GBZ/T(卫生) 240.23-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第23部分：迟发性神经毒性试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.232011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分迟发性神经毒性试验

23

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part23Delaedneurotoxicittest

yy

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.232011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分迟发性神经毒性试验

23

1范围

/、、、

GBZT240的本部分规定了动物迟发性神经毒性试验的目的试验概述试验方法数据处理与结

、。

果评价评价报告和结果解释

。

本部分适用于有机磷化合物的迟发性神经毒性测定若某些受试样品的化学结构式与迟发性神经

,。。

毒性阳性物质相似也需进行此项试验试验分为急性和亚急性迟发性神经毒性试验

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

/界定的术语和定义适用于本文件。

GBZT240.1

3.1

有机磷引起的迟发性神经毒性,

oranohoshorusinduceddelaedneurotoxicitOPIDN

gppyy

,、,

一种神经综合征主要的临床症状为四肢无力上位运动神经元损伤性痉挛其相关的病理学症状

,(,

是周围神经和脊髓远端轴突病生化作用是神经组织中的神经病靶酯酶neuroathtaretesterase

pyg

)。,

抑制和老化暴露引起的抑制和随后的老化其临床体征和病理改变首先见于第周

NTENTE1~

2周间。

3.2

神经病靶酯酶,

neuroathtaretesteraseNTE

pyg

(),。

又称神经毒性酯酶neurotoxicesterase是膜结合蛋白催化戊酸苯酯水解该酶与有机磷共价结

,,。

合发生磷酰化后即被抑制或老化与OPIDN之间有着密切关系并不是所有抑制NTE的有机磷都

,。

能引起OPIDN但是所有引起OPIDN的有机磷都能抑制NTE

4试验目的

。

检测和评价受试样品是否具有迟发性神经毒性作用迟发性神经毒性作用主要表现为运动性共济

,。

失调和瘫痪在组织病理学上神经组织呈脱髓鞘变化

5试验概述

,,。

在急性迟发性神经毒性试验中高剂量采用最大耐受剂量一次给药后观察21d在亚急性神经毒

1

/—

GBZT240.232011

,,。

性试验中连续给药28d后继续观察14d

,:、、,,

试验期间需对动物全面观察内容包括行为异常运动失调瘫痪等试验中定期进行生化检验特

,。

别是NTE测定并于试验结束时进行神经组织的病理学检查等

6试验方法

6.1急性迟发性神经毒性试验

6.1.1实验动物

,、,。

选用个月个月健康成年母鸡无用药史无步态异常体重受试样品组和

8~121500~2000

gg

,。。

介质对照组每组至少只阳性对照组至少只试验前置于试验环境中观察适应

1263d

6.1.2饲养条件

,,,。,

单笼饲养饲养的笼子应足够大允许母鸡自由行动并可观察其步态如果是人工照明应12h

照明,,,。

12h黑暗适当饮食不限制饮水

6.1.3试验分组

,,

一般设个个剂量组每一剂量组动物要保证至少有只动物用于生化指标检验只动

6.1.3.13~466

物用于病理解剖。

6.1.3.2先求出受试样品对母鸡的急性经口半数致死量()。

LD50

ㅤㅤㅤㅤ

,。

6.1.3.3剂量范围可在半数致死量和NOAEL之间设定应包括人类实际接触量及其100倍剂量

/,,,

6.1.3.4当受试样品剂量达每日1000mk体重动物未出现毒性效应更高的剂量则不予考虑但

gg

,。

当人的实际接触剂量较大时可考虑适当加大剂量

,。

6.1.3.5介质对照组除不给受试样品外其他与受试样品组完全一致

阳性对照组要保证至少有只母鸡(只用于生化检验,)

6.1.3.6633只用于病理解剖给予迟发性神经

,(,),/。

毒性阳性物如三邻甲苯磷酸酯triocreslhoshateTOCP剂量为500mk体重也可采用近

--yppgg

期的阳性对照数据。

6.1.4试验步骤

6.1.4.1动物准备

,。

试验前动物隔夜禁食但不限制饮水

6.1.4.2受试样品的配制

、。/。

受试样品采用水溶液混悬液或油溶液灌胃量可根据各组不同剂量按5mLkg体重给予如采

,/。

用注射给药一般按1mLkg体重给予

6.1.4.3染毒

,。

通常采用一次经口灌胃给药也可采用胶囊或母鸡翅膀下注射给药

,/,

给予受试样品前10min~15min应大腿肌肉注射硫酸阿托品作保护处理用量为10mk体重

gg

,/,

以对抗急性副交感神经中毒症状同时肌肉注射解磷定25mk体重以防止对胆碱酯酶的不可逆

gg

抑制。

2

/—

GBZT240.232011

6.1.5观察指标

6.1.5.1临床观察

,,,

6.1.5.1.1给予受试样品后直到21d每天至少观察一次记录有无行为异常运动性共济失调瘫痪

。。

等症状在开始给予受试样品的两天应每天至少观察次次

3~5

、。

6.1.5.1.2详细记录包括出现中毒症状的时间程度及持续时间

,。

6.1.5.1.3每周至少两次将母鸡拿出笼子强迫活动以观察有无迟发性神经毒性的最小反应

、、。

6.1.5.1.4每周测体温一次称体重一次记录食量一次

,。

6.1.5.1.5出现濒死状态的鸡应立即处死解剖检查

共济失调按以下级进行记录:

6.1.5.1.65

———0无反应;

———、;

A腿软站立姿势和步态稍异常

———,;

B步态严重异常行走时不断跌倒

———,;

C能勉强站立但多以足站立

———

,。

D不能站立通过扇动翅膀移动身体

6.1.5.2生化检验

、,

给予受试样品后分别从各剂量组和介质对照组中随机选择只母鸡处死阳性对照组随

24h48h3

,,,

机选择只母鸡于处死取脑和腰脊髓进行测定如果观察临床症状出现缓慢可适当延迟

324hNTE

。()。

测定时间处死动物必要时可测定这些样品中的乙酰胆碱酯酶AChE所有解剖的动物应仔细观察

脑和脊髓的形态学改变情况。ㅤㅤㅤㅤ

6.1.5.3病理组织学检查

,,

6.1.5.3.1观察期结束后将每组剩余的母鸡用空气栓塞法或颈动脉放血法迅速解剖取材或用原位

灌注固定法处死。

、:

6.1.5.3.2主要对脑脊髓及远端周围神经组织进行病理组织学检查

———:、、;

脑包括延脑脑桥小脑及大脑皮质

———:,;

脊髓包括颈段胸段中部及腰骶结合部

———:,。

周围神经坐骨神经胫骨神经及其侧支

(),。

神经组织切片染色除常规苏木精伊红染色外同时要进行髓鞘或轴索等特殊染色

6.1.5.3.3HE

6.2亚急性迟发性神经毒性试验

6.2.1动物

()。

同急性迟发性神经毒性试验见6.1.1

6.2.2饲养条件

()。

同急性迟发性神经毒性试验见6.1.2

6.2.3试验分组

。,,

设个剂量组和个介质对照组每组应有足够的母鸡数保证至少有只用做生化检验只于

3166

末次给药后继续观察并于试验结束时进行病理形态学观察。

剂量选择应参考急性毒性测试结果和有关资料:

3

/—

GBZT240.232011

,。。

高剂量应引起明显的毒性效应但不能引起死亡或严重伤害中剂量应出现极轻微中毒变化低

剂量不应出现任何毒作用。

/,。

如果1000mk体重未产生可观察到的毒性作用则不必进行更高剂量的测试但当预期的人

gg

接触量高于此剂量时则应加大剂量进行测试。

6.2.4试验步骤

6.2.4.1受试样品配制

。、。

首选灌胃或胶囊给药受试样品采用水溶液混悬液或油溶液灌胃量可根据各组不同剂量按

/体重给予。

5mLkg

6.2.4.2染毒

,,,。

每日一次经口给药每周7d连续28d末次给药后继续观察14d

6.2.5观察指标

6.2.5.1临床指标

,,,。

给药期间和观察期间每天至少观察一次记录有无行为异常运动性共济失调瘫痪等症状具体

观察和记录见6.1.5.1。

6.2.5.2生化检验

ㅤㅤㅤㅤ

,

观察期间进行生化检验分别于末次给药后和各从每个受试样品组和介质对照组随机选

24h48h

择只母鸡进行和测定。

3NTEAChE

6.2.5.3病理组织学检查

,、。

观察期满处死剩余母鸡每组只解剖取脑脊髓及远端周围神经组织进行病理组织学检查见急

6

()。

性迟发性神经毒性试验见6.1.5.3

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

、,,。

将受试样品组与阳性对照组介质对照组做比较进行统计分析以确认是否有迟发性神经毒作用

7.2结果评价

、。

7.2.1评价内容包括临床神经毒性症状生化检验和病理检查结果及可观察到的其他毒性效应对发

、。

生率严重程度及相关性作出评价

,,。

7.2.2阳性对照组应出现共济失调障碍病理组织学证实有脱髓鞘改变介质对照组无上述改变

,,、

7.2.3出现阳性时需求得无作用剂量进一步评价受试样品与神经毒性的反应关系发生率和严重

程度。

,:

7.2.4评价要列出以下简表包括

),、,、、、

a一般症状变化出现神经毒性症状的类型严重程度计算出百分率死亡率体重变化摄

食量;

4

/—

GBZT240.232011

):(/);

b食物利用率每周平均增加体重每周平均进食量×100%

———生化检验结果;

———病理组织学检查结果及照片。

8评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

)体重的数据;

a

),;,(

b各剂量的毒性效应数据包括死亡情况临床症状的性质严重程度和持续时间无论是否

可逆);

):;

c生化检验方法和结果详细描述

)尸检结果;

d

)所有病理组织学检查的详细结果;

e

)结论。

f

9结果解释

。

迟发性神经毒性试验能够提供受试样品急性或亚急性染毒的迟发性神经毒性作用资料虽然其试

,。

验结果仅能有限地外推到人但它可为确定人群接触的无作用水平和允许接触水平提供有价值的信息

ㅤㅤㅤㅤ

5