YY/T 0688.1-2008 临床实验室检测和体外诊断系统 感染病原体敏感性试验与抗菌剂敏感性试验设备的性能评价 第1部分：抗菌剂对感染性疾病相关的快速生长需氧菌的体外活性检测的参考方法

ICS11．100

C44

、、

中华人民共禾口国医药行业标准

YY／T

临床实验室检测和体外诊断系统

感染病原体敏感性试验与抗菌剂敏感性

试验设备的性能评价第1部分：抗菌剂

对感染性疾病相关的快速生长需氧茵的

体外活性检测的参考方法

Clinicalandinvitrotest

laboratorytestingdiagnosticsystems--

ofandevaluationof

infectious

Susceptibilitytestingagents

ofantimicrobialdeVices——

performancesusceptibility

forvitroof

Part1：Referencemethodthein

testingactivity

antimicrobial

agentsagainstrapidly

aerobicbacteriainvolvedininfectiousdiseases

growing

(ISO20776

1：2006，MOD)

2008-IO-17发布

国家食品药品监督管理局发布

YY／T

目次

前言……………………

引言……………………

1范围………………

2术语及定义……………………··

3试验程序…………ⅢⅣ，●0

3．1概述……………0

3．2培养基…………··0

3．3抗菌剂·………-………-……-………·……·…··0

3．4接种菌液的制各………………t，

3．5微量稀释盘的接种………-

3．6微量稀释盘的孵育…………

3．7结果的判读……--……-……

3．8MIC结果可能不能反映抗菌剂真实活性的特殊情况及其处理

4质量控制…………

附录A(规范性附录)对于MuellerHinton肉汤的要求……

参考文献……………··0加如加U地坞∞

YY／T0688．1—2008

刖昂

YY／T

0688的本部分修改采用ISO

敏感性试验与抗菌剂敏感性试验设备的性能评价第1部分：抗菌剂对感染性疾病相关的快速生长需

氧菌的体外活性检测的参考方法》。

本部分与ISO20776一l：2006，差异如下：

a)在引言添加“注：已知对某抗菌剂固有耐药的细菌不做敏感性试验”的说明。

nutritive

b)将原文中的“non—selectiveagarmedium”译成“非选择性琼脂培养基”(在临床检验实

际工作中，非选择性培养基与营养琼脂是两种截然不同的培养基，而试验菌株从储存培养物

到工作培养物的所有传代培养用固体培养基均建议使用前者。如此翻译是为了避免与营养

琼脂相混淆)。

c)将“4质量控制……质控菌株的工作培养物可通过储存菌株在非选择性琼脂培养基上再培养

获得。……”中的“再培养”改为“连续传代培养两次”；“储存菌株”改为“参考菌株的储存培养

养次数的规定)。

d)将“4质量控制……进一步的传代培养只能用第一次工作培养物(不能超过一周)进行。……”

改为“4质量控制……工作培养物只能蒋传代一次，且使用时间不能超过一周。……”(结合

临床检验工作的实际，并严格遵守CLSI在M7一A6中对菌株工作培养物的使用时间及传代培

养次数的规定)。

为便于使用，本标准相对于国际标准原文还做了下列编辑性修改：

a)将“本国际标准”一词改为“本部分”；

b)用小数点“．”代替作为小数点的逗号“，”；

c)删除国际标准原文中的前言。

本部分的附录A为规范性附录。

本部分由国家食品药品监督管理局提出。

本部分由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(SAC／TC136)归口。

本部分主要起草单位：北京市医疗器械检验所、南京医科大学附属第一医院。

本部分主要起草人：童明庆、王辉。

Ⅲ

0688．1—2008

YY／T

引言

抗菌剂体外敏感性试验通常是针对于可能导致疾病的微生物，尤其是那些被认为对频繁使用的抗

菌剂呈现耐药性的微生物种属”。除此之外，该试验在细菌耐药性监测及其流行病学研究以及新抗菌

剂与现有抗菌剂之间的比较等方面也很重要。

稀释法常被用来测定抗菌剂的最小抑菌浓度(MICs，minimum

inhibitory

剂敏感性试验的参考方法。MIC法通常用于细菌耐药性监测、新抗菌剂与现有抗菌剂之间的比较，该

法也用于常规方法所得结果不可靠或f临床需要定量结果的微生物的敏感性试验。对于稀释法测试，某

抗菌剂对于特定微生物的MIC值是通过观察微生物分别在含有系列稀释浓度的该抗菌剂的一系列琼

脂平板(琼脂稀释法)上或肉汤(肉汤稀释法)中的可见的生长能力来确定的。

抗菌剂的最小抑菌浓度(MIC值)是指在规定的体外条件下，规定的孵育时间内，能抑制某特定微

对抗菌剂的敏感性从而帮助他们制定合理的用药方案。由于所用方法可能显著地影响试验结果，为了

确保室内试验结果的可重复性和室间试验结果的可比性，实验室需要进行严格的质量控制及试验程序

值±1个倍比稀释度的范围内是可以被接受的。

肉汤稀释法：是一种向一系列相同体积的含抗菌剂的肉汤培养基(其中所含某抗菌剂的浓度通常是

以几何级数递增的)中接种已知固定量某微生物以确定该微生物对该抗菌剂的MIC值的方法。

肉汤微量稀释法：顾名思义，就是在微量稀释盘中进行肉汤稀释试验。

与法国…、德国”1、瑞典‘“、英国‘43和美国…等许多国家目前所用的方法是一致的，该法与欧洲抗菌剂敏

Ericsson和Sherris”3所描述方法的基础上发展而来的。

1)已知对某抗菌剂固有耐药的细菌不做敏感性试验。

Ⅳ

0688．1—2008

YY／T

临床实验室检测和体外诊断系统

感染病原体敏感性试验与抗茵剂敏感性

试验设备的性能评价第1部分：抗茵剂

对感染性疾病相关的快速生长需氧菌的

体外活性检测的参考方法

1范围

YY／T

反映抗菌剂在规定的体外试验条件下的抗菌活性。医生在制定用药方案时，不但要参考MIC结果，还

应考虑诸如药物在人体内的药代／药效学参数以及细菌对抗菌剂的耐药机制等其他因素。对于某种抗

另外，MIC值可用于确定该受试菌株是野生型还是非野生型。尽管解释MIC值的临床意义已超出了

本部分的范畴，但为了适应I临床需要，根据不同抗菌剂一细菌组合对方法的基本内容进行调整是必要的。

这些调整体现在下列各表格中。为了确保试验结果的可比性与可靠性，其他药敏试验方法(如常规方法

或抗菌剂敏感性试验设备)应该和本参考方法进行比对以确定其准确性。

2术语及定义

下列术语和定义适用于YY／T0688的本部分。

2．1

抗菌剂antimicrobial

agent

一类可以抑制或杀死微生物，可能用于抗感染治疗的生物来源的、合成的或半合成的物质的总称。

注：消毒剂、灭菌剂和防腐剂不在此定义范围内。

2．2

ofantimicrobial

抗菌剂属性propertiesagents

2．2．1

效价potency

受试物中有效抗菌活性成分所占比例，是受试物通过生物学方法所测值与相同质量或体积的参考

品通过相同方法测得值的比率。

质的量浓度(tool／L)。

2．2．2

浓度concentration

抗菌剂在规定体积溶液中的量。

注1：常用毫克／升(rag／L)来表示。

注2：虽然rag／L--,ug／mL，但不推荐使用>g／mL作为单位。

2．3

solutions

原液stock

用于进一步稀释的初始浓度溶液。

1

YY／T0688．1—2008

2．4

最小抑菌浓度minimumconcentrationMIC

inhibitory

在规定的体外试验条件下，在规定的孵育时间内，能抑制细菌出现肉眼可见生长的最低浓度。

注：常用mg／I，表示。

2．5

BP

折点breakpoints

用以界定受试细菌对某抗菌剂是敏感、中介或耐药的特定的MIC值。

注：关于折点的最新解释，可参考应用本参考方法的机构的最新出版物。

2．5．1

S

敏感susceptible

受试菌株的生长可被某浓度抗菌剂抑制预示着该抗茵剂的I临床推荐剂量能够获得理想的疗效。

注1：菌株是在规定的表型测试系统中基于合理的折点被判定为敏感的。

注2：折点应根据测试环境的改变(诸如药物常规剂量的改变、新的耐药机制的出现等)做相应调整。

2．5．2

I

中介intermediate

受试菌株的生长可被某浓度抗菌剂抑制，但无法确定该抗菌剂临床推荐剂量的准确疗效。

注1：菌株是在规定的表型测试系统中基于合理的折点被判定为中介的。

注2：“中介”意味着由受试菌株导致的感染可通过该抗菌剂在患处的生理富集或使用更高剂量的该抗菌剂来获得

妥善的治疗。

注3：该级别还提供了一个“缓冲区”，从而避免了小的、不可控的技术因素所导致的重大的结果解释偏差。

注4：折点应根据测试环境的改变(诸如药物常规剂量的改变、新的耐药机制的出现等)做相应调整。

2．5．3

耐药resistanceR

受试菌株的生长可被某浓度抗菌剂抑制预示着该抗菌剂的临床推荐剂量不能获得理想的疗效。

注1：菌株是在规定的表型测试系统中基于合理的折点被判定为耐药的。

注2：折点应根据测试环境的改变(诸如药物常规剂量的改变、新的耐药机制的出现等)做相应调整。

2．6

野生型wild

type

对某抗菌剂没有获得性耐药机制的菌株。

2．7

strains

参考菌株reference

有特定分类编号的，且抗菌剂敏感性表型和(或)基因型确定及稳定的菌株。

注：参考菌株是从菌种保藏机构获得并作为质量控制，其通常以储存培养物的形式进行保存，试验所用工作培养物

均来源于此。

2．8

methods

敏感性试验方法susceptibilitytesting

2．8．1

dilution

肉汤稀释法broth

是一种确定某微生物对某抗菌剂的MIC值的方法，即：向一系列含有某抗菌剂(通常倍比稀释)的

适当体积的溶液中接种已知适当量的某微生物的接种菌液。

注：该方法的目的是确定MIC值。

2．8．2

微量稀释法microdilution

在微量稀释盘中进行的肉汤稀释试验，每孔最终工作液体积不超过200pL。

2

YY／T0688．1—2008

2．9

液体培养基broth

用于细菌体外培养的液体培养基。

2．10

接种量inoculum

依据接种后终体积计算出的细菌在最终菌药混合物中的数量。

注；接种量通常以每毫升的菌落形成单位(CFU／mL)来表示。

2．11

effect

接种量效应inoculum

由接种量的改变所导致的MIC值的变化。

3试验程序

3．1概述

本试验是在微量稀释盘中进行的。该方法首先是抗菌剂工作液的配制，然后或者每孔加抗菌剂工

作液50pL(同时再加入50pL接种物)，或者每孔工作液为100pL(接种物的接种量最多不超过5pL)。

3．2培养基

应使用Mueller-Hinton肉汤(详见附录A)。

3．3抗菌剂

3．3．1概述

受试抗菌剂可直接从制造商或通过可靠的商业来源获得，但不能以J临床使用的药物制剂作为受试

物。所有抗茵剂均应有批号、效价、失效日期及推荐的保存条件细节，如果制造商没有推荐其他的保存

条件，一般受试物均在4℃～8℃条件下，保存于密闭、干燥、避光的容器中。抗菌剂的每个包装单位在

整个试验过程中均应有干燥剂。

注：为避免受试物凝结成块，在打开装有受试物的容器之前，应将其恢复至室温。

3．3．2原液的配制

抗菌剂必须用校准过的分析天平称量。配制抗菌剂标准溶液时，可根据受试物的效价，通过下列公

式计算出受试物的质量和稀释溶剂的体积。

V×p

m×P

(2)

式中：

P原液的浓度，单位为毫克每升(mg／L)；

m——抗菌剂(干粉)的质量，单位为克(g)；

P——抗菌剂(干粉)的效价，单位为毫克每克(mg／g)；

v——稀释剂的体积，单位为升(L)。

000

虽然某些抗菌剂的溶解度有限，但抗菌剂母液的浓度至少应为1mg／L。原液的实际配制浓度

取决于工作液(系列稀释浓度梯度)的配制方法。除非生产商有特殊的配制稀释要求，所有抗菌剂都应

该用无菌蒸馏水溶解并稀释。某些抗菌剂需要用特殊的溶剂来溶解(详见表1)。通常配好的抗菌剂工

作液没必要进行消毒。如果必要，抗菌剂工作液可采用膜过滤除菌，但除茵前后的工作液应进行组分分

析比较以确保抗菌剂样品在除菌过程中未发生吸附损失。

如果抗菌剂溶液没有在指定储存条件下的稳定性信息，所有抗菌剂溶液都应该现用现配。

3

YY／T0688．1—2008

表1某些抗菌剂原液的制备所需的溶剂和稀释剂

抗菌剂溶剂稀释剂

阿米卡星

蒸馏水

(amikacin)

阿莫西林

0．1o)0．1o)

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH--6mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6

(amoxieillin)

氨苄西林

0．10．1mol／L的磷酸盐缓冲液(pH--6．0)

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一8．O)

(ampicillin)

阿奇霉素

95％乙醇或冰醋酸1水

(azithromycin)

阿洛西林

蒸馏水

(azlociIlin)

氨曲南

饱和NaHCO。溶液蒸馏水

(aztreonam)

羧苄青霉素

蒸馏水

(carbeniciijin)

头孢克洛

蒸馏永

(cefaclor)

头孢盂多

蒸馏水

(cefamando|e)

头孢唑啉

0．1mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6o)01mol／I。的磷酸盐缓冲液(pH一6．o)

(cefazolin)

头孢地尼

0．1mol／I，的磷酸盐缓冲液(pH一6．o)蒸馏水

(cefdinir)

头孢托仑

0．1蒸馏水

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6．o)

(cefditoren)

头孢吡肟

010．1o)

o)mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6

mo[／I，的磷酸盐缓冲液(pH一6

(cefepime)

头孢他美

0．1蒸馏水

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6．o)

(cefetamet)

头孢克肟

0．I0．1

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一7．o)mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一7．o)

(cefixime)

头孢美唑

蒸馏水

(cefmetazole)

头孢尼西

蒸馏水

(cefonicid)

头孢哌酮

蒸馏水

(cefoperazone)

头孢噻肟

蒸馏水

(cefotaxime)

头孢替坦

二甲基亚砜蒸馏水

(cefotetan)

头孢西丁

蒸馏水

(eefoxitin)

头孢泊肟

质量百分比浓度为0．1％的NaHCO。溶液蒸馏水

(cefpodoxime)

头孢丙烯

蒸馏水

(cefprozil)

4

YY／T0688．卜一2008

表1(续)

抗菌剂溶剂稀释剂

头孢他啶

饱和NaHCO。溶液蒸馏水

(ceftazidime)

头孢布烯

1／lO(体积分数)的二甲基亚砜水溶液蒸馏水

(ceftibuten)

头孢唑肟

蒸馏水

(ceftizoxime)

ceftobiprole二甲基亚砜+冰醋酸5蒸馏水，用涡旋振荡器剧烈振荡混匀

头孢曲松

蒸馏水

(ceftriaxone)

头孢呋辛

0．10．1

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6．0)moI／L的磷酸盐缓冲液(pH一6．o)

(cefuroxime)

头孢噻吩

0．t蒸馏水

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6．o)

(cephalothin)

氯霉素

95％(体积分数)乙醇蒸馏水

(chloramphenic01)

先加人原液总体积的一半的蒸馏水，再缓缓

mol／L

西诺沙星加入最小体积量的1NaOH溶液直蒸馏水

(cinoxaein)

至样品溶解，最后用蒸馏水将原液总体积

补齐

环丙沙星

蒸馏水

(ciDrofloxacin)

克拉霉素

甲醇或冰醋酸60．1mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6．5)

(clarithromycin)

克拉维酸

010．1o)

moi／L的磷酸盐缓冲液(pH=6．o)mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一6

fdavulanic

acid)

克林沙星

蒸馏水

(clinanoxacln)

克林霉素

蒸馏水

(cltndamycin)

粘杆菌素‘

蒸馏水蒸馏水

(colistin)

daJbavancin

二甲基亚砜蒸馏水和二甲基亚砜。

达托霉素

蒸馏水蒸馏水

(daptomyein)

地红霉素

冰醋酸8蒸馏水

(dirithromycin)

多尼培南

0．85％(体积分数)的NaCI溶液0．85％(体积分数)的NaCI溶液

(doripenem)

强力霉素

蒸馏水

(doxycycline)

先加入原液总体积的一半的蒸馏水，再缓缓

依诺沙星加人最小体积量的0．1mol／LNaOH溶液

蒸馏水

(enoxacin)直至样品溶解，最后用蒸馏水将原液总体积

补齐

5

YY／T0688．1—2008

表1(续)

抗菌剂溶剂稀释剂

厄他培南

0．010．01rnol／L的磷酸盐缓冲液(pH一7．2)

rnol／L的磷酸盐缓冲液(pH一7．2)

(ertapenem)

红霉素

95％(体积分数)乙醇或冰醋酸5蒸馏水

(erythromycirt)

法罗培南

蒸馏水蒸馏水

({aropenem)

先加入原液总体积的一半的蒸馏水，再缓缓

氟罗沙星加人最小体积量的0．1mol／LNaOH溶液

蒸馏水

(fleroxacin)

直至样品溶解，最后用蒸馏水将原液总体积

补齐

夫西地酸

95％(体积分数)乙醇蒸馏水

(fusidicacid)

加雷沙星

蒸馏水(搅拌溶解)

(garenoxacin)

加替沙星

蒸馏水(搅拌溶解)

(gatifloxacin)

gemifloxaein蒸馏水

庆大霉素

蒸馏水

(gentamicin)

亚胺培南

0010．01

mol／I，的磷酸盐缓冲液(pH一7．2)mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一72)

(imipenem)

卡那霉素

蒸馏水

(kanamycin)

先加入原液总体积的～半的蒸馏水，再缓缓

左旋氧氟沙星加入最小体积量的1moi／LNaOH溶液直

蒸馏水

(1evofloxacin)至样品溶解，最后用燕馏水将原液总体积

补齐

利奈唑烷

蒸馏水

(1inezolid)

氯碳头孢／劳拉头孢

蒸馏水

(10racarbef)

美西林

蒸馏水

(mecillinam)

美洛培南

0．012)0．01

mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一7mol／L的磷酸盐缓冲液(pH一7．2)

(meropenem)

甲氧西林

蒸馏水

(methieillin)

美洛酉林