GBZ/T(卫生) 240.21-2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第21部分：致畸试验

ICS13.100

C52

中华人民共和国国家职业卫生标准

/—

GBZT240.212011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分致畸试验

21

ㅤㅤㅤㅤ

—

Proceduresandtestsfortoxicoloicalevaluationsofchemicals

g

:

Part21Teratoenicittest

gy

2011-08-19发布2012-03-01实施

中华人民共和国卫生部发布

/—

GBZT240.212011

化学品毒理学评价程序和试验方法

:

第部分致畸试验

21

1范围

/、、、、

GBZT240的本部分规定了动物致畸试验的目的试验概述试验方法数据处理与结果评价评

价报告和结果解释。

本部分适用于检测化学品的致畸性。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本

。,()。

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/职业卫生名词术语

GBZT224

/:

化学品毒理学评价程序和试验方法第部分总则

GBZT240.11

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

/界定的术语和定义适用于本文件。

GBZT240.1

3.1

母体毒性maternaltoxicit

y

引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应。

4试验目的

检测妊娠动物接触化学品后引起胎仔畸形的可能性。

5试验概述

。,

试验应设多个剂量组选择处于胚胎发育器官形成期的妊娠动物进行染毒并在胎仔出生前将妊

,,、、。

娠动物处死取出子宫检查其吸收胎死胎活胎及胎仔的骨骼和内脏畸形的情况

6试验方法

6.1实验动物

、、,。

首选健康刚进入性成熟期未经交配的雌性大鼠或家兔按雌雄动物比例或交配试

2∶11∶1

验前的适应期至少为3d。

,,,

为了获得足够的胎仔数正确地评价受试样品致畸的可能性对于大鼠每个剂量组和对照组至少

,。

应有只妊娠动物家兔至少为只

1512

1

/—

GBZT240.212011

6.2剂量设计

、,。

试验至少设个剂量组个阴性对照组必要时可设个阳性对照组阳性对照物可选用环磷酰

311

、。,。

胺阿司匹林或维生素A对照组动物除了不给予受试样品外其他处理应与剂量组完全相同试验可

,。

以先采用预试验了解受试样品引起胚胎或胎仔死亡的剂量在受试样品理化和生物特性允许的条件

,,,

下高剂量组剂量应使母体出现明显的毒性反应如轻微的体重下降但不能引起超过10%的母体死

;;

亡低剂量应不引起动物任何可观察到的毒性反应在低剂量和高剂量之间可按几何级数设置中间剂

。,/,

量如果受试样品的毒性较低1000mk体重的剂量对胚胎无明显毒性或致畸作用则可以采用限

gg

,。,

量试验即试验不需要设其他剂量组若高剂量的预试验对母体确有一定的毒性作用但对胚胎无不良

,。

影响也可以采用限量试验

6.3试验步骤

6.3.1染毒途径

,。

通常为经口灌胃也可以采用其他与人的接触方式相同的给样方式每天的染毒应在同一时间进

。,。

行如果受试样品是通过灌胃染毒的应按每只母体动物的体重来确定每日的染毒量

6.3.2交配及染毒期限

。,

雄性和雌性动物按或的比例合笼交配每天早晨应对雌性动物进行检查查看阴道中

1∶11∶2

。。

是否有精子或阴栓将检查到精子或阴栓的当天计为雌性动物妊娠的第天将妊娠动物随机分组

0

,(,),。

后于胚胎器官的形成期开始染毒大鼠为孕后6d~15d家兔为孕后6d~18d每天一次

6.3.3观察期限及指标

ㅤㅤㅤㅤ

。,

6.3.3.1每日至少对妊娠动物进行一次仔细的临床观察发现虚弱或濒死的动物应进行隔离或人道

,。、。

处死对死亡的动物应进行尸检如母体有流产早产症状者也应处死并作大体检查

,,,、、、、

6.3.3.2每日称取妊娠动物体重每周记录摄食量并观察其临床症状包括皮肤毛眼睛黏膜呼吸

、、、。

系统循环系统神经系统四肢活动和行为方式的改变

,、。

6.3.3.3及时记录任何毒性反应包括出现的时间程度和持续的时间

6.3.4观察指标

(,,),

分娩前一天处死妊娠动物大鼠为妊娠第天小鼠为妊娠第天家兔为妊娠后第天立即

201829

进行解剖检查。

6.3.4.1子宫观察

,、,、、。

取出子宫分别称取子宫胎盘和活胎的重量记着床数活胎数死胎数及吸收胎数

6.3.4.2外观检查

。,:、、、、、

逐一记录活胎仔的身长和尾长检查外观有无异常如头部无脑脑膨出露脑头盖裂脑积水

、、、、、、、、、、、;:

小头颜面裂小眼无眼眼球突出无耳小耳耳位低无颚小颚下颚兔唇和下颌裂躯干部胸骨

、、、、、、、、、、、;

裂胸部裂脊椎裂脊椎侧弯脊椎前弯脊椎后弯脐疝尿道下裂无肛门短尾卷尾无尾和腹裂四

:、、、、、、、。。

肢多肢无肢短肢半肢多趾无趾并趾短趾和缺趾胎鼠畸形检查方法见附录A

6.3.4.3骨骼检查

/(),。

将每窝的胎仔放入茜素红液配制方法见附录的中染色进行骨骼检查测量囟门大

12BB.1

,,,、、、、

小矢状缝的宽度头顶间骨及后头骨缺损情况然后检查脊柱骨的数目融合纵裂部分裂开骨化中

2

/—

GBZT240.212011

、、、;、、、、、;

心数发育不全缩窄脱离和形状骨盆的弓数目骨化中心数形状异常融合裂开缩窄和脱离四肢

;;、;、、、、

骨的形状和数目腕骨的骨化中心数掌骨趾骨的形状肋骨的数目形状融合分叉缺损和发育不

;、、、、。

全胸骨的形状完全缺失胸骨节融合裂开形状异常和发育不良等情况

6.3.4.4内脏检查

’(),

将每窝另一半的胎仔放入液配制方法见附录的中固定两周后作脏器和软组织

BouinsBB.2

。,:、、、;:、

检查检查有无异常如头部嗅球发育不良侧脑室扩张第三脑室扩张角膜缺损等胸部右心位房

、、、、、、、、、

中隔缺损室间隔缺损主动脉弓食道闭锁气管狭窄无肺多肺肺叶融合膈疝气管食管瘘和内脏

;:、、、、、、、、

异位等腹部肝分叶异常肾上腺缺失多囊肾膀胱缺失睾丸缺失阴睾卵巢缺失卵巢异位子宫缺

、、、。

失子宫发育不全肾积水肾缺失和输尿管积水等对于家兔每个胎仔都应解剖进行脏器检查和骨骼

检查。

7数据处理与结果评价

7.1数据处理

,、、、、

数据可以用统一的表格进行统计表中应显示每组的实验动物数平均体重受孕动物数黄体数

、、、、(、、、)、(

着床数吸收胎数活胎数死胎数及其百分率胎仔的情况体重胎盘重体长尾长畸胎的类型包

、)、。

括外观骨骼和内脏数目及百分率

。

数据可采用任何一种适当的统计方法进行处理应将各剂量组的指标相应地与对照组进行显著性

。,,:

检验其中以畸胎率最为重要主要有以下两种

出现畸形的活胎总数

每组动物总畸胎率=×100%

该组母体所产的活胎总数

ㅤㅤㅤㅤ

:,。

注凡每一活胎出现一种以上畸形时均作一个畸胎计

,。

当出现的畸胎是以某一种或某几种畸形为主时就应按畸形种类单独计算该畸形率

出现某种畸胎总数

每组动物某单项畸胎率=×100%

该组母体所产的活胎总数

致畸指数雌性动物/最小致畸剂量

=LD50

7.2结果评价

,。

7.2.1评价时应结合所用动物品系的历史性的资料进行包括自发畸变种类和频率

,,

7.2.2如果某剂量组的总畸胎率或某单项畸胎率与对照组相比明显增高且差异有显著性可表明该

剂量有致畸作用。

、,

7.2.3试验结果应能得出受试样品是否有母体或胚胎毒性致畸性最好能得出无致畸剂量和最小致

畸剂量。

8评价报告

/,:

除GBZT240.1规定的一般项目外评价报告还应包括以下内容

)给予受试样品的方法和期限;

a

)孕鼠体重增长和妊娠情况;

b

)、、、、、;

c受孕动物数黄体数着床数吸收胎数活胎数死胎数及其百分率

)(、、、)、(、)、。

d胎仔的情况体重胎盘重体长尾长畸胎的类型包括外观骨骼和内脏数目及百分率

9结果解释

,。。

解释致畸试验结果时应注意种属的差异试验结果从动物外推到人存在着一定的局限性

3

/—

GBZT240.212011

附录

A

()

资料性附录

胎鼠畸形检查方法

A.1胎鼠外观检查

,,

对每只胎鼠先经肉眼检查如果肉眼不能确定某种畸形时将胎鼠放在解剖显微镜下进一步确定并

,。

照相胎鼠的检查顺序如下

A.2胎鼠的头部检查

(),,(、)。,

有无露脑无头盖骨脑膜膨出头部大小大头可能脑积水小头为头部发育不良眼睛的有无

,(),。、,。

眼所在部位大小小眼或大眼突眼或开眼等两耳鼻和嘴外表是否正常和对称上下颌有无唇裂

A.3四肢的检查

()、、、、、。

四肢有无多趾指并趾少趾无趾足内外翻短肢等畸形

A.4躯干的检查

ㅤㅤㅤㅤ

、(),、、。

有无脐疝腹裂内脏膨出脊髓膨出脊柱裂脊柱侧突等

A.5尾部检查

、、。

有无短尾卷尾无尾和尾分叉等

A.6标本的制作

/’,,/。

将每窝12胎鼠放入Bouins液固定作为内脏检查另12放入95%酒精中固定作为骨骼检查

A.7骨骼标本的制备

,溶液。

胎鼠放入溶液中软化至能很清楚地看见骨骼为止必要时中间可更换次

1%KOH1KOH

A.8骨骼染色

,,。

将骨骼标本放入茜素红应用液中染色16h直至全部骨骼染成紫红色为止中间可更换一次染液

A.9骨骼透明

,,,。

染好色以后用自来水冲净标本倒掉染液将标本置于50%甘油中脱色3d~5d

4

/—

GBZT240.212011

A.10骨骼检查

:,,,。

A.10.1头骨检查颅骨是否完整有无骨化不全骨缝的宽窄枕骨的形状

胎鼠上枕骨骨化程度的分级标准如下:

———:,,/。

0级上枕骨成片状或哑铃状两侧骨化点完全融合融合处宽度大于两侧的13

———:,/。

Ⅰ级上枕骨两侧骨化点相连相连处宽度小于两侧的13

———:,。

Ⅱ级上枕骨两侧骨化点不相连但可清楚地见到两个较大的骨化点

———:,。

Ⅲ级上枕骨两侧的骨化点不相连仅见小骨化点或仅见一侧骨化点

———:。

Ⅳ级无上枕骨骨化点

:,,

胸部骨骼正常胸骨为块畸形时可有骨骼错位及骨化不全注意观察第胸骨和第胸

A.10.2625

。,、、、、。

骨小鼠正常肋骨为对观察有无多肋少肋肋骨分叉融合波状肋等畸形

13

:、、。

A.10.3四肢骨检查骨化程度长短粗细指趾骨的发育状况

A.11胎鼠内脏徒手切片检查

’

,。。

将胎鼠从Bouins液中取出自来水冲净测量每只胎鼠身长及尾长

A.12头部切片

将胎鼠放在蜡板,,、、,,

或木板上第刀由嘴开始经两耳切开暴露舌腭上唇和下颌检查舌有无异常

1

ㅤㅤㅤㅤ

、。,。,、,

有无腭唇裂将头翻过来前背向上切剩下的切片第刀从眼睛前面切下暴露鼻中隔鼻窦记录

2

。,,、、、、

鼻腔是否通第刀平眼切下暴露脑鼻叶鼻中隔后区的大部分及鼻咽腔眼组织视网膜玻璃体晶

3

,。,,

状体和角膜检查这些组织结构有无异常第刀从眼后切开暴露大脑半球和侧脑室并注意有无畸

4

。,、、。

形和扩张第刀横切大脑半球暴露间脑的第脑室侧脑室脉络膜等检查这些部位有无异常

5Ⅲ

A.13内脏切片检查

,,。

沿胸腹壁中线和肋下沿水平线各切一刀暴露胸腔与腹腔内脏检查各脏器有无异常

A.14统计

。,、、,

应用适当的统计学软件对数据进行分析处理各组母鼠平均体重胎鼠体重身长尾长计量资料

(),。、、、

以均数标准差表示数据采用检验进行显著性分析活胎死胎畸形吸收胎等计数资料

±x±sF

2

,。

用百分率表示数据采用检验进行显著性分析

χ

———/;

活胎率活胎数胎鼠数

=×100%

———/;

死胎率死胎数胎鼠数

=×100%

———/;

吸收胎率吸收胎数着床数

=×100%

———/;

畸形率畸形仔鼠数受检胎鼠数

=×100%

———孕鼠体重净增长解剖前体重受孕第天体重含胎子宫重。

=-6-

5

/—

GBZT240.212011

附录

B

()

资料性附录

茜素红液和’液配制方法

Bouins

B.1茜素红液配制方法

冰醋酸5mL

纯甘油10mL

1%水合氯醛60mL

临用时用1%KOH稀释成0.1%的应用液。

’液配制方法

B.2Bouins

苦味酸饱和液75mL

甲醛25mL

冰醋酸5mL

混合使用。

ㅤㅤㅤㅤ

6