LS/T 6133-2018 粮油检验 主要谷物中16种真菌毒素的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.060

X11

中华人民共和国粮食行业标准

/—

LST61332018

粮油检验主要谷物中种真菌

16

毒素的测定液相色谱串联质谱法

-

—

InsectionofrainandoilsDeterminationof

pg

—/

16mcotoxinsincerealsHPLC-MSMSmethod

y

2018-04-09发布2018-07-01实施

国家粮食和物资储备局发布

/—

LST61332018

前言

本标准按照/—给出的规则起草。

GBT1.12009

本标准由国家粮食和物资储备局提出。

(/)。

本标准由全国粮油标准化技术委员会SACTC270归口

:、、

本标准起草单位国家粮食局科学研究院国家粮食局标准质量中心河南省粮油饲料产品质量监

、、、

督检验中心安徽省粮油产品质量监督检测站陕西省粮油产品质量监督检验所湖北省粮油食品质量

、、。

监督检测中心四川省粮油中心监测站河南省口岸食品检验检测所

:、、、、、、、、、、、、

本标准主要起草人王松雪叶金张艳吴宇辛媛媛谢刚高敬铭刘莹胡斌李尧李琦李贵友

姬建生。

Ⅰ

/—

LST61332018

粮油检验主要谷物中种真菌

16

毒素的测定液相色谱串联质谱法

-

1范围

本标准规定了液相色谱串联质谱法测定主要谷物中黄曲霉毒素、、、(、、

-BBGGAFBAFB

121212

、)、()、()、

脱氧雪腐镰刀菌烯醇雪腐镰刀菌烯醇脱氧雪腐镰刀菌烯醇葡萄糖苷

AFGAFGDONNIV-3-

12

()、乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇()、乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇()、

DON-3G3-3-AcDON15-15-AcDON

玉米赤霉烯酮()、赭曲霉毒素()、伏马毒素、(、)、、、杂色曲霉毒素

ZENAOTABBFBFBT-2HT-2

1212

()、。

ST16种真菌毒素的原理操作步骤及结果计算

、。

本标准适用于小麦玉米和稻谷等主要谷物中种真菌毒素的测定

16

//,//()。

本标准的方法检出限是0.3k~60.0k定量限是1.0k~200.0k见附录A

μggμggμggμgg

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/粮油检验一般规则

GBT5490

/、、

粮食油料检验扦样分样法

GBT5491

/分析实验室用水规格和试验方法

GBT6682

3原理

,、,、、,

采用乙腈水乙酸溶液提取试样中真菌毒素经涡旋或振荡离心取上清液经稀释离心过滤后

--

,,。

加入稳定同位素内标通过液相色谱串联质谱测定利用稳定同位素内标法定量

-

4试剂

,,/。

除另有说明外所用试剂均为分析纯实验用水应符合GBT6682中一级用水要求

4.1乙腈

色谱纯。

4.2甲醇

色谱纯。

4.3乙酸铵

色谱纯。

4.4乙酸

色谱纯。

1

/—

LST61332018

4.5提取液

(,)。

乙腈水乙酸混合液体积比

--70∶29∶1

4.6标准曲线溶剂

(,)。

乙腈水乙酸混合液体积比

--35∶64.5∶0.5

4.7标准品

:(),

真菌毒素标准品种真菌毒素的固体粉末纯度种真菌毒素标准品的信息见附录

4.7.116≥99%16

表。

BB.1

:

真菌毒素稳定同位素标准品除脱氧雪腐镰刀菌烯醇葡萄糖苷和乙酰基脱氧雪腐镰刀菌

4.7.2-3-15-

(),

烯醇外的种真菌毒素稳定同位素标准品的固体粉末纯度种真菌毒素稳定同位素标准

14≥99%14

品的信息见表B.1。

4.8标准溶液配制

:()(),

4.8.1单标标准储备液准确称取精确至0.1mg真菌毒素标准品4.7.1分别于10mL容量瓶中按

,,。

照表所示浓度及溶剂配制标准储备液此溶液密封避光保存有效期个月

B.2-20℃6

:()

混合标准中间液准确移取一定体积的种真菌毒素单标标准储备液于容量瓶

4.8.2164.8.110mL

,,,,

中按照表B.3所示浓度配制混合标准溶液用水定容至刻度此溶液-20℃密封避光保存有效期

1个月。

:()、、、

系列标准工作溶液准确移取种真菌毒素混合标准溶液

4.8.3164.8.225L50L100L

μμμ

、、,(),

250L500L1000L分别于10mL容量瓶中用标准曲线溶剂4.6定容至刻度配制标准曲线溶

μμμ

,,。

液浓度见表B.4此溶液4℃避光密封保存有效期一周

:()()

4.8.4稳定同位素单标储备液准确称取精确至0.1mg真菌毒素稳定同位素标准品4.7.2分别于

,,,

10mL容量瓶中按照表B.5所示浓度及溶剂配制标准储备液此溶液-20℃密封避光保存有效期

6个月。

:()

稳定同位素内标混合工作液准确移取一定体积的种真菌毒素稳定同位素单标储备液于

4.8.5144.8.4

,,,,

容量瓶中用水定容至刻度此溶液密封避光保存有效期个月种真菌毒素稳定同

10mL-20℃114

位素混合溶液浓度见表B.6。

:,。

注为便于操作可采用满足要求的商品化稳定同位素内标试剂盒

5仪器和设备

:。

高效液相色谱串联质谱仪配有电喷雾离子源

5.1-

:/,。

5.2冷冻离心机转速≥12000rmin可设4℃

:。

5.3天平感量0.1mg和0.01g

:/。

5.4涡旋混合器转速≥100rmin

:/。

振荡器振荡频率次

5.5≥50min

:/。

5.6粉碎机电机转速≥1000rmin

筛网:孔径试验筛。

5.71mm

塑料离心管:和。

5.850mL1.5mL

,。

5.913mm聚四氟乙烯针头过滤器孔径0.2m

μ

玻璃内插管:。

5.10400L

μ

2

/—

LST61332018

色谱进样瓶:。

5.112mL

塑料无菌注射器:。

5.122mL

容量瓶:。

5.1310mL

6扦样与分样

/,,。

按GBT5491执行在采样过程中注意防止样品污染

7分析步骤

7.1样品粉碎

,,,。

样品经粉碎机粉碎过500m孔径试验筛混匀待测

μ

7.2提取

()(),(),

准确称取5g精确到0.01g样品于50mL离心管5.8中加入20mL提取液4.5涡旋或振荡

,/,(),

提取30min然后以6000rmin离心10min吸取0.5mL上清液于1.5mL离心管5.8中加入

,/,

0.5mL水并涡旋混匀在4℃下以12000rmin离心10min上清液过0.2m的聚四氟乙烯滤膜

μ

(),。

5.9收集滤液A

7.3添加稳定同位素内标

()()(),

准确吸取滤液和标准系列工作溶液于内插管中加入

180LA7.24.8.3400L5.1020L

μμμ

(),。

稳定同位素内标混合工作液涡旋混匀供液相色谱串联质谱测定

4.8.5-

:,。

注采用商品化稳定同位素内标试剂盒时按照其使用说明进行

7.4仪器参考条件

7.4.1液相色谱参考条件

:,,,。

色谱柱C柱100mm×2.1mm1.8m或相当者

18μ

柱温:。

35℃

进样量:。

2L

μ

流速:/。

0.3mLmin

流动相组成及梯度洗脱参考条件参见附录C。

7.4.2质谱参考条件

:。

离子源电喷雾离子源

:()。

质谱扫描方式多反应监测模式MRM

毛细管电压:(),()。

3.5kV+3.5kV-

干燥气:,/。

300℃7Lmin

雾化气压力:()。

241kPa35si

p

鞘流气:,/。

350℃11Lmin

其他质谱参考条件参见附录C。

()。

16种真菌毒素的总离子流图和多反应监测图MRM参见附录D

3

/—

LST61332018

7.5定性测定

(),

按照液相色谱质谱条件测定样品如果检测的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时间一

-7.4

,;,

致允许偏差小于±2.5%定性离子与定量离子的相对丰度与浓度相当的标准工作液的相对丰度一致

,。

相对丰度偏差不超过表规定则可判断样品中存在被测物

1

表1定性确证相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%≥5050~2020~10≤10

允许的相对偏差/%±20±25±30±50

7.6定量测定

(),

按照液相色谱质谱条件测定样品将配制含有同位素内标的标准系列工作溶液按浓度从

-7.47.3

,,

低到高依次注入液相色谱串联质谱联用仪待仪器条件稳定后以待测毒素和其对应内标的浓度比为

-

(),(),,

横坐标轴目标物质和内标的峰面积比为纵坐标轴对各个数值点进行最小二乘线性拟合标

xy

():

准工作曲线按式计算

1

…………()

axb1

y=+

式中:

———/;

y待测毒素内标的峰面积比

a———回归曲线的斜率;

———/;

x待测毒素内标的浓度比

b———回归曲线的截距。

标准工作溶液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。

8结果计算

。():

采用同位素内标法进行定量样品中真菌毒素的含量按式计算

2

xVf

×××

ρ

…………()

X=2

m

式中:

———,(/);

X样品中待测毒素的含量单位为微克每千克k

μgg

———()/;

按中式计算得到测定液中待测毒素内标的浓度比

x7.61

———,(/);

ρ待测毒素对应的内标质量浓度单位为微克每升μgL

———加入提取液的体积,;

V20mL

———提取液稀释因子,;

f2

———,()。

m样品质量单位为克g

,。

计算结果以重复性条件下获得的次独立测定结果的算数平均值表示保留至小数点后位

21

,/,。

测定结果不符合重复性要求时应按GBT5490的规定重新测定计算结果

9精密度

9.1实验室间测试

,

附录统计了本方法精密度的实验室间合作测定结果适用于本分析浓度范围和基质之内的

E

4

/—

LST61332018

样品。

9.2重复性

,,,

在同一实验室由同一操作者使用相同设备按相同的测试方法并在短时间内对同一被测试对象

()

相互独立进行测试获得的次独立测试结果的绝对差值大于附录所示的重复性限值的情况不超

2Er

过5%。

9.3再现性

,,,

在不同实验室由不同的操作者使用不同的设备按相同的测试方法对同一被测试对象相互独立

进行测试获得的次独立测试结果的绝对差值大于附录所示的再现性限值()的情况不超过。

2ER5%

5

/—

LST61332018

附录

A

()

规范性附录

16种真菌毒素的方法检出限和定量限

16种真菌毒素的方法检出限和定量限见表A.1。

表A.116种真菌毒素的方法检出限和定量限

检出限定量限检出限定量限

毒素名称毒素名称

/k/k/k/k

μggμggμggμgg

AFB0.31.0NIV60.0200.0

1

AFB0.31.0DON45.0150.0

2

AFG10.31.0DON-3G7.525.0

AFG20.31.03-AcDON12.040.0

ZEN6.020.015-AcDON6.020.0

OTA0.62.0ST0.31.0

HT-23.010.0FB6.020.0

1

T-20.62.0FB3.010.0

2

6

/—

LST61332018

附录

B

()

规范性附录

真菌毒素及其同位素的相关信息

,。

真菌毒素及其同位素的相关信息见表浓度信息见表表

B.1B.2~B.6

表B.1真菌毒素及其同位素的相关信息

名称简称分子式相对分子质量

黄曲霉毒素BAFBCHO312.27

1117126

黄曲霉毒素BAFBCHO314.29

2217146

黄曲霉毒素GAFGCHO328.27

1117127

黄曲霉毒素GAFGCHO330.29

2217147

雪腐镰刀菌烯醇NIVCHO312.32

15207

脱氧雪腐镰刀菌烯醇DONCHO296.32

15206

脱氧雪腐镰刀菌烯醇葡萄糖苷HO

-3-DON-3GC458.46

213011

乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇HO

3-3-AcDONC338.35

17227

乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇HO

15-15-AcDONC338.35

17227

玉米赤霉烯酮ZENCHO318.36

18225

赭曲霉毒素AOTA