GA/T 1616-2019 法庭科学 生物检材中氯霉素检验 液相色谱和液相色谱-质谱法

ICS13.310

A92GA

中华人民共和国公共安全行业标准

GA/T××××－××××

法庭科学生物检材中氯霉素检验

液相色谱和液相色谱-质谱法

Forensicsciences—Examinationmethodsforchloramphenicolin

biologicalsamples—HPLCandLC-MS

××××-××-××发布××××-××-××实施

中华人民共和国公安部发布

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会(SAC/TC179/SC1)提出并归口。

本标准起草单位：北京市公安局法医检验鉴定中心、公安部物证鉴定中心。

本标准起草人：乔静、杨士云、袁增平、张文芳、任昕昕、王瑞花、王芳琳、于忠山。

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法庭科学生物检材中氯霉素检验

液相色谱和液相色谱-质谱法

1范围

本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中氯霉素的高效液相色谱（HPLC）

定量检验方法和液相色谱-质谱（LC-MS）定性定量检验方法。

本标准适用于法庭科学生物检材中氯霉素的定性分析和定量分析。其他可疑样品中氯霉素的定性分

析和定量分析可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用高效

液相色谱法定量，液相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定

性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。

5试剂和材料

5.1试剂

实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试

剂包括：

a)甲醇（色谱纯）；

b)乙腈（色谱纯）；

c)乙酸乙酯；

d)无水硫酸钠；

e)磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钾（KHPO·3HO）17.4g，磷酸二氢钾（KHPO）13.6g，加入

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一定量的水溶解并稀释至1000mL，再用磷酸调节至pH=6.0；

f)2%乙酸/甲醇溶液：移取乙酸2.0mL，加入甲醇98mL，混匀；

g)1%甲醇/水溶液：移取甲醇1.0mL，加入水99mL，混匀；

h)15%甲醇/乙腈溶液：移取甲醇15.0mL，加入乙腈85mL，混匀；

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i)0.06%三氟乙胺/0.06%三乙胺/0.25%乙腈/水溶液：分别移取三氟乙胺0.6mL，三乙胺0.6mL，

乙腈2.5mL加水至1000mL，混匀；

j)标准溶液：

1)1.0mg/mL标准物质溶液：根据氯霉素标准物质纯度和盐型换算后，称取适量，用甲醇配

制成1.0mg/mL的氯霉素标准物质溶液，置于冰箱中冷冻保存。有效期6个月。或采用市

售标准溶液；

2)0.1mg/mL标准工作液：移取1.0mg/mL的氯霉素标准物质溶液1.0mL于10mL容量瓶中，

用甲醇定容至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期3个月。实验中所用其

他浓度的单一标准工作溶液均由1.0mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。

注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。

5.2材料

材料包括：

a)具盖离心管；

b)有机微孔滤膜：0.22µm；

c)硅胶柱：500mg；

d)固相萃取柱：Oasis®MCX或Oasis®HLB固相萃取柱或其他等效固相萃取柱，使用前依次用

甲醇、水活化。

注：Oasis®MCX、Oasis®HLB柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不

是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

6仪器和设备

仪器和设备包括：

a)液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；

b)高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器（DAD）；

c)电子天平；

d)离心机；

e)振荡器；

f)移液器；

g)浓缩器。

7操作方法

7.1定性分析

7.1.1样品提取

7.1.1.1液液萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g～2.0g于具盖离

心管中，并按照以下任意一种方法操作：

a)加入乙酸乙酯8.0mL，振荡5min，超声10min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提

取一次，合并两次提取的有机相，过15.0g无水硫酸钠后，置于浓缩器上60℃下浓缩至干，残

留物用乙腈1.0mL溶解，经有机系微孔滤膜过滤，供仪器分析；

b)加入15%甲醇/乙腈溶液8.0mL，振荡5min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一

次，合并两次提取的有机相，过处理好的硅胶柱，收集流出液置于浓缩器上60℃下浓缩至干，

残留物用乙腈1.0mL溶解，经有机系微孔滤膜过滤，供仪器分析。

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7.1.1.2固相萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL～2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g～2.0g于具盖离

心管中。加入pH6.0的磷酸盐缓冲液5.0mL，混匀，超声15min，8000r/min离心20min，取上清液转移

至已活化好的HLB或MCX固相萃取柱，控制流速为1.0mL/min，依次用pH6.0的磷酸盐缓冲液3mL、

1%甲醇/水溶液3mL淋洗，控制流速为3.0mL/min，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用2%

乙酸/甲醇溶液3mL洗脱，控制流速为1.0mL/min，收集洗脱液，洗脱液置于浓缩器上在60℃下浓缩至

干，残留物用乙腈1.0mL溶解，经有机微孔滤膜过滤，供仪器分析。

7.1.1.3质控样品制备

取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作

为空白样品，一份添加氯霉素标准物质，作为添加样品（LC-MS添加样品的浓度为0.1µg/mL(g)），与

检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。

7.1.2仪器检测

7.1.2.1仪器条件

7.1.2.1.1高效液相色谱条件

以下三种参考条件均满足检测要求。每种条件可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调

整：

a)色谱参考条件一：

1)色谱柱：XTerraMSC18色谱柱（2.1mm×150mm，3.5µm）或其他等效柱；

注：XTerraMSC18色谱柱为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

2)柱温：35℃；

3)流速：0.3mL/min；

4)流动相及梯度洗脱程序：见表1；

5)检测波长：280nm；参考波长：360nm；

表1梯度洗脱程序

时间流动相A流动相B

min（水）（乙腈）

195%5%

810%90%

1095%5%

1595%5%

b)色谱参考条件二：

1)色谱柱：XTerraMSC18色谱柱（2.1mm×50mm，3.5µm）或其他等效柱；

注：XTerraMSC18色谱柱为Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表

示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

2)柱温：35℃；

3)流速：0.4mL/min；

4)流动相及梯度洗脱程序：见表2；

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5)检测波长：280nm；参考波长：360nm；

表2梯度洗脱程序

时间流动相A流动相B

min（水）（甲醇）

180%20%

510%90%

780%20%

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