DB22/T 1614-2012 蛋及乳制品中硝基呋喃代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

ICS67.100

X04

DB22

吉林省地方标准

DB22/T1614—2012

蛋及乳制品中硝基呋喃代谢物残留量的测

定液相色谱-质谱/质谱法

Determinationofmetabolitesofnitrofuransresiduesineggandmilkproducts——

HPLC-MS/MSmethod

2012-12-01发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1614—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：康明芹、李玲、杨帆、周立波、张代辉、顾婷婷、宋清莲、孟日增。

I

DB22/T1614—2012

蛋及乳制品中硝基呋喃代谢物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了蛋及乳制品中呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基（5-Moroholino-methyl-3-

amino-2-oxazolidnone，AMOZ）、呋喃西林代谢物氨基脲（Semicarbazid，SEM）、呋喃妥因代谢物1-

氨基-乙丙酰脲（1-Aminohydantoin，AHD）、呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-唑烷基酮（3-Amino-2-

oxazolidinone，AOZ）残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于蛋及乳制品中AMOZ、SEM、AHD、AOZ残留量的测定和确证。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

试样中的硝基呋喃代谢物经三氯乙酸提取，与邻硝基苯甲醛衍生，调pH后固相萃取小柱（HLB，

N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯基苯）净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，AMOZ、AHD和AOZ用内标法定

量，SEM用外标法定量。

4试剂与材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1邻硝基苯甲醛（C7H5NO3）：纯度≥99.0%。

4.2氢氧化钠（NaOH）。

4.3磷酸氢二钾（KH2PO4）。

4.4三水乙酸铅(C4H6O4Pb·3H2O)。

4.54种硝基呋喃代谢物标准物质：呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、呋喃

西林代谢物氨基脲（SEM）、呋喃妥因代谢物1-氨基-乙丙酰脲（AHD）、呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-唑烷

基酮（AOZ），纯度均≥98%。标准物质具体信息参见附录A。

4.64种硝基呋喃代谢物内标标准物质：D5-AMOZ，13C15N-SEM，13C3-AHD，D4-AOZ。

4.7甲醇（CH3OH）：色谱纯。

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DB22/T1614—2012

4.8乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.9三氯乙酸(CCl3COOH)。

4.10二甲基亚砜（C2H6OS）。

4.11甲酸（HCOOH）：色谱纯。

4.12乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。

4.13磷酸氢二钾溶液：0.1mol/L。称取17.4g磷酸氢二钾（4.3），用水溶解并定容至1000mL。

4.1410%三氯乙酸溶液：称取100.0g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL。

4.15氢氧化钠溶液：2.0mol/L。称取80.0g氢氧化钠（4.2），用水溶解并定容至1000mL。

4.1625%乙酸铅溶液：称取58g三水乙酸铅（4.4），用142mL水溶解，混匀。

4.170.1%甲酸溶液：取1mL甲酸(4.11)，用水稀释并定容至1000mL。

4.18样品定容液：乙腈-0.1%甲酸溶液（2+8）。量取20mL乙腈(4.8)与80mL的0.1%甲酸溶液(4.17)，

混匀。

4.19衍生化试剂：7.5mg/L。称取0.75g邻硝基苯甲醛（4.1），用二甲基亚砜（4.10）溶解并定容至

100mL。

4.204种硝基呋喃代谢物标准储备液：0.1mg/mL。准确称取硝基呋喃代谢物标准物质（4.5）10.0mg，

分别用少量乙腈溶解并转移至100mL容量瓶中，分别用乙腈定容至刻度，混匀，-18℃以下避光保存。

4.214种硝基呋喃代谢物内标标准储备液：0.1mg/mL。分别准确称取硝基呋喃代谢物内标标准物质

（4.6）10.0mg，分别用少量乙腈溶解并转移至100mL容量瓶中，分别用乙腈定容至刻度，混匀，-18℃

以下避光保存。

4.224种硝基呋喃代谢物标准工作液：20.0μg/L。首先分别准确吸取上述4种硝基呋喃代谢物标准储

备液（4.20）用乙腈稀释成1.0mg/L的溶液，然后从中准确吸取2.0mL于100mL容量瓶中，用样品定

容液稀释并定容至刻度，混匀，4℃以下避光保存。

4.234种硝基呋喃代谢物内标标准工作液：20.0μg/L。首先分别准确吸取上述4种硝基呋喃代谢物内

标标准储备液（4.21）用乙腈稀释成1.0mg/L的溶液，然后从中准确吸取2.0mL于100mL容量瓶中，

用样品定容液稀释并定容至刻度，混匀，4℃以下避光保存。

4.24pH精密试纸：5.5~9.0。

4.25OasisHLB柱：200mg/6mL，使用前依次用10mL甲醇(4.7)，10mL水预处理。

4.26滤膜：0.22µm，有机系。

5仪器与设备

5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

5.2高速冷冻离心机：10000r/min，配50mL具塞聚丙烯或聚四氟乙烯离心管。

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DB22/T1614—2012

5.3超声波清洗器：40kHz。

5.4恒温箱或恒温水浴装置：（37±1）℃。

5.5天平：感量0.0001g和0.01g。

5.6真空泵：负压为30psi。

6分析步骤

6.1提取和衍生化

称取1g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入100μL硝基呋喃代谢物内标标准工作液（4.23），

充分混匀。加入10mL10%三氯乙酸（4.14），涡旋1min，60℃水浴提取2h，冷却至室温后-4℃冷

冻离心4min，上清液过滤至另一干净离心管中。滤渣中加入5mL10%三氯乙酸重复提取一次，合并两

次滤液，加入200μL衍生化试剂（4.19），置于37℃恒温装置中16h。

6.2净化

将上述衍生溶液取出放至室温后，加入4mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（4.13），用2mol/L氢氧

化钠溶液（4.15）调节溶液pH值至7.0～7.5，加入100μL乙酸铅溶液（4.16），涡旋30s，10000r/min

离心3min，上清液过预处理过的HLB小柱（4.25），待全部通过后，用10mL水分两次洗涤，弃去淋

洗液，负压抽干，再用4mL乙酸乙酯（4.12）洗脱，收集洗脱液至试管中，氮气吹至近干后，用乙腈

-0.1%甲酸溶液（4.17）定容至1mL，过0.22μm滤膜，滤液供LC-MS/MS测定。

6.3空白试验

除不称取试样外，均按6.1、6.2进行。

6.4测定

6.4.1色谱参考条件

色谱参考条件如下：