GB/T 43635-2024 法庭科学 DNA实验室检验规范

ICS07140

CCSA.92

中华人民共和国国家标准

GB/T43635—2024

法庭科学DNA实验室检验规范

Forensicsciences—SpecificationsforexaminationofDNAlaboratory

2024-03-15发布2024-10-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T43635—2024

法庭科学DNA实验室检验规范

1范围

本文件规定了法庭科学领域实验室检验的基本要求

DNA。

本文件适用于法庭科学领域从事法医物证检验的实验室

。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

检测和校准实验室能力的通用要求

GB/T27025

法庭科学实验室建设规范

GB/T43633DNA

人血红蛋白检测金标试剂条法

GA/T765

人精液检测金标试剂条法

GA/T766PSA

人类荧光标记分型结果的分析及应用

GA/T1163DNASTR

法庭科学实验室质量控制规范

GA/T1704DNA

法医物证检验术语

GA/T1972

3术语和定义缩略语

、

31术语和定义

.

界定的以及下列术语和定义适用于本文件

GA/T1972。

311

..

预试验preliminarytest

筛选可疑体液斑的试验

()。

312

..

确证试验confirmatorytest

检验体液斑中特有成分的试验

()。

313

..

聚合酶链式反应polymerasechainreactionPCR

;

一个酶促的特定片段体外扩增过程

DNA。

314

..

线粒体DNAmitochondrialDNAmtDNA

;

存在于人类细胞的线粒体中的闭环双链

DNA。

注人类线粒体约不遵循孟德尔遗传定律表现为母系遗传通过卵细胞将其中的遗传信息传递给

:DNA16.5Kb;,,

后代无有丝分裂和减数分裂的周期变化遗传物质位于细胞器内不受核移植的影响单个细胞中拷

;;,;mtDNA

1

GB/T43635—2024

贝数多存在异质性现象

;。

32缩略语

.

下列缩略语适用于本文件

。

十六烷基三甲基溴化胺

CTAB:(CetylTrimethylAmmoniumBromide)

脱氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

二硫苏糖醇

DTT:(Dithiothreitol)

乙二胺四乙酸

EDTA:(EthylenediaminetetraaceticAcid)

十二烷基磺酸钠

SDS:(SodiumDodecylSulfate)

短串联重复序列

STR:(ShortTandemRepeats)

三羟甲基氨基甲烷盐酸盐

TRIS-HCl:(TRISHydrochloride)

核糖核酸

RNA:(RibonucleicAcid)

4总体要求

41实验室人员环境方法设备和试剂均应符合法庭科学实验室建设规范的

.、、、GB/T43633(DNA)

要求

。

42法医生物检材样本的受理流转保管处置均应符合法庭科学实验室建设

.、、、、GB/T43633(DNA

规范的要求

)。

43实验室应进行内部和外部质量控制以确保结果的有效性质量控制应符合中相关的

.,GA/T1704

结构要求资源要求过程要求和管理要求

、、。

44检验过程中应有效防止污染包括防止提取和反应时发生的检材样本间的交

.DNA,:DNAPCR/

叉污染防止外界环境和人员的污染过程中涉及的检验用产品具体要求可参照

;。DNAGB/T41844

执行

。

45检验过程中应采取安全有效的防护措施保护检验人员并应做好危害性废弃物的管理

.,。

46检验过程中所使用的水均应为符合规定的一级水除非另有规定所采用试剂均为

.GB/T6682。,

分析纯级别

。

5检验流程

51检验流程一般包括预试验确证试验提取与纯化定量人类性别及多态

.、、DNA、DNA、DNASTR

性分析等应根据不同的检材样本类型和委托目的选择所需的检验流程

,/。

52提取可采用全自动提取工作站具体步骤应参照工作站的操作说明书进行扩增采用

.DNA,。PCR

商品化试剂盒的应按相应的试剂盒操作使用前应验收

,,。

6预试验

61血痕预试验

.

611四甲基联苯胺试验

..

6111试剂

...

试剂配方见附录的

AA.1。

2

GB/T43635—2024

6112方法

...

取滤纸轻轻擦拭斑迹按顺序滴加冰醋酸四甲基联苯胺无水乙醇饱和液过氧化氢溶液立即

,、、3%,

出现翠蓝色为阳性反应

。

612鲁米诺试验

..

6121试剂

...

主要试剂包括

:

鲁米诺粉末

a);

过氧化钠粉末

b)。

6122方法

...

将鲁米诺粉末溶于纯水然后加入过氧化钠粉末混匀喷洒斑迹立即出现蓝

0.1g100mL,0.5g,,

色荧光为阳性反应

。

62其他预试验

.

参照试剂盒说明书操作

。

7确证试验

71人血液斑确证试验

.()

按照进行试验

GA/T765。

72人精液斑确证试验

.()

721精子检出法

..

7211酸性品红美蓝染色法Baecchi染色法

...()

72111试剂

....

主要试剂包括

:

酸性品红溶液用盐酸配制

a)1%(1%);

亚甲蓝溶液

b)1%;

盐酸

c)1%;

二甲苯

d)。

72112方法

....

取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后离心取沉渣涂于载玻片上干燥后分别用酸性品红溶

,,1%

液染色后去除染液滴加亚甲蓝溶液染色后去除染液盐酸漂

2min~3min,1%2min~3min,1%

洗干燥后二甲苯透明镜检精子头部被染成红色尾部被染成蓝色

,,。、。

3

GB/T43635—2024

7212苏木素伊红染色法HE染色法

...(.)

72121试剂

....

主要试剂如下

。

苏木素溶液苏木素溶于无水乙醇明矾硫酸铝钾或硫酸铝铵加蒸馏水

a):0.9g10mL;()20g,

加热溶解上述种溶液混合加热煮沸后徐徐加入氯化汞再加热煮沸后快速

200mL。2,0.5g,

冷却使用时每加入冰醋酸

。100mL4mL。

伊红溶液伊红溶于乙醇中

b):0.5g80%100mL。

分化液在乙醇中加入盐酸配制成的盐酸酒精溶液

c):80%,0.5%~1%。

二甲苯

d)。

72122方法

....

取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后离心取沉渣涂于载玻片上干燥后用苏木素溶液浸染

,,

清水漂洗滴加分化液分化水洗后再用伊红溶液浸染清水漂

5min~10min,;5s~10s;2min~3min,

洗干燥后二甲苯透明镜检精子头部被染成红色尾部被染成蓝色

,,。、。

722人精液PSA检测金标试剂条法

..

按照进行试验

GA/T766。

73其他确证试验

.

参照试剂说明书操作

。

8DNA提取与纯化

81提取与纯化可使用包括但不限于下列方法具体操作方法见附录

.DNA(B):

有机溶剂法通过酚氯仿混合液去除蛋白质类有机物质保留于水相溶液中

a):-,DNA;

聚苯乙烯二乙烯基苯树脂法通过螯合镁钙离子等使降解