GB/T 24800.6-2009 化妆品中二十一种磺胺的测定高效液相色谱法

ICS71.100.70

中华人民共和国国家标准

GB/T24800.6—2009

化妆品中二十一种磺胺的测定

高效液相色谱法

Determinationof21sulfonamidesincosmeticsby

highperformanceliquidchromatographymethod

2009-11-30发2010-05-01实施

发

GB/T24800.6—2009

刖

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由中国轻工业联合会提出。

本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。

本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所。

本标准主要起草人：马强、张庆、王超、肖海清、武婷、康薇、崔俭杰。

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GB/T24800.6—2009

引言

本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分

添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品吋，则化妆品成品应符合《化妆品

卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。

目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。

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GB/T24800.6—2009

化妆品中二十一种磺胺的测定

高效液相色谱法

1范围

本标准规定了化妆品中二十一种磺胺的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于化妆品中二十一种磺胺的测定。

本标准的检出限和定量限:磺胺弧、磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲异喘睫、磺胺囉礎、磺胺11醴、磺胺毗

喘、磺胺甲基喀噪、磺胺二甲噁U坐、磺胺二甲囉喘、磺胺间二甲氧囉睫、磺胺座噁咻、磺胺硝苯的检出限为

0.2mg/kg,定量限为0.6mg/kg；磺胺甲廛二醴、磺胺甲氧哒嗪、琥珀酰磺胺噬醴、磺胺氯哒嗪、磺胺甲

基异噁哩、磺胺间甲氧吨喘、磺胺邻二甲氧囉喘、磺胺二甲异噁睦的检出限为0.4mg/kg,定量限为

1.2mg/kgo

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样经溶剂提取，离心过滤后，用高效液相色谱测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认。

4试剂和材料

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2四氢咲喃：色谱纯。

4.3氢氧化钠溶液（0.1mol/L）:准确称取4g氢氧化钠于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混

匀后备用。

4.4甲酸溶液（0.1%）：准确量取1niL甲酸于1L容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后备用。

4.5甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀后备用。

4.6磺胺弧、磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲异喘睫、磺胺喘睫、磺胺11醴、磺胺毗喘、磺胺甲基囉曉、磺胺二

甲噁哩、磺胺二甲囉喘、磺胺甲廛二卩坐、磺胺甲氧哒嗪、琥珀酰磺胺噬醴、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁卩坐、

磺胺间甲氧咳喘、磺胺邻二甲氧囉睫、磺胺二甲异噁哩、磺胺间二甲氧喘睫、磺胺嗟噁咻、磺胺硝苯标准

品：纯度大于97%。

4.7二十一种磺胺的标准储备液：准确称取每种磺胺标准物质（4.6）各100mg,分别置于100mL棕色

容量瓶中，用甲醇水溶液（4.5）溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度分别为1000Mg/mL的标准储备

液，于4C避光保存，可使用三个月。

注：磺胺座噁咻标准储备液配制时，可加入数滴氢氧化钠溶液（九3）辅助溶解。

4.8二十一种磺胺的混合标准储备液:分别准确移取二十一种磺胺标准储备液各4mL于100mL棕

色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.5）定容至刻度,该溶液中二十一种磺胺的浓度均为40Mg/mLo

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GB/T24800.6—2009

5仪器和设备

5.1高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

5.3分析天平：感量为0.0001g和0.001go

5.4离心机:转速不低于5000r/min。

5.5超声波水浴。

5.6具塞比色管：10mL0

5.7具塞塑料离心管：10mLo

5.8微孔滤膜：0.45“m,有机相。

6分析步骤

6.1样品处理

6.1.1膏霜、乳液、水剂、散粉、香波类样品

称取1g（精确至0.001g）试样于10H1L具塞比色管中，加入5mL甲醇，再加水至10mL,超声提

取20min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管中，以不低于5000r/min离心15min,上清液经

0.45“m微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。

注：如离心难以获得上清液可加适量氯化钠破乳。

6.1.2唇膏类样品

称取1g（精确至0.001g）试样于10mL具塞比色管中，加入2mL四氢咲喃，超声提取10min,再

加水至10mL,超声提取10min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管中，以不低于5000r/min

离心15min,上清液经0.45微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。

6.2测定条件

高效液相色谱测定条件如下：

a）色谱柱:SymmetryC18,5ym,250mmX4.6mm（内径）。

b）流动相：见表1。

c）流速：1.0mL/mino

d）柱温：32C。

e）波长：268nmo

f）进样量:20jjlLo

注：方法中所使用的色谱柱仅供参考，同等性能的色谱柱均可使用。

表1流动相

步骤时间/min甲酸溶液（0.1%）/%甲醇/%

00.00928

17.008416

213.007822

3007525

427.007525

529.004555

640.00595

742.00928

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6.3标准曲线的绘制

用甲醇水溶液（4.5）将二十一种磺胺混合标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.1Mg/mL、

0.5yg/mL、1/ag/mL、5,ug/mL、10”g/mL、2O卩g/mL的混合标准工作液，按6.2的测定条件浓度由

低到高进样测定，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。

二十一种磺胺标准品色谱图参见附录A中的图A.10

6.4测定

按6.2的测定条件对待测样液进行测定,用外标法定量。待测样液中磺胺的响应值应在标准曲线

的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。必要时，阳性样品需用液相色谱-质谱进行确认

试验（参见附录B）。

6.5空白试验

除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

7结果计算

结果按式（1）计算，计算结果保留两位小数（计算结果应扣除空白值）：

m

式中：

——试样中被测磺胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

c,——从标准工作曲线上查出的样液中被测磺胺的浓度，单位为微克每毫升（pg/mL）；

V——样液最终定容体积，单位为升（L）;

m试样的质量，单位为克（g）o

8检出限和定量限

本标准的检出限和定量限:磺胺弧、磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲异咳曉、磺胺吨喘、磺胺廛醴、磺胺毗

曉、磧胺甲基囉曉、磺胺二甲噁睦、磺胺二甲喀喘、磺胺间二甲氧嗨喘、磺胺座噁咻、磺胺硝苯的检出限为

0.2mg/kg,定量限为0.6mg/kg；磺胺甲噬二哩、磺胺甲氧哒嗪、琥珀酰磺胺廛哩、磺胺氯哒嗪、磺胺甲

基异噁醴、磺胺间甲氧咳曉、磺胺邻二甲氧喘喘、磺胺二甲异嘿瞠的检出限为0.4mg/kg,定量限为

1.2mg/kgo

9回收率

在添加浓度0.2mg/kg~40mg/kg浓度范围内，回收率在85%〜110%之间，相对标准偏差小

于10%0

10允许差

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。

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附录A

（资料性附录）

标准品色谱图

1——磺胺弧；

2——磺胺；

3——磺胺醋酰；

4——磺胺二甲异喘呢；

5——磺胺喀陀；

5——磺胺嗟醴；

7——磺胺毗咗；

8——磺胺甲基喀喘；

9——磺胺二甲噁哩；

10——磺胺二甲喀喘；

11——磺胺甲嗟二醴；

12——磺胺甲氧哒嗪；

13——琥珀酰磺胺庭吐；

11磺胺氯哒嗪；

15——磺胺甲基异噁吐；

16——磺胺间甲氧咳呢；

17——磺胺邻二甲氧唏呢；

18——磺胺二甲异噁吐；

19——磺胺间二甲氧唏呢；

20——磺胺摩噁咻；

21磺胺硝苯。

图A.1二十一种磺胺标准品色谱图

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附录B

（资料性附录）

确认试验

B.1液相色谱条件

a）色谱柱:SunFireCia,5/am,150mmX2.1mm（i.d.），或相当者。

b）流动相：见表B.1。

c）流速：O.2mL/mino

d）柱温：3OC。

e）进样量:20/丄。

表B.1流动相

步骤时间/min甲酸溶液（0.1%）/%甲醇/%

00.00926

15.008416

2&007822

314.007525

424.007525

526.004555

635.00595

736.00926

B.2质谱条件

a）电离方式：电喷雾电离，正离子。

b）毛细管电压：3.5kVo

c）萃取电压：1.0V。

d）射频透镜电压：0.0V。

e）离子源温度：120°CO

f）脱溶剂气：氮气，流速600L/hr,温度350C。

g）锥孔气：氮气，流速50L/hr。

h）碰撞气:氮气。

）曲描模式：多反应监测（MRM）,定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞气能量见表B.2。

表B.2磺胺的定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞气能量

定性离子对定量离子对锥孔电压/碰撞气能量/相对允许偏差/

中文名称英文名称

（m/z）（m/z）VeV丰度%

216/15715100

磺胺脈sulfaguanidine216/15722±20

216/1092352

173/1567100

磺胺sulfanilamide173/15615±20

173/911851

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