GB/T 22946-2008 蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素、交沙霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T22946—2008

蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、

红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、

克林霉素、吉他霉素、交沙霉素

残留量的测定液相色谱-串联质谱法

Determinationoflincomycin,erythromycin,tilmicosin,tylosin,spiramycin,

clindamycin,kitasamycinandjosamycinresiduesinroyaljellyand

lyophilizedroyaljellypowder—LC-MS-MSmethod

2008-12-31发布2009-05-01实施

GB/T22946—2008

前言

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：王飞、王海洋、曹彦忠、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。

T

GB/T22946—2008

蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、

红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、

克林霉素、吉他霉素、交沙霉素

残留量的测定液相色谱■串联质谱法

1范围

本标准规定了蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉

素、吉他霉素和交沙霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉

素、吉他霉素和交沙霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限：蜂王浆中的林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉

他霉素、交沙霉素均为2.0“g/kg；蜂王浆冻干粉中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、克林霉素、交沙霉素

均为2.0Mg/kg,替米考星、螺旋霉素、吉他霉素均为5.0Mg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/TG379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1祁分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD)

3原理

蜂王浆和蜂王浆冻干粉中林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、克林霉素、吉他霉素和

交沙霉素的残留用Tris提取液提取，提取液经OasisHLB固相萃取柱"净化，甲醇洗脱，洗脱液浓缩定

容后，供液相色谱-串联质谱法测定。外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1水:GB/T6682,—级。

4.2甲醇:色谱纯。

4.3乙酸钱。

4.4乙睛：色谱纯。

4.5盐酸。

1)OasisHI.B固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

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GB/T22946—2008

4.6三羟甲基氨基甲烷(Tris)：C4HllN()3o

4.7氯化钙(CaCl2-2H2O)o

4.8甲醇溶液(2+3)：量取400mL甲醇(4.2)与600mL水混合。

4.90.01mol/L乙酸钱溶液：0.77g乙酸钱(4.3)溶解于水中，定容于1000mL容量瓶中。

4.10定容液：0.01mol/L乙酸钱溶液(4.9)+乙睛(4.4)(17+3)。

4.11Tris提取液：称取12.0g三径甲基氨基甲烷(4.6)和7.35g氯化钙(4.7)溶解于水中，用盐酸

(4.5)调节pH值为9,定容至1000mL。

4.12标准物质:林可霉素(CAS：7179-49-9).红霉素(CAS：59319-72-1).替米考星(CAS：108050-54-0).泰

乐菌素(CAS：74610-55-2)、螺旋霉素(CAS：8025-81-8)、克林霉素(CAS：21462-39-5)、吉他霉素

(CAS：1392-21-8)和交沙霉素(CAS：16846-24-5)纯度$95%。

4.13标准储备溶液I：l.Omg/mL。分别准确称取每种标准物质(4.12)适量，分别放入相对应的

10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4C保存。

4.14标准储备溶液IT：10.0(ug/mL0分别吸取0.1mL各标准储备溶液(4.13),分别放入相对应的

10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4C保存。

4.15标准工作溶液：2.0Mg/mLo分别吸取2.0mL标准储备溶液(4.14),分别放入相对应的10mL

容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

4.16OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg,6mLo使用前，依次用10mL甲醇和10mL水活化，

在抽真空前的各步骤中，都保持柱体湿润。

4.17滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。

5.2天平：感量0.01g,0.0001gn

5.3固相萃取装置。

5.4氮气浓缩仪。

5.5具塞聚丙烯离心管：50mLo

5.6离心机。

5.7超声波清洗仪。

5.8pH计。

5.9振荡器。

6试样制备与保存

6.1试样的制备

从全部样品中取出有代表性样品约200g,充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作

为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2试样的保存

将蜂王浆试样于一18C保存。蜂王浆冻干粉试样密封保存，防止吸潮。

7测定步骤

7.1提取

称取2g蜂王浆试样(蜂王浆冻干粉取1g),精确至0.01g,置于50mL离心管(5.5)中，加入

10.0mLTris提取液(4.11),于振荡器上剧烈振荡10min。以18000g离心力离心10min,取上清液

以小于1.0mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱(4.16)。再加入10.0mLTris提取液(4.11),

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GB/T22946—2008

于振荡器上剧烈振荡10mino以18000g离心力离心10min,取上清液以小于1.0mL/min的流速通

过OasisHLB固相萃取柱。

7.2净化

待样液全部流出后，依次用10mL水和10mL甲醇溶液（4.8）洗柱，弃去全部流出液，将固相萃取

柱用真空泵减压抽干1h0再用10mL甲醇（4.2）洗脱于15mL氮吹管中，用氮气浓缩仪于50C水浴

中吹至近干，准确加入1.0mL定容液（4.10）后，于超声波清洗仪中溶解残渣。过0.2滤膜（4.17）

后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3基质标准混合工作溶液的制备

7.3.1蜂王浆用基质标准混合工作溶液的制备：分别吸取1.0“L、2.0卩L、5.0；zL、25卩L的林可霉素、

红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素标准工作溶液（4.15）,依次加入

相对应的阴性样品中，按7.1.7.2步骤制备林可霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、克林霉素、螺旋霉

素、吉他霉素和交沙霉素分别为2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL四个浓度水平的系

列基质标准混合工作溶液。

7.3.2蜂王浆冻干粉用基质标准混合工作溶液的制备：分别吸取1.0卩L、2.0卩L、5.0卩L、25卩L林可

霉素、红霉素、克林霉素、泰乐菌素、交沙霉素标准工作溶液（4.15）和2.5“L、5.0mL,10.0卩L、25卩L的

替米考星、螺旋霉素、吉他霉素标准工作溶液（4.15）,依次加入相对应的阴性样品中，按7.1.7.2步骤制

备林可霉素、红霉素、克林霉素、泰乐菌素、交沙霉素分别为2.0ng/mL.4.0ng/mL、10.0ng/mL、

50.0ng/mL和替米考星、螺旋霉素、吉他霉素分别为5.0ng/mL^lO.0ng/mL、20.0ng/mL50.0ng/mL四

个浓度水平的系列基质标准混合工作溶液。

7.4测定条件

7.4.1液相色谱参考条件

a）色谱柱:AtlantisCia,3/am,150mmX2.1mm（内径）或相当者；

b）流动相：A：乙睛，B：0.1%甲酸水溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1;

c）流速：0.2mL/min；

d）柱温：30C；

e）进样量:20卩L。

表1梯度洗脱条件

时间/minA/%B/%c/%

0.0090.05.05.0

5.005.090.05.0

9.005.090.05.0

9.10