DB15/T 3185-2023 山药根尖染色体制片和核型分析技术规程

ICS65.020.01

CCSB01

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3185—2023

山药根尖染色体制片和核型分析技术规程

Technicalrulesforchromosomepreparationandkaryotypeanalysisin

roottipofyam

2023-10-30发布2023-11-30实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T3185—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院、鄂尔多斯市农牧业科学研究院、

巴彦淖尔市农牧业科学研究院所。

本文件主要起草人：霍秀文、张艳芳、郭树春、菅志亮、刘小燕、张晓蒙、张勇、邵盈、赵令敏、

乔慧蕾、邢丽南、葛明然、黄小龙。

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DB15/T3185—2023

山药根尖染色体制片和核型分析技术规程

1范围

本文规定了山药根尖染色体制片的试剂溶液配制、制片方法以及核型分析方法。

本文件适用于山药根尖染色体玻片制备和核型分析。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

DB15/T2788向日葵根尖染色体制片和核型分析技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

着丝粒centromere

染色体主缢痕部位的染色质，是染色体中将两条姐妹染色单体结合起来的区域。

核型karyotype

染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。

随体satellite

位于染色体末端的、圆形或圆柱形的染色体片段，通过次缢痕与染色体主要部分相连，主要由异染

色质组成，含高度重复的DNA序列，不具有常染色质的功能活性。

染色体核型分析chromosomekaryotyping

以分裂中期染色体为研究对象，根据染色体的长度、着丝粒位置、长短臂比例、随体的有无等特征，

对染色体进行分组、比较、排队、配对，并进行形态分析的过程。

4试剂配制

本文件用到的试剂参见附录A中表A.3。

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DB15/T3185—2023

5染色体标本的制备

样本的获取

选择打破休眠的山药块茎或者零余子，播种于装有育苗基质的营养钵中，在温度24℃±2℃，湿

度60%，光照强度3000lx的培养室中培养生根。

预处理

剪取0.5cm～1cm的根尖材料自来水冲洗后，置于8-羟基喹啉预处理液中14℃处理1h。

固定

将预处理的根尖蒸馏水冲洗后放入卡诺固定液中4℃固定24h。

前低渗

将固定后的根尖蒸馏水冲洗后置于0.075mol/L氯化钾溶液中，室温处理30min。

解离

将低渗处理后的根尖蒸馏水冲洗后置于0.25mol/L的盐酸溶液37℃水浴12min。再蒸馏水冲洗10

min后用乙酸-乙酸钠缓冲液浸泡4min，用3%纤维素酶和0.1%果胶酶酶解液37℃水浴18min。

后低渗

室温条件下蒸馏水后低渗处理30min以上。

染色压片

将处理后的根尖置于干净的载玻片，滴改良卡宝品红染液染色2min。盖上盖玻片轻压。

镜检及图像采集

在100倍的显微镜下观察中期分裂相，对染色体充分分散的分裂相进行拍照。

6染色体核型分析

分析方法

取30个以上中期分裂相进行染色体计数。选择背景清晰、染色体形态清晰的5个细胞进行染色体长

度的测量，用于核型分析。核型分析方法等见附录B，核型分类依据Stebbins的标准划分见附录B中表B.3。

测量

图像相关指标测量使用光学显微图像处理，测量方法参见附录A。

Excel计算