GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标

ICS13.060

C51GB

中华人民共和国国家标准

Gß/T5750.12-2006

部分代替GB/T5750一1985

生活饮用水标准检验方法

微生物指标

Standardexaminationmethodsfordrinkingwater一

Microbiologicalparameters

2006-12-29发布

2007-07-01实施

中华人民共和国卫生部4舍

中国国家标准化管理委员会战叩

GB/T5750.12-2006

目次

前言……1

1菌落总数…

2总大肠菌群………………….3

3耐热大肠菌群……………….14

4大肠埃希氏菌…………………16

5贾第鞭毛虫……19

6隐抱子虫………………….30

GB/T5750.12-2006

~

目Ij~

GB/T5750((生活饮用水标准检验方法》分为以下部分:

一一总则;

一二水样的采集和保存;

一一一水质分析质量控制;

一-感官性状和物理指标;

一-无机非金属指标;

-一一金属指标;

一-有机物综合指标;

一一有机物指标;

一-农药指标;

一→消毒副产物指标;

一-消毒剂指标;

一一微生物指标;

-一一放射性指标。

本标准代替GB/T5750-1985<<生活饮用水标准检验法》第二篇中的细菌总数、总大肠菌群。

本标准与GB/T5750-1985相比主要变化如下:

一一一依据GB/T1.1一2000((标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》调整了结构;

一一增加了生活饮用水中耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫、隐于包子虫4项指标的7个检

验方法。

本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。

本标准负责起草单位:中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所。

本标准参加起草单位:中山大学、黑龙江省疾病预防控制中心、河北省疾病预防控制中心、北京市疾

病预防控制中心、深圳市疾病预防控制中心、澳门自来水公司、广州市自来水公司。

本标准主要起草人:金银龙、陈西平、周淑玉、孙宗科、宋宏。

本标准参加起草人z遇晓杰、张淑红、张雅捷、丁培、薛金荣、余淑苑、范晓军、章诗芳。

本标准于1985年8月首次发布.本次为第一次修订。

I

Gß/T5750.12-2006

生活饮用水标准检验方法

微生物指标

1菌落总数

1.1平皿计数法

L1.1范围

本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。

本法适用于生活饮用水及其水摞水中菌落总数的测定。

1.1.2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

1.1.2.1

菌落总数standardplate-countbacteria

水样在营养琼脂上有氧条件下37"C培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。

1.1.3培养基与试剂

1.1.3.1营养琼脂

1.1.3.1.1成分:

A蛋白陈10g

B牛肉膏3g

C氧化铀5g

D琼脂10g~20g

E1000mL

蒸馆水

1.1.3.1.2制法:将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中(如用含杂

质较多的琼脂时，应先过滤)，经103.43kPa(121.C,15lb)灭菌20min，储存于冷暗处备用。

1.1.4仪器

1.1.4.1高压蒸汽灭菌器。

1.1.4.2干热灭菌箱。

1.1.4.3培养箱36.C土1.C。

1.1.4.4电炉。

1.1.4.5天平。

1.1.4.6冰箱。

1.1.4.7放大镜或菌落计数器。

1.1.4.8pH计或精密pH试纸。

1.1.4.9灭菌试管、平皿(直径9cm)、刻度吸管、采样瓶等。

1.1.5检验步骤

1.1.5.1生活饮用水

1.1.5.1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL

己融化并冷却到45.C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验

时应做一平行接种，同时另用→个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

0

1.1.5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36C土1.C培养箱内培养48h，进行菌落计数，

GB/T5750.12一2006

即为水样1mL中的菌落总数。

1.1.5.2水源水

1.1.5.2.1以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀

成1:10稀释液。

1.1.5.2.2吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释

液。按同法依次稀释成1:1000,1:10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL

灭菌吸管。

1.1.5.2.3用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。

以下操作同生活饮用水的检验步骤。

1.1.6..菌落计数及报告方法

作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数

后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下→步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿

有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片

状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌蔼

数。然后再求该稀释度的平均菌落数。

1.1.7不同稀释度的选择及报告方法

1.1.7.1首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范

围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中实例1)。

1.1.7.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于

2应报告两者的平均数(如表1中实例2)。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数(如表1中实例

3)。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见表1中实例的。

1.1.7.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告

之(见表1中实例5)。

1.1.7.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报

告之(见表1中实例的。

1.1.7.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘

以稀释倍数报告之(见表1中实例7)。

1.1.7.6若所有稀释度的平板上均元菌落生长，则以未检出报告之。

1.1.7.7如果所有平板上都菌落密布，不要用"多不可计"报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其

2

中2个平板1cm中的菌落数，除263.6c时，再乘其稀

求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积

释倍数作报告。

1.1.7.8菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两

位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表

1"报告方式"栏)。

表1稀释度选择及菌落总数报告方式

不同稀释度的平均菌落数

两个稀释度

菌落总数/

实例

报告方式!CCFU/mL)

10-110-210-3菌落数之比CCFU!mL)

1136516420164004

16000或1.6X10

22760295461.63775038000或3.8X104

32890271602.22710027000或2.7X104

41503Ò8215001500或1.5X103

2

GB/T5750.12-2006

表1(续)

不同稀释度的平均菌落数

两个稀释度菌落总数/

报告方式!CCFU/mL)

实例

10-110-210-3菌落数之比(CFU/mL)

5多不可计1650513513000510000或5.1X105

627115270270或2.7X102

7多不可计305123050031000或3.1X10'

2总大肠菌群

2.1多管发酵法

2.1.1范围

本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。

本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。

2.1.2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1.2.1

总大肠茵群totalcoliforms

0

总大肠菌群指→群在37C培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性庆氧的革兰氏阴性无芽抱

杆菌。

2.1.3培养基与试剂

2.1.3.1乳糖蛋白陈培养渡

2.1.3.1.1成分

A蛋白陈10g

n

pbo

毛

uhFUhFU

B牛肉膏

』

C乳糖

bU

D氯化铀

E漠甲酣紫乙醇溶液06g/U1mL

F蒸馆水1000mL

2.1.3.1.2制法

将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及氧化纳溶于蒸馆水中，调整pH为7.2~7.4.再加入1mL16g/L的澳甲

0

盼紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中.68.95kPa(115C.10lb)高压灭菌20min.贮存于

冷暗处备用。

2.1.3.2二倍浓缩乳糖蛋白陈培养液

按上述乳糖蛋白陈培养液(2.l.3.口，除蒸馆水外，其他成分量加倍。

2.1.3.3伊红美蓝培养基

2.1.3.3.1成分

A蛋白陈10g

B乳糖10g

C磷酸氢二伺2g

D琼脂20g~30g

E蒸馆水1000mL

F伊红水溶液(20g/U20mL

3

GB/T5750.12-2006

G美蓝水榕液(5g/U13mL

2.1.3.3.2制法

将蛋白陈、磷酸盐和琼脂溶解于蒸饵水中，校正pH为7.2.加人乳糖，混匀后分装，以68.95kPa

0

(115C.10lb)高压灭菌20mino临用时加热融化琼脂，冷至50oC~550C.加入伊红和美蓝榕液，混匀，

倾注平皿。

2.1.3.4草兰氏染色液

2.1.3.4.1结晶紫染色液

A成分:

a结晶紫1g

b乙醇(95%.体积分数)20mL

c草酸钱水溶液(10g/U80mL

B制法:将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸镀溶液混合。

注:结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单→成分，易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，

不能再用。

2.1.3.4.2草兰氏础液

A成分z

a腆1g

b腆化伺2g

c蒸馆水300mL

B制法:将腆和腆化何先进行混合，加入蒸馆水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馆水。

2.1.3.4.3脱色荆

乙醇(95%.体积分数)。

2.1.3.4.4沙黄复染液

A成分z

a沙黄0.25g

b乙醇(95%.体积分数)10mL

c蒸榴水90mL

B制法:将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馆水。

2.1.3.4.5染色法

A将培养18h~24h的培养物涂片。

B将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min.水洗。

C滴加革兰氏腆液，作用1min.水洗。

D滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s.水洗。

E滴加复染剂，复染1min.水洗，待干，镜检。

2.1.4仪器

0O

2.1.4.1培养箱:36C土lC0

2.1.4.2冰箱:OoC~40C。

2.1.4.3天平。

2.1.4.4显微镜。

2.1.4.5平皿:直径为9cm。

2.1.4.6试管。

2.1.4.7分度吸管:1mL.10mL。

GB/T5750.12-2006

2.1.4.8锥形瓶。

2.1.4.9小倒管。

2.1.4.10载玻片。

2.1.5检验步骤

2.1.5.1乳糖发酵试验

2.1.5.1.1取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白陈培养液中，取1mL水梓接种到10mL单料

乳糖蛋白脏、培养液中，另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，说匀后吸取1mL(即0.1mL水

样)注入到10mL单料乳糖蛋白陈培养液中，每一稀释度接种5管。

对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种5份10mL水样双料培养基，

每份接种10mL水样。

2.1.5.1.2检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，O.1,O.01mL甚至O.1,O.01,

0.001mL，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀

释后，取1mL接种，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌刻度吸管。

0O

2.1.5.1.3将接种管置36C士lC培养箱内，培养24h土2h，如所有乳糖蛋白陈培养管都不产气产

酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。

2.1.5.2分离培养

O

0

将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36C士lC培养箱内培养18h~24h，观察

菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。

深紫黑色、具有金属光泽的菌落;

紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落;

淡紫红色、中心较深的菌落。

2.1.5.3证实试验

0

O

经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽抱杆菌，同时接种乳糖蛋白脏、培养液，置36C土lC培养箱中培

养24h土2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。

2.1.6结果报告

根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN(mostprobablenumber，最可能数)检索表，报告每

100mL水样中的总大肠菌群最可能数(MPN)值。5管法结果见表2，15管法结果见表3。稀释样品查

表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠菌群未检出o

表2用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数(MPN)

最可能数(MPN)

5个10mL管中阳性管数

O<2.2

12.2

25.1

39.2

416.0

5>16

5

GB/T5750.12-2006

表3总大肠茵群MPN检索表

(总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样.5份0.1mL水样)

接种量/mL

接种量/mL

总大肠茵群/

总大肠菌群/

101O.1(MPN/100mL)101O.1(MPN/100mL)

OOO<21OO2

OO121O14

OO24lO26

O351O38

。

OO471O410

OO591O512

O211O4

。

1I411I6

。

1261128

。

。3711310

149l1412

。

151111514

。

2O412O6

。

O2161218

22712210

。

23912312

。

241112415

。

251312517

。

。3O613O8

3l713110

。

。32913212

3311l3315

。

。341313417

351513519

。

4O814O11

。

41914113

。

421114215

。

431314317

。

441514419

。

451714522

。

O5O915O13

O511115115

。521315217

O531515319

O541715422

O551915524

6

GB/T5750.12-2006

表3(续)

接种量/mL

接种量/mL

总大肠菌群/

总大肠菌群/

101O.1(MPN/100mL)101O.1(MPN/100mL)

2O。53OO8

2O173O111

2O293O213

2。3123O316

2O4143O420

2O5163O523

21O731O11

211931114

2121231217

2131431320

2141731423

2151931527

22O932O14

2211232117

2221432220

2231732324

2241932427

22υ俨2232531

23O1233O17

2311433121

2321733224

2332033328

2342233432

2