GB/T 21316-2007 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

ICS67.120

X04OB

中华人民共和国国家标准

GB/T21316—2007

动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定

液相色谱质谱/质谱法

Determinationofresiduesofsulfonamidesinfoodstuffsofanimalorigin—

LC-MS/MS

2007-10-29发布2008-04-01实施

发布

GB/T21316—2007

刖

本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫

局、中国检验检疫科学研究院。

本标准主要起草人：林黎明、张鸿伟、王凤美、牟俊、彭涛、荣会、梁增辉。

T

GB/T21316—2007

动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定

液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了动物源性食品中磺胺类共计23种磺胺药物残留量高效液相色谱-质谱/质谱测定

方法。

本标准适用于肝、肾、肌肉、水产品和牛奶等动物源性食品中磺胺腓、甲氧节喘、磺胺索囉喘、磺胺醋

酰、磺胺喀喘、磺胺毗睫、磺胺廛卩坐、磺胺甲嚅喘、磺胺鲫輕、磺胺一甲嚅噪、磺胺甲氧嗪、磺胺甲一瞠、磺

胺对甲氧吨睫、磺胺间甲氧囉礎、磺胺氯达嗪、磺胺多辛、磺胺甲鲫睦、磺胺异鲫睦、磺胺苯酰、磺胺地索

辛、磺胺座沙咻、磺胺苯毗瞠和磺胺硝苯残留量的定性确证和定量测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法(ncqISO3696：1987)

3原理

试样中加入G*填料后研磨均匀，其中磺胺类药物残留用乙睛-水在微波辐照辅助下进行提取，用乙

睛饱和的正己烷液液分配净化。用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682-1992规定的一级水。

4.1乙月青：色谱纯。

4.2甲酸：优级纯。

4.3正己烷：色谱纯。

4.4正丙醇。

4.5无水硫酸钠：优级纯，500C灼烧4h,置于干燥器中备用。

4.6Ci*填料：40卩m。

4.7硅藻土：化学纯。

4.8乙睛-水(1000+30)溶液:量取1000mL乙睛，加入30mL水，混合均匀。

4.9乙睛-水(1+1)溶液:将乙月青(4.1与水按体积比1:1混合均匀。

4.10水-甲酸(999+1)：准确吸取1mL甲酸(4.2)于1000mL容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。

4.11乙睛饱和正己烷：量取200mL正己烷(4.3于250mL分液漏斗中，加于少量乙睛，剧烈振摇数

分钟，静止分层后，弃去下层乙月青层即得。

4.12标准物质：磺胺眯(sulfaguanidinc,SGN、甲氧节睫(trimethoprim,TMP、磺胺索囉喘(sulfiso-

midine,SIM、磺胺醋酰(sulfacetamide,SAA、磺胺喀腱(sulfadiazine,SDZ、磺胺毗®(sulfapyri­

dine,SPD、磺胺廛睦(sulfathiazole,STZ、磺胺甲囉腱(sulfamerazine,SMR、磺胺噁哩(sulfamox-

olc,SMO、磺胺二甲囉睫(sulfadimidine,SDM、磺胺甲氧嗪(sulfamethoxypyridazine,SMP、磺胺甲

1

GB/T21316—2007

二醴(sulfamethizole，SMT、磺胺对甲氧囉睫(sulfamethoxydiazine，SMD、磺胺间甲氧囉噪(sulfam-

onomethoxine9SMM、磺胺氯达嗪(sulfachlorpyridazine,SCP、磺胺多辛(sulfadoxine，SDX、磺胺甲

噁(sulfamethoxazole?SMZ、磺胺异噁P^Csulfafurazole,SFZ、磺胺苯酰(sulfabenzamide,SEA、磺

胺地索辛(sulfadimethoxine，SDT、磺胺嗪沙啾(sulfaquinoxaline，SQX、磺胺苯卩比卩坐(sulfaphenazole，

SPA、磺胺硝苯(sulfanitran,SAN),纯度大于等于99%。

4.1323种磺胺标准储备溶液：0.1mg/mL0分别准确称取按其纯度折算为100%的每种磺胺标准物

质(4.12)10.0mg,用乙睛溶解并定容至100mL,该标准储备溶液一20C避光保存，有效期12个月。

4.1423种磺胺混合标准中间溶液:10Mg/mLo准确移取各种磺胺类标准储备溶液(4.13)10mL于

100mL棕色容量瓶中，用乙睛定容至刻度。该混合标准中间溶液在一20C避光保存,有效期6个月。

4.1523种磺胺混合标准工作溶液:根据需要用乙月青-水(4.9)由混合标准中间溶液(4.14)稀释成合适

的混合标准工作溶液，现用现配。

5仪器和设备

5.1液相色谱-质谱串联仪：配有电喷雾离子源。

5.2高速组织捣碎机。

5.3均质器。

5.4旋转蒸发器。

5.5氮吹仪。

5.6涡旋混匀器。

5.7分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。

5.8真空泵。

5.9移液器：1mL,2mLo

5.10棕色鸡心瓶：150mL„

5.11样品瓶：2mL,带聚四氟乙烯旋盖。

5.12大号玻璃研钵。

5.13pH计:测量精度±0.2。

5.14离心机。

5.15棕色分液漏斗：100mLo

5.16具螺旋盖聚四氟乙烯离心管：50mL0

5.17超纯水仪。

5.18微波炉：家用，带有光波模式，功率700Wo

5.19超声波发生器。

6试样制备与保存

6.1肌肉、内脏、鱼和虾

从原始样品中取出代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两

份,分别装入清洁容器内，加封后作出标记,一份作为试样，一份作为留样。将试样于一20C保存。

6.2肠衣

从原始样品中取出代表性样品，用剪刀剪成4mm2的碎片，用四分法缩分出适量试样，均分成两

份,分别装入洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于一2(TC保存。

6.3牛奶

从原始样品中取出代表性样品，用组织捣碎机充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内，加封后

作出标记,一份作为试样，一份作为留样。将试样于4C避光保存。

2

GB/T21316—2007

7样品处理

7.1提取

7.1.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣

称取2g（精确至0.01g）试样置于玻璃研钵内，再称取约6g（精确至0.01g）C”填料（4.6）加至试

样上用玻璃杵轻轻研磨，使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙

烯离心管中，加入25mL乙睛-水溶液（4.8）,旋涡振荡1min,放入家用微波炉中在光波模式下微波辐

照30s,3000r/min离心5min,将乙月青层移入100mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入

25mL乙月青摇匀，微波辅助提取30s,3000r/min离心5min，合并乙睛提取液，待净化。

7.1.2牛奶

取2g（精确至0.01g）牛奶，置于玻璃研钵内，加入6g（精确至0.01g）硅藻土（4.7）,另加入6g

（精确至0.01g）Gx填料（4.6）,用玻璃杵轻轻研磨30s,使样品与填料混合均匀（色泽均一，状态分散），

装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯试管中，加入25mL乙睛-水溶液（4.8）,旋涡振荡1min,放入家用微

波炉中光波模式下微波辐照30s,于3000r/min离心5min,将乙睛层移入100mL棕色分液漏斗中。

离心后的沉淀物再加入25mL乙睛摇匀，微波辅助提取30s,于3000r/min离心5min，合并乙月青提取

液，待净化。

7.2净化

提取液中加入25mL乙睛饱和正己烷溶液（4.11）,振摇5min,将底层乙睛溶液移入150mL棕色

鸡心瓶中，加入10mL正丙醇（4.4）,用旋转蒸发仪于45C水浴中减压蒸发至近干，氮气流吹干。准确

加入1mL乙睛-水溶液（4.9）,超声30s溶解残渣，将溶解液移入10mL棕色离心管中，加0.5mL乙

睛饱和正己烷（4.11）,涡旋振荡2min,于3000r/min离心5min,弃去正己烷溶液，取底层乙月青-水溶液

过0.22微孔滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱测定。

8测定

&1标准工作曲线制备

用相应的空白样品基质提取液制备混合标准浓度系列，分别为10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL、

200ng/mL、l000ng/mL（分别相当于测试样品中含有5pg/kg、10卩g/kg、20yg/kg、100yg/kg、

500Mg/kg的目标化合物），按&2和&3规定测定并制备标准曲线。

&2液相色谱条件

a）色谱柱：IntersilODS-3,5^m,15OmmX4.6mm（内径），或相当者；

b）流动相及洗脱条件见表1;

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min流动相A（乙睛）流动相B（0.1%甲酸）

0.00.599.5

5.01090

25.05050

30.04060

30.50.599.5

40.00.599.5

c）流速：0.8mL/min；

d）柱温：20C；

e）进样量：20卩L。

3

GB/T21316—2007

&3质谱/质谱条件

参见附录A。

&4液相色谱-质谱/质谱测定

&4.1定性测定

按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质量色谱峰的保留吋间与标准溶

液相比在土2.5%的允许偏差之内；待测化合物的定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于3

（S/N》3）,定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于1O（S/N^1O）；定性离子对的相对丰度

与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的目标化合

物。23种磺胺混合标准工作溶液的液相色谱/串联质谱多反应监测（MRM）色谱图和各磺胺药物相对

保留吋间参见图B.1和表B.1。

表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度>50%>20%〜50%>10%〜20%<10%

允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%

8.4.2定量测定

按照外标法进行定量计算。

9结果计算

试样中每种磺胺药物残留量利用数据处理系统计算或按式（1）计算:

式中：

X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（Mg/kg）；

c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m试样溶液所代表的质量，单位为克（g）o

注：计算结果应扣除空白值。

10定量限（LOQ）

本方法在动物肝、肾、肌肉组织和牛奶中23种磺胺药物残留的定量限均为50pg/kg；在水产品中

23种磺胺药物残留的定量限为10（ug/kgo

11回收率和精密度

参见表C.1〜表C.5o

4

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附录A

（资料性附录）

质谱/质谱测定参考条件"

质谱/质谱测定参考条件：

a）离子源：电喷雾离子源；

b）扫描方式：正离子扫描；

c）检测方式：多重反应监测（MRM）；

d）电喷雾电压：5500V；

e）雾化气压力：0.065MPa；

0气帘气压力：0.016MPa；

g）辅助气压力：0.060MPa；

h）离子源温度：475°C；

i）定性离子对、定量离子对、碰撞电压和去簇电压，见表A.1。

表A.123种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰撞电压和去簇电压

名称定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）碰撞电压/V去簇电压/V

215/1561855

磺胺咪215/156

215/1083055

291.1/2303385

甲氧节喘291.1/230

291.1/2613585

279.2/1243070

磺胺索喀喘279.2/124

Z79.2/186Z570

215/1561855

磺胺醋酰215/156

215/1083055

251/1562455

磺胺喘喘251/156

251/1083560

250/1562465

磺胺毗喘250/156

250/1842465

256/1562460

磺胺唾吐256/156

256/1083560

265/1562560

磺胺甲喀唏265/156

265/1722460

268/1562260

磺胺噁哇268/156

268/1132465

279/1562670

磺胺二甲喘喘279/156

279/1862570

281/1562570

磺胺甲氧嗪281/156

281/1083770

1）所列参数是在API4000串联质谱仪上完成的，此处列出的实验用型号仅是为了捉供参考，并不涉及商业目的，

鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。

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表A.1（续）

名称定性离子对(m/z定量离子对(m/z碰撞电压/V去簇电压/V

271/1562240

磺胺甲二哩271/156

271/1083550

281/1562570

磺胺对甲氧喀喘281/156

281/1083770

281/1562570

磺胺间甲氧喀喘281/156

281/1083770

285/1562240

磺胺氯达嗪285/156

285/1083540

311/1562575

磺胺多辛311/156

311/1084075

254/1562365

磺胺甲噁哩254/156

254/1083565

268/1562260

磺胺异噁醴268/156

268/1132465

276.9/1562067

磺胺苯酰276.9/156

276.9/1083567

311/1562575

磺胺地索辛311/156

311/1084075

301/1562570

磺胺隆沙咻301/156

301/1083670

315/1563080

磺胺苯毗哩315/156

315/2223080

336.1/2942175

磺胺硝苯336.1/294

336.1/1982675

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附录B

（资料性附录）

标准溶液液相色谱/串联质谱色谱图和参考保留时间

9

農、

2.X

IXM

NX

1.M

9.RTs-20.31

\.M

535

U.O

24HK101214WIHW22242H2H.)0^2M：IM：IH

z/rnin

图B.123种磺胺标准工作溶液液相色谱/串联质谱色谱图

表B.123种磺胺标准工作溶液参考保留时间

化合物名称保留时间/niin化合物名称保留时间/min

磺胺眯6.4磺胺对甲氧喀咙17.0

甲氧节呢9.9磺胺间甲氧喀咙18.2

磺胺索喀呢10.1磺胺氯达嗪19.1

磺胺醋酰12.2磺胺多辛19.3

磺胺喀喘12.9磺胺甲噁哩20.3

磺胺毗喘13.7磺胺异噁睦21.1

磺胺唾哩13.8磺胺苯酰22.7

磺胺甲喀呢14.5磺胺地索辛22.8

磺胺噁醴15.1磺胺唾沙咻22.8

磺胺二甲喘喘15.5磺胺苯毗哇23.5

磺胺甲氧嗪16.5磺胺硝苯26.4

磺胺甲二醴16.6——

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附录C

(资料性附录)

添加回收率

表C.1鸡肉中磺胺类抗生素添加回收及相对标准偏差(»=6)

添加浓度/平均测定浓度/平均回收率/相对标准偏差/

化合物

(”g/kg(“g/kg%%

5036.272.476

磺胺眯10076.376.398

200174.087.064

5039.579.067

甲氧节噪10082.182.143

200163.681.811.2

5042.9585.974

磺胺索喘喘10096.796.71C.6

20019&099.076

5042.084.01C.4

磺胺醋酰10090.390.392

200204.8102.469

5040.681.274

磺胺I密啜10080.980.911・5

200172.086.089

5042.084.073

磺胺毗陀10097.497.484

200210.0105.0