DB22/T 1676-2012 冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定 多重PCR法

ICS67.120.30

B50

备案号：35809-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1676—2012

冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定多重PCR法

Determinationoffood-bornebacterialpathogensfromfrozensquid——

MultiplePCR

2012-12-17发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1676—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4给出的规则起草。

本标准由珲春出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国珲春出入境检验检疫局综合实验室、吉林农业大学。

本标准主要起草人：聂丹丹、王宁宁、陶希三、杨文光、席家文、谭立新、李晶、张琦、宋立甫、

赵欣玥。

I

DB22/T1676—2012

冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定多重PCR法

1范围

本标准规定了冻鱿鱼中沙门氏菌Salmonella、单核细胞增生李斯特氏菌Listeriamonocytogenes、

副溶血性弧菌Vibrioparahemolyticus及霍乱弧菌Vibriocholerae的多重PCR方法。

本标准适用于冻鱿鱼中沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌及霍乱弧菌的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验

GB4789.7食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验

GB/T4789.20食品卫生微生物学检验水产食品检验

GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T1022进出口食品中霍乱弧菌检验方法

WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR：聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)

DNTP：脱氧核苷酸三磷酸（DeoxyribonucleosideTriphosphate）

DATP：脱氧腺苷三磷酸（DeoxyadenosineTriphosphate）

DCTP：脱氧胞苷三磷酸（DeoxycytidineTriphosphate）

DGTP：脱氧鸟苷三磷酸（DeoxyguanosineTriphosphate）

DTTP：脱氧胸苷三磷酸（DeoxythymidineTriphosphate）

SDS：十二烷基硫酸钠（SodiumDodecylSulfate）

Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)Aminomethane）

CTAB：十六烷基三乙基溴化铵（HexadecyltrimethylAmmoniumBromide）

TE：Tris-HCl与EDTA（pH8.0）混合缓冲液

Taq酶:TaqDNA聚合酶

4防污染措施

按照WS/T230-2002中6的规定执行。

1

DB22/T1676—2012

5试剂和材料

除另有规定外，所有化学试剂均采用分析纯。

5.1标准菌株

为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、

副溶血性弧菌、霍乱弧菌及其他致病菌的所有培养物和小心处置废物，并按GB19489中的有关规定执

行。

阳性菌株：沙门氏菌ATCC12011；单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19111；副溶血弧菌ATCC17802；

霍乱弧菌JL.08108。

阴性菌株：（对照采用任意一种非目标菌）李斯特菌ATCC19119；普通变形杆菌ATCC33420；金黄

色葡萄球菌ATCC12600；小肠耶尔森菌ATCC23715；大肠杆菌ATCC11229；克雷伯氏菌ATCC43086；粪

肠球菌ATCC14500；蜡样芽胞杆菌ATCC11176。

5.2试剂

5.2.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格。

5.2.2DNA提取液：主要成分是CTAB，Tris，EDTA。

5.2.3蛋白酶K。

5.2.4RNA酶。

5.2.5三氯甲烷（氯仿）CHCl3。

5.2.6异戊醇C5H12O。

5.2.7无水乙醇C2H5OH。

5.2.8TE缓冲液（见附录A.1）。

5.2.910×PCR缓冲液。

5.2.10TaqDNA聚合酶。

5.2.11