GB 5413.16-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中叶酸(叶酸盐活性)的测定

中华人民共和国国家标准

GB5413.16—2010

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）

的测定

Nationalfoodsafetystandard

Determinationoffolicacid(folateactivity)infoodsforinfantsandyoungchildren,

milkandmilkproducts

2010-03-26发布2010-06-01实施

中华人民共和国卫生部发布

GB5413.16—2010

前言

本标准代替GB/T5413.16-1997《婴幼儿配方食品和乳粉叶酸（叶酸盐活性）测定》。

本标准与GB/T5413.16-1997相比，主要变化如下：

——对磷酸盐缓冲液作了调整；

——增加了米粉的处理方法；

——增加了光密度法测定步骤。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

——GB5413-1985、GB/T5413.16-1997。

I

GB5413.16—2010

食品安全国家标准

婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定

1范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中叶酸（叶酸盐活性）的测定。

2规范性引用文件

本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本

适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

3原理

利用干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）ATCC7469对叶酸的特异性，在含有叶酸的样品中生长产生

的酸度和形成的光密度来测定叶酸的含量。

4试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

4.1鸡胰腺：称取100mg干燥的鸡胰腺，加20mL蒸馏水，搅拌15min，离心10min（3000转/分钟），

取上清液，临用前配制。

4.20.9%生理盐水：称取9.0g氯化钠溶解于1000mL水中，分装于具塞试管中，每管10mL，121℃

灭菌15min。每周准备一次。

4.3磷酸盐缓冲液

4.3.1磷酸盐缓冲液Ⅰ（0.05mol/L）：称取5.85g磷酸二氢钾，1.22g磷酸氢二钾，用1000mL水溶

解。临用前按0.5g/100mL加入抗坏血酸。

4.3.2磷酸盐缓冲液Ⅱ（用于谷物及谷物制品前处理）：称取14.2g磷酸氢二钠，用1000mL水溶解。

临用前按1.0g/100mL加入抗坏血酸，用氢氧化钠溶液A（4.16）调pH至7.8±0.1。

4.3.3磷酸盐缓冲液III（用于谷物及谷物制品测试）：称取14.2g磷酸氢二钠，用1000mL水溶解。

临用前按1.0g/100mL加入抗坏血酸，用氢氧化钠溶液A（4.16）调pH至6.8±0.1。

4.3.4磷酸盐缓冲液Ⅳ（0.1mol/L）（用于谷物及谷物制品标准溶液制备）：溶解13.61g磷酸二氢钾

于水中稀释到1000mL。用氢氧化钾溶液（4.10）调pH至7.0±0.1。

4.4叶酸标准品。

4.5氨水（10.8%）。

4.6甲苯（CH）。

78

4.7抗坏血酸（CHO）。

686

4.8菌株：干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）ATCC7469。

1

GB5413.16—2010

4.9培养基

4.9.1乳酸杆菌琼脂培养基：胨化乳15g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，番茄汁100mL，磷酸二氢钾

2g，聚山梨糖单油酸酯1g，琼脂10g，加蒸馏水至1000mL，调pH至6.8±0.2（20℃～25℃）。121℃

高压灭菌15min，备用。

4.9.2乳酸杆菌肉汤培养基：胨化乳15g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，番茄汁100mL，磷酸二氢钾

2g，聚山梨糖单油酸酯1g，加蒸馏水至1000mL，调pH至6.8±0.2（20℃～25℃）。121℃高压灭

菌15min，备用。

4.9.3叶酸测定用培养基：酪蛋白胨10g，葡萄糖40g，乙酸钠40g，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢钾1

g，DL-色氨酸0.2g，L-天门冬氨酸0.6g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，硫酸腺嘌呤10mg，盐酸鸟嘌呤10

mg，尿嘧啶10mg，黄嘌呤20mg，聚山梨糖0.1g，谷光甘肽5mg，硫酸镁0.4g，氯化钠20mg，硫

酸亚铁20mg，硫酸锰15mg，核黄素1mg，p-氨基苯甲酸2mg，维生素B64mg，盐酸硫胺素400μg，

泛酸钙800μg，烟酸800μg，生物素20μg，加蒸馏水至1000mL，调pH至6.7±0.1（20℃～25℃）。

注：市售商业化合成培养基效果更稳定。

4.10氢氧化钾溶液（4mol/L）：称取224g氢氧化钾于1000mL烧杯中，用400mL水溶解，冷却至

室温后，转移至1000mL容量瓶中，用水定容。

4.11木瓜蛋白酶溶液：1g蛋白酶（活力≥6000U/mg，pH6.0±0.1，40℃）溶于100mL磷酸盐缓冲

液Ⅰ（4.3.1）中。临用前配制。

4.12α-淀粉酶溶液：1gα-淀粉酶（1.5U/mg）溶于100mL磷酸盐缓冲液Ⅰ（4.3.1）中。临用前配制。

4.130.22μm灭菌滤膜。

4.14标准溶液的制备

4.14.1叶酸标准贮备液