DB34/T 3855-2021 水果和蔬菜中六种链格孢霉毒素的测定液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

CCSX04

34

安徽省地方标准

DB34/T3855—2021

水果和蔬菜中六种链格孢霉毒素的测定

液相色谱-串联质谱法

DeterminationofsixAlternariatoxinsinfruitsandvegetables—LC-MS-MS

2021-01-25发布2021-02-25实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3855—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。

本文件由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风

险评估实验室（合肥）、池州市农产品质量安全监测中心、合肥市农产品质量检测检验中心、阜阳市农

产品质量安全监测中心、繁昌县农业技术推广中心、潜山市种植业服务中心。

本文件主要起草人：董旭、孙明娜、褚玥、童舟、许四五、吴延灿、范希芹、高宗仙、朱松涛、吴

彩萍、王梅、段劲生、高同春。

I

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水果和蔬菜中六种链格孢霉毒素的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了水果和蔬菜中交链格孢酚、交链孢酚单甲醚、交链孢霉烯、细格菌素、细交链格孢酮

酸、腾毒素六种链格孢霉毒素残留量的液相色谱-串联质谱法中的原理。

本文件适用于梨、葡萄、猕猴桃、苹果、柑桔、西红柿、黄瓜、普通白菜、辣椒等水果、蔬菜中交

链格孢酚、交链孢酚单甲醚、交链孢霉烯、细格菌素、细交链格孢酮酸、腾毒素六种链格孢霉毒素测定。

本文件方法六种链格孢霉毒素的定量限均为0.01mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性

与再现性的基本方法

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T789农药残留分析样本的采样方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样用含甲酸的乙腈和水混合溶液提取，经分散固相萃取氮气吹干，液相色谱-串联质谱测定，外

标法定量。

5试剂与材料

除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1乙腈（C2H3N）：色谱纯。

5.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.3甲酸（CH2O2）：色谱纯。

5.4无水硫酸镁（MgSO4）。

5.5氯化钠（NaCl）。

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5.6无水乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。

5.7微孔滤膜：PTFE聚四氟乙烯0.22μm。

5.8溶液配制

5.8.10.1％甲酸-乙腈溶液：取1mL甲酸（4.3）用乙腈（4.1）定容至1000mL。

5.8.25mmol乙酸铵-甲醇溶液：称取0.3854g无水乙酸铵（4.6），用甲醇（4.2）溶解并定容至1000

mL。

5.8.35mmol乙酸铵-水溶液：称取0.3854g无水乙酸铵（4.6），用水溶解并定容至1000mL。

5.9分散固相萃取净化包：每份样品称取3.0g无水硫酸镁（4.4）和1.0g氯化钠（4.5），混匀。

5.10六种链格孢霉毒素标准物质（见表1）。

表1链格孢霉毒素标准物质信息表

纯度

序号名称分子式CAS号

（％）

1细交链格孢酮酸C10H15NO3610-88-8≥98.0

2交链格孢酚C14H10O5641-38-3≥98.0

3交链孢酚单甲醚C15H12O526894-49-5≥98.0

4细格菌素C15H14O631186-12-6≥98.0

5交链孢霉烯C15H16O6889101-41-1≥98.0

6腾毒素C22H30N4O428540-82-1≥98.0

5.11标准溶液配制

5.11.1标准储备液：分别准确称取10.2mg的六种链格孢霉毒素，用乙腈（4.1）溶解并定容至10mL，

配成1000μg/mL的标准储备液，于0～4℃下避光保存，有效期3个月。

5.11.2混合标准储备液：分别吸取1mL六种链格孢霉毒素的标准储备液，用乙腈（4.1）定容至10mL

配成100μg/mL的混合标准储备液，于0～4℃下避光保存，有效期3个月。

5.11.3混合标准工作液：将六种链格孢霉毒素的混合标准储备液，用乙腈（4.1）稀释，配成0.005μg/mL、

0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL和1.0μg/mL的标准工作溶液，现配现用。

5.11.4基质混合标准工作液：吸取适量的六种链格孢霉毒素的混合标准储备液，用样品空白液稀释，

配成0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL和1.0μg/mL的基质混合标准

工作溶液，现配现用。

注：空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

6.2电子天平：感量0.01mg和0.01g。

6.3高速均质机,转速≥12000r/min。

6.4离心机，转速≥4000r/min。

6.5涡旋仪，转速≥2500r/min。

6.6氮吹仪。

7分析步骤

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7.1试样的制备与保存

按照NY/T789的规定抽取样品，取样部位按GB2763附录A的规定执行，经切碎，充分混匀后

高速匀浆，取500g样品，分成两份，放入洁净试样瓶中密封，贴上标签，于-20℃下保存，待测。

7.2提取及净化

称取试样2.5g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入10mL0.1％甲酸-乙腈（4.8.1），

2.5mL水，12000r/min均质2min，加入分散固相萃取净化包（4.8），3000r/min涡旋2min，

静置10min，4000r/min离心10min，移取上清液4mL至10mL离心管中，氮吹近干，加入1mL

乙腈（4.1）-5mmol乙酸铵水溶液（4.8.3）溶解残渣（20：80，v/v），过0.22μm微孔滤膜（4.7），

待测。

7.3色谱-质谱条件及测定

7.3.1液相色谱条件

7.3.1.1色谱柱：C18，50mm×2.0mm1.6μm；

7.3.1.2柱箱温度：40℃；

7.3.1.3流动相：A相5mmol乙酸铵-水溶液（4.8.3），B相5mmol乙酸铵-甲醇溶液（4.8.2）；

7.3.1.4流速：0.3mL/min；

7.3.1.5进样体积：10μL；

7.3.1.6流动相梯度洗脱程序见表2。

表2梯度洗脱程序

流动相比例

梯度时间

/（％）

/min

流动相A流动相B

0.09010

0.57030

4.01090

5.51090

6.79010

8.09010

7.3.2质谱条件

7.3.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI），

7.3.2.2离子源温度：450℃，

7.3.2.3离子源接口电压：4.5KV；

7.3.2.4扫描方式：正/负离子模式；

7.3.2.5检测方式：多反应监测（MRM）；

7.3.2.6雾化气3L/min、干燥气15L/min均为高纯氮，碰撞气氩气230KPa；

7.3.2.7脱溶剂管温度：250℃；

7.3.2.8参考条件和定性离子对、定量离子对见表3。

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表3MRM检测参数