适用于本文件

4试验目的

,

为获得一定时期内反复多次经皮染毒受试样品而引起的健康危害以明确化学物对动物的蓄积作

,,、。

用及其靶器官并确定其和为亚慢性慢性毒性或致癌试验的剂量设计提供依据

NOAELLOAEL

5试验概述

,,

在或内以不同剂量的受试样品每日给各组实验动物连续经皮染毒染毒期间每日密切

21d28d

,。

观察动物的毒性反应期间死亡或试验结束被处死的动物要进行解剖

6试验方法

6.1受试样品处理

。,,

液态受试样品一般使用原液不溶性或难溶固体或颗粒状受试样品应研磨过150m孔径筛并

μ

、、、,

用水或其他无毒无刺激性不影响其经皮吸收也不与受试样品反应的介质配制成溶液或混悬液以保

证受试样品与皮肤的良好接触。

6.2实验动物和饲养环境

6.2.1实验动物

、,,。

一般选用健康成年大鼠家兔或豚鼠其他种属动物亦可使用但须说明理由大鼠体重应为

1

/—

GBZT240.162011

;;,。

200~300豚鼠350~450家兔2000~3000以保证足够的染毒面积

gggggg

6.2.2饲养条件

,。。

动物最好单笼饲养大鼠群养时每笼不超过只动物实验室应符合国家相应规定

5

6.3剂量设计

。,

动物应随机分配到试验组与对照组中试验至少设三个剂量组和一个对照组还可增设一个附加

,()。,。

组每组至少应有只雌雄各半皮肤健康的动物若计划在试验过程中处死动物应增加动物数

10

,

高染毒剂量的设计应为引起动物明显毒效应但不造成动物死亡中剂量应引起较轻的可观察到的毒性

,。。

效应低剂量应不出现任何毒效应剂量组的剂量间距以倍倍为宜对照组除不接触受试样品

2~4

,。,

外其他处理应与染毒组完全相同如皮肤染毒后出现严重的皮肤刺激症状则应降低受试样品的浓

,,。

度即使高剂量组由于浓度的降低导致了其他毒性反应的明显下降或消失也应如此如试验初皮肤就

,。

出现严重损伤症状应停止试验并以较低剂量进行新的试验

/,

如果试验中接触水平超过每天1000mk体重尚不能引起可观察到的毒性反应并且根据文献

gg

,。

资料能证明类似结构的化学物质亦不产生明显毒性就不需要用三个剂量组来进行试验

6.4试验步骤

。,,

选择在试验环境至少适应3d的健康动物染毒前24h将动物躯干背部染毒区的被毛去除去毛

,。,

时应小心不可损伤动物皮肤以免引起皮肤通透性的改变此后视动物被毛生长情况大约每周要对染

,。,

毒部位去毛各组的去毛时间和去毛面积应相同受试样品应尽可能薄而均匀地涂敷于整个染毒区域

,,

染毒部位的面积约相当于动物体表面积的10%应通过对动物体重的测定确定染毒部位的面积若受

ㅤㅤㅤㅤ

,。,

试样品毒性较大可相对减小染毒区域的面积应使用玻璃纸和无刺激的胶带将受试样品固定以保证

。

受试样品与皮肤有良好的接触和防止受试样品脱落染毒时还应采用必要的措施防止动物舔食受试样

,,。。

品如对动物进行固定时应有一定程度的松动但不推荐完全限制动物活动的方法

,,,。

每天染毒染毒后用适宜的清洁剂清洗每周染毒持续或但考虑到实际工作情

6h7d21d28d

,。

况也可每周染毒5d

6.5临床观察

,,、、、、

观察期限一般为或每天观察一次观察并记录皮肤被毛眼黏膜的改变和呼吸系统

21d28d

、、、、。,

循环系统神经系统肢体活动行为方式等变化发生的时间程度和持续时间如发现动物死亡或濒

,。,

危应及时解剖或冷藏后解剖检查以减少动物同类互残及死后组织自溶每日测量一次饲料消耗量每

周测体重一次。

6.6临床检查

6.6.1血液学检查

、、、,

试验结束时测定血红蛋白浓度红细胞数白细胞总数和分类计数红细胞压积等必要时测定凝血

、、。

功能如凝血时间凝血酶原时间凝血激酶时间或血小板等指标

,。

血液标本应在专用实验室采取并在适当条件下储存

6.6.2临床血液生化检查

。()、

在试验结束时进行检查指标主要包括丙氨酸氨基转移酶ALT天门冬氨酸氨基转移酶

()、()、()、()、()。、()、

AST尿素氮BUN肌酐Cr白蛋白Al总蛋白如有必要还应做电解质平衡钙

bTPCa

2

/—

GBZT240.162011

()、()、()、()、()()、()。

磷P氯Cl钠Na钾K空腹血糖Glu禁食时间要适当碱性磷酸酶ALP与总胆红素在

,,、、、

某些情况下还须检测与肝或其他器官有关的酶和胆酸以及脂类化合物激素高铁血红蛋白胆碱酯

()。,。

酶ChE活性等分析如出现肉眼可见的脏器改变可增加与之相应的血液生化指标还可增加其他

脏器以进一步对观察到的毒性反应进行研究。

6.6.3尿液检查

,、、、。

一般应进行尿液的常规检查包括外观pH值尿蛋白尿糖和血细胞如尿样分析可作为预期或

,。

观察得到的毒性指标则可增加有关的尿液检查项目

6.6.4大体解剖

,:,,、、。

所有动物皆应进行大体检查内容应包括体表各开口处颅胸腹腔及其内容物解剖分离后的

、、、、()、、、、,,

肝肺肾肾上腺睾丸卵巢附睾脾脑心脏等应尽快称重以防水分丢失并立即保存在固定液

,。

中备病理组织学检查

、、、、、、()(/)为

心肝脾肺肾脑睾丸卵巢等的绝对质量和脏器系数脏器系数脏器质量体重×100%

=

,。

必测指标必要时加测其他脏器绝对质量和脏器系数应详细检查染毒区皮肤和非染毒区皮肤的损害

情况。

6.6.5病理组织学检查

凡符合以下条件的皆应进行组织病理学检查:

)、、

a所有高剂量组和对照组动物的肝肺肾及染毒区和非染毒区皮肤等重要的和可能受到损伤的

器官或组织;

)ㅤㅤㅤㅤ,

b如高剂量组动物的器官或组织有组织病理学病变时则应扩展至其他剂量组的相应器官和

组织;

)各剂量组大体解剖有异常的器官和组织;

c

)附加组动物的被其他试验组证明有病变的器官和组织。

d

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

,、、

试验结果以表格形式总结内容包括各组动物数出现损伤的动物数损伤的类型和每种损伤动物

。。

的百分比采用适当的统计学方法进行统计

7.2结果评价

、、、,

综合临床观察临床检查大体解剖组织病理学检查的结果对受试样品经皮或染毒有

21d28d

,、;

无毒作用及其毒作用特点包括受试样品的靶器官蓄积毒性等做出初步评价对是否需要进行更长时

。

间的毒理学试验及其剂量和观察指标提出建议如发现试验组与对照组有显著性差异或能得出剂量-

,。

效应或剂量反应曲线时应对和作出初步评价

-NOAELLOAEL

8评价报告

除/,:

GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

),;

a受试样品及介质的有关理化特性受试样品的配制方法

)、,,,;

b各组动物染毒开始时间结束时间染毒方法介绍染毒过程的描述染毒剂量的选择

/—1

GBZT240.1620111

0

—

2

),、、,

c观察次数及持续时间依动物的性别组别观察试验中症状出现消失的时间对症状特点的文

,,,,6

字描述食物消耗量及体重变化各性别组别动物的毒性反应资料血液检查及参考正常值生1.

,,;

化检查及正常值动物死亡及剖检的时间大体解剖及病理检查所见病变特点的描述0

4

)、;

d各种毒性反应的频数发生率及检测指标的均值和标准差2

/

)所用统计学分析方法及计算结果;T

e

)可能时绘出剂量效应或剂量反应曲线。Z

f--B

G

9结果解释

(/)。。

本项试验结果可提供亚急性经皮21d28d染毒的毒作用资料其结果外推至人的有效性有限

ㅤㅤㅤㅤ