SB/T 10464-2008 家畜放线菌病病原体检验方法

犐犆犛１１．２２０

犅４１

备案号：—

２４７３１２００８

中华人民共和国国内贸易行业标准

／—

犛犅犜１０４６４２００８

家畜放线菌病病原体检验方法

犕犲狋犺狅犱狊犳狅狉狋犺犲犲狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪狋犺狅犲狀狊狅犳犪犮狋犻狀狅犿犮狅狊犻狊犻狀犾犻狏犲狊狋狅犮犽狊

狆犵狔

ㅤㅤㅤㅤ

２００８０７０３发布２００８１２０１实施

中华人民共和国商务部发布

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犛犅犜１０４６４２００８

家畜放线菌病病原体检验方法

１范围

本标准规定了家畜（牛、猪）放线菌病病原体的检验方法。

本标准适用于家畜（牛、猪）屠宰加工过程中放线菌病病原体的实验室检验。

２规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

／—食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

ＧＢＴ４７８９．２８２００３

３术语与定义

下列术语和定义适用于本标准。

３．１

放线菌病犪犮狋犻狀狅犿犮狅狊犻狊

狔

由放线菌引起的一种人畜共患慢性传染病，以形成特异性肉芽肿和慢性化脓灶、脓汁内含有特殊的

菌块（或称“硫磺样颗粒”）为特征。

ㅤㅤㅤㅤ

注：本病广泛分布于世界各地，多呈散发性，我国各地均有发生，对畜牧业的发展危害较大，并危害人体健康。家畜

中以牛和猪较常见。

３．２

特异性肉芽肿狊犲犮犻犳犻犮狉犪狀狌犾狅犿犪

狆犵

放线菌感染引起的局部组织慢性增生性炎症病灶。

３．３

硫磺样颗粒狊狌犾犳狌狉狉犪狀狌犾犲

犵

病灶脓汁中形成的肉眼可见针帽头大小的黄白色小颗粒。

４设备和材料

４．１注射器。

４．２试管１６ｍｍ×１６０ｍｍ。

４．３培养皿直径９０ｍｍ。

４．４毛细吸管。

４．５手术刀（刀片）。

４．６生理盐水。

４．７盖玻片。

４．８镊子。

４．９切片刀。

４．１０玻璃容器。

４．１１切片机。

４．１２载玻片。

注：试验前，以上试验器材应灭菌处理。

１

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犛犅犜１０４６４２００８

４．１３光学显微镜。

４．１４黑纸。

４．１５５％１０％氢氧化钠。

～

４．１６酒精灯。

４．１７固定液１０％中性福尔马林。

电热恒温箱：。

４．１８６０℃±１℃

石蜡：熔点；。

４．１９５２℃５４℃５６℃５８℃

～～

干燥箱：。

４．２０２００℃±１℃

４．２１蜂蜡。

４．２２熔蜡及包埋工具。

４．２３染色缸。

５方法

５．１直接压片镜检法

５．１．１取样

用灭菌注射器自未破溃的脓肿中或在脓肿切开时抽取脓汁。

５．１．２制片

取少量脓汁放入试管中，加入适量无菌生理盐水或灭菌蒸馏水进行稀释，充分振荡，待沉淀后倾去

上层液体，再加入少量生理盐水，倒入培养皿中，将培养皿放在黑纸上，找出硫磺样颗粒，用毛细吸管吸

出放在洁净的载玻片上，加滴氢氧化钾溶液，覆以盖玻片，轻轻压平。

１１０％

５．１．３镜检及判定ㅤㅤㅤㅤ

在２０×４０×光学显微镜下，菌丝末端膨大，呈菊花状排列，即为放线菌压片镜检阳性。

～

５．２染色镜检法

５．２．１取样

用毛细管或无菌注射器自未破溃的脓肿或在脓肿切开时抽取脓汁一滴涂于洁净载玻片上，用盖玻

片轻轻挤压。

５．２．２固定

将涂片在酒精火焰上固定。

５．２．３染色

采用革兰氏染色，按／—中的规定进行。

ＧＢＴ４７８９．２８２００３２．２

５．２．４镜检及判定

在２０×４０×光学显微镜下观察，发现菊花状菌丝团块，即为放线菌染色镜检阳性。

～

注：菌丝团块中心为革兰氏阳性的菌丝体，其周围呈放射状排列的革兰氏阴性棍棒体时，为牛放线菌；菌块中心为

革兰氏阴性的短小杆菌，其周围的棍棒体亦呈革兰氏阴性，则为林氏放线杆菌。

５．３病理组织学检验法

５．３．１取样

切取正常组织与肉芽肿交界处的组织块，制成大小为或

０．５ｃｍ×０．５ｃｍ×０．２ｃｍ１．０ｃｍ×

、一式两份。将切取的病料组织放入中性福尔马林固定

１．０ｃｍ×０．３ｃｍ１．５ｃｍ×１．５ｃｍ×０．５ｃｍ１０％

２４ｈ以上。

５．３．２石蜡切片制作步骤

５．３．２．１将上述固定好的组织块，进行适当修整，厚度不超过２ｍｍ。

２

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５．３．２．２将修整好的样品依次放入下列溶液中脱水：

）乙醇

ａ５０％４５ｍｉｎ１ｈ

～

）乙醇

ｂ７０％４５ｍｉｎ１ｈ

～

）乙醇

ｃ８０％４５ｍｉｎ１ｈ

～

）乙醇

ｄ９５％４５ｍｉｎ１ｈ

～

）无水乙醇

ｅⅠ３０ｍｉｎ

）无水乙醇

ｆⅡ３０ｍｉｎ

）无水乙醇二甲苯（）混合液

∶１∶１２０ｍｉｎ３０ｍｉｎ

ｇ～

５．３．２．３将样品依次放入下列溶液中透明：

ａ）二甲苯５ｍｉｎ１０ｍｉｎ

Ⅰ～

ｂ）二甲苯５ｍｉｎ１０ｍｉｎ

Ⅱ～

５．３．２．４将样品依次放入下列液体中浸蜡（在相应温度条件的恒温箱中）：

ａ）５２℃５４℃石蜡３０ｍｉｎ

～Ⅰ

）石蜡

ｂ５６℃５８℃３０ｍｉｎ

～Ⅱ

）石蜡

ｃ５６℃５８℃３０ｍｉｎ

～Ⅲ

５．３．２．５包埋

将浸好蜡的组织块放入包埋框中包埋。

５．３．２．６切片

将包埋好的组织蜡块切成５ｍ厚的切片，用洁净的载玻片贴片。

μ

５．３．２．７烤片ㅤㅤㅤㅤ

将制作好的切片，放入４０℃５０℃电热恒温箱中烘烤２４ｈ。

～

５．３．３犎犈染色

５．３．３．１将切片依次放入下列溶液中：

ａ）二甲苯５ｍｉｎ

Ⅰ

ｂ）二甲苯５ｍｉｎ

Ⅱ

）二甲苯无水乙醇（）混合液

ｃ∶１∶１２ｍｉｎ

ｄ）无水乙醇２ｍｉｎ

Ⅰ

）乙醇

ｅ９５％２ｍｉｎ

Ⅱ

）乙醇

ｆ８５％２ｍｉｎ

）７０％乙醇２ｍｉｎ

ｇ

）乙醇

ｈ５０％２ｍｉｎ

）苏木精染色

ｉＥｈｒｌｉｃｈ１０ｍｉｎ１５ｍｉｎ

～

）蒸馏水洗２ｍｉｎ

ｊ

）盐酸酒精分化

ｋ１％１０ｓ３０ｓ

～

）自来水洗涤

ｌ５ｍｉｎ

ｍ）蒸馏水洗５ｍｉｎ

）乙醇

ｎ５０％５ｍｉｎ

）乙醇

ｏ７０％５ｍｉｎ

）８５％乙醇５ｍｉｎ

ｐ

）９５％乙醇５ｍｉｎ

ｑ

）伊红染色

ｒ１０ｓ２０ｓ

～

／—８

犛犅犜１０４６４２００８０

０

—

２

）乙醇

ｓ９５％２ｍｉｎ

）无水乙醇４

ｔ５ｍｉｎ

６

ｕ）无水乙醇５ｍｉｎ４

０

１

）二甲苯无水乙醇（）混合液

ｖ∶１∶１２ｍｉｎ

犜

ｗ）二甲苯２ｍｉｎ／

Ⅰ犅

ｘ）二甲苯２ｍｉｎ犛

Ⅱ

５．３．３．２染好的切片用中性树胶封片。

５．３．４切片镜检及判断

在２０×４０×物镜下，病灶中心见有呈菊花状排列的菌丝团块，即可判定为放线菌病理组织切片

～

检测阳性。

ㅤㅤㅤㅤ

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书号：·

１５５０６６２１９１２４