GB/T 24800.2-2009 化妆品中四十一种糖皮质激素的测定 液相色谱/串联质谱法和薄层层析法

ICS71.100.70

中华人民共和国国家标准

GB/T24800.2—2009

化妆品中四十一种糖皮质激素的测定

液相色谱/串联质谱法和薄层层析法

Determinationof41glucocorticoids

incosmeticsbyLC-MS-MSandTLCmethod

2009-11-30发布2010-05-01实施

发布

GB/T24800.2—2009

刖

本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。

本标准由中国轻工业联合会提出。

本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。

本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所、大连标准检测技术研究中心、国家日化产品质量监

督检验中心。

本标准主要起草人:潘炜、李鹏、毛希琴、王春燕、郑顺利、关成、于利军、董广彬。

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GB/T24800.2—2009

引言

本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质，不得作为化妆品生产原料即组分

添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品吋，则化妆品成品应符合《化妆品

卫生规范》对化妆品的一般要求，即在正常及合理的、可预见的使用条件下，不得对人体健康产生危害。

目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定，仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。

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GB/T24800.2—2009

化妆品中四十一种糖皮质激素的测定

液相色谱/串联质谱法和薄层层析法

1范围

本标准规定了化妆品中41种糖皮质激素的液相色谱/串联质谱方法和薄层层析方法二种测定方法。

本标准液相色谱/串联质谱测定方法适用于化妆品中糖皮质激素的定量测定，其检出限为

0.03卩g/g,定量限为0.1Mg/go

本标准薄层层析方法适用于化妆品中糖皮质激素的定性筛选。点样量为10mg时，其检出限为

50“g/g；点样量为20mg吋，其检出限可达25“g/g。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分:总则与定义(GB/T6379.1

—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696；1987,MOD)

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

糖皮质激素glucocorticoids

糖皮质激素类药物属當体类化合物，外用糖皮质激素的基本化学结构为氢化可的松结构。即含

17个碳原子的环戊烷并多氢菲母核、C10和C13位上有甲基、C17位上有二碳侧链、C3位酮基和C4-C5

位双键。在此基础上，进行C1-C2位脱氢、C6-位甲基化、C9p位氟化、C11位轻基化等修饰后，构成一

类应用范围不同、效果强弱不同的糖皮质激素类药物。

4液相色谱-串联质谱法

4.1原理

膏霜类化妆品用饱和氯化钠溶液分散，精油类化妆品用正己烷分散，用乙睛从分散液中提取激素类

药物，用亚铁氤化钾和醋酸锌从提取液中沉淀大分子基质，经固相萃取小柱净化,用反相高效液相色谱/

串联质谱测定，外标法定量。

4.2试剂与标准物质

4.2.1甲醇：色谱纯。

4.2.2乙睛：色谱纯。

4.2.3乙酸：色谱纯。

4.2.4正己烷：分析纯。

1

GB/T24800.2—2009

4.2.5饱和氯化钠溶液。

4.2.610%亚铁氤化钾溶液:称量115gK4Fe(CN)6•3H2()固体，用水溶解定容至1L。

4.2.720%乙酸锌溶液:称量239gCHQiZn・2H2()固体，用水溶解定容至1L。

4.2.8OasisHLB固相萃取小柱"或相当者：60mg,3mLo

4.2.9样品过滤器：有机膜，孔径0.2(«mo

4.2.10标准物质：41种糖皮质激素标准物质的分子式、相对分子质量、CAS登录号列于表1,纯度不

小于99.0%。化学结构图参见附录A的图A.1。

表141种糖皮质激素药物中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量

序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量

1曲安西龙Triamcinolone124-94-7c21h27fo.394.1792

2泼尼松龙Prednisolone50-24-8C^iH28O3360.1937

3氢化可的松Hydrocortiscne50-23-7C21H300:3362.2093

4泼尼松Prednisone53-03-2C21H26O5358.1780

5可的松Cortisone53-06-5C21H28O5360.1937

6甲基泼尼松龙Methylprednisolone83-43-2C22H30O5374.2093

7倍他米松Betamethasone378-44-9C22H29FO5392.1999

8地塞米松Dexamethasone50-02-2c22hmfo.392.1999

9氟米松Flumethasone2135-17-3h28f2o541().1905

10倍氯米松Beclomethasone4419-39-0C22H29C1O540&1704

11曲安奈德Triamcinoloneacetonide76-25-5◎H;(1FO“434.2105

12氟氢缩松Fludroxycortide1524-88-5436.2261

13曲安西龙双醋酸酯Triamcinolonediacetate67-78-7C25H31FOg47&2003

14泼尼松龙醋酸酯Prednisolone21-acetate52-21-1G3H30C)6402.2042

15氟米龙Fluoromethalone426-13-1c22hmfo4376.2050

16氢化可的松醋酸酯Hydrocortisone21-acetate50-03-3C23H32C)6404.2200

17地夫可特Deflazacort14484-47-0C25H31NOg441.2151

18氟氢可的松醋酸酯Fludrocortisone21-acetate514-36-3C23H;(1FO“422.2105

19泼尼松醋酸酯Prednisone21-acetate125-10-0C23H28C)6400.1886

20可的松醋酸酯Cortisone21-acetate50-04-4C23H30Ofi402.2042

21甲基泼尼松龙醋酸酯Methylprednisolone21-acetate53-36-1C21H32Ofi416.2199

22倍他米松醋酸酯Betamethasone21-acetate987-24-6c2„H;(1FO“434.2105

23布地奈德Budesonide51372-29-3C25H34O430.2355

24氢化可的松丁酸酯Hydrocortisone17-butyrate13609-67-1C25业Ofi432.2512

25地塞米松醋酸酯Dexamethasone21-acetate1177-87-3c2„H;(1FO“434.2105

1)OasisHLB固相萃取小柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者。如果其

他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

2

GB/T24800.2—2009

表1（续）

序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量

26氟米龙醋酸酯Fluorometholone17-acetate3801-06-7c2„H;(1FO"41&2156

27氢化可的松戊酸酯Hydrocortisone17-valerate57524-89-7C26H38C)6446.2668

28曲安奈德醋酸酯Tririmcinoloneacetonideacetate3870-07-3C2fiH；f；(FO7476.2210

29氟轻松醋酸酯Fluocinonide356-12-7C26H32F2O7494.2116

30二氟拉松双醋酸酯Diflorasonediacetate33564-31-7C26H32F2O7494.2116

31倍他米松戊酸酯Betamethasone17-valerate2152-44-5c2?h;(7fo.476.2574

32泼尼卡酯Prednicarbate73771-04-7C27H36Os488.2410

33哈西奈德Halcinonide3093-35-4G，,H32CIFO3454.1922

34阿氯米松双丙酸酯Alclomethasonedipropionate66734-13-2C2gH„C107520.2228

35安西奈德Amcinonide51022-69-6G&H阴FO?502.2367

36氯倍他索丙酸酯Clobetasol17-propionate25122-46-7h;(2cifo5466.1922

37氟替卡松丙酸酯Fluticasonepropionate80474-14-2c25h;(1f3o5s500.1844

38莫米他松糠酸酯Mometasonefuroate83919-23-7C27H30CbOf>520.1419

39倍他米松双丙酸酯Betamethasonedipropionate5593-20-4C28H37FO?504.2523

40倍氯米松双丙酸酯Beclometasonedipropionate5534-09-8C2gH„C107520.2228

41氯倍他松丁酸酯Clobetasone17-butyrate25122-57-0qH;(2C1FO5478.1922

4.2.11标准贮备液（1mg/mL）:准确称取标准物质（4.2.10）各10.0mg,用甲醇分别溶解定容至

10.0mL,于一18C下冷冻保存。

4.2.12标准混合工作溶液:分别取（4.2.11）标准贮备液1.0mL混合，用甲醇定容于50mL,制成浓

度为20Mg/mL的标准混合储备溶液，于一18C下冷冻保存。临用时用40%乙睛水溶液稀释成

0.05卩g/mL、0.10/ag/mL、0.20卩g/mL、0.40ptg/mL、0.80yg/mL系列浓度的标准混合工作溶液，用

于制作标准曲线。

4.3仪器

4.3.1高效液相色谱-串联质谱检测器（ESI源）。

4.3.2分析天平：感量0.1mg；0.01mgo

4.3.3漩涡混合器。

4.3.4离心机：转速5000r/min,容量10mL；50mLo

4.4试样制备

4.4.1提取

4.4.1.1膏霜类化妆品

称取0.2g样品（精确至0.01g）于10mL具塞塑料离心管中，加入3mL饱和氯化钠溶液（4.2.5）,

于漩涡混合器上混合使样品分散，准确加入2mL乙月青，充分涡旋提取2min,5000r/min离心10min,

吸出上层清液于另一50mL具塞塑料离心管中，下层氯化钠溶液用2mL乙睛重复提取步骤一次，合并

二次乙睛提取液,往提取液中准确加入40mL高纯水，混匀，加入亚铁氧化钾溶液（4.2.6）0.2mL,混

匀，加入乙酸锌溶液（4.2.7）0.2mL,混匀，5000r/min离心10min,清液待进行固相萃取小柱净化。

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GB/T24800.2—2009

4.4.1.2精油类化妆品

称取0.5g样品（精确至0.01g）于20niL尖底具塞塑料离心管中，加入正己烷4mL,于漩涡混合

器上混合至样品分散，准确加入50%乙月青水溶液4mL,充分漩涡提取2min,5000r/min离心10min,

吸取下层提取液至一50mL具塞塑料离心管中，上层正己烷用4mL50%乙睛水溶液重复上述提取步

骤一次，合并二次50%乙月青提取液，往提取液中准确加入36mL高纯水，混合，加入亚铁氤化钾溶液

（4.2.6）0.1mL,混匀，加入乙酸锌溶液（4.2.7）0.1mL,混匀,5000r/min离心10min,清液待进行固

相萃取小柱净化。

4.4.1.3爽肤水类、洗面奶类、面膜类等化妆品

按4.4.1.1的方法处理。

4.4.2净化

OasisHLB固相萃取小柱（4.2.8）接上固相萃取装置,小柱上端紧密连接一20mL〜50mL垫有滤

纸的磨口漏斗，小柱预先依次用5mL甲醇.lOmL水进行活化。将待净化的样品清液（4.4.1）倒入漏

斗，经滤纸过滤后流经小柱，待样品溶液自然流尽后，用10%的乙睛水溶液10mL清洗小柱，待清洗液

自然流尽后，取下漏斗，用吸球吹出小柱中的残留液。在柱出口处接一10mL具塞玻璃离心管，用

4mL甲醇淋洗小柱，待甲醇自然流尽后，用吸球吹出小柱中残留液。取下离心管，准确加入4.0mL高

纯水，混合，经0.2Min样品滤器过滤后作为测定液。也可将接收的4mL甲醇用氮气吹干，根据需要的

浓度用50%的甲醇水溶液重新溶解定容后测定。

4.5测定

4.5.1液相色谱参考条件

以下为液相色谱参考条件：

）色谱柱：SBCi,50mmX2.1mm（内径）,1.8/am,或相当者；

b）柱温：室温；

c）液相色谱流动相及参考分离条件见表2；

d）进样体积：5/丄。

表2液相色谱流动相及参考分离条件

时间/min流速/(mL/min)流动相A（水，含0.1%乙酸）流动相B（乙睛，含0.1%乙酸）

00.36832

30.36832

120.32575

140.32575

14.10.36832

160.36832

4.5.2质谱参考条件

以下为质谱参考条件：

）电离方式：电喷雾电离，ESI（+）；

b）离子喷雾电压：4kV；

c）雾化气:氮气,38Psi；

d）干燥气：氮气，流速：12L/min,温度：350°C；

e）碰撞气:氮气。

f）检测方式：多反应监测（MRM）。

41种糖皮质激素药物的质谱测定参数见表3。

4

GB/T24800.2—2009

表341种糖皮质激素药物的质谱测定参数

序号药物名称出峰时间相对分子质量母离子（锥孔电压）子离子（碰撞能量）

1曲安西龙0.86394.1792395.2(140)225.1(14)357.1(8)

2泼尼松龙1.39360.1937361.2(110)146.9(20)343.1(6)

3氢化考的松1.38362.2093363.2(130)121.0(24)105.1(50)

4泼尼松1.47358.1780359.2(110)147.0(24)341.1(6)

5可的松1.53360.1937361.2(150)163.1(20)121.0(30)

6甲基泼尼松龙2.01374.2093375.2(110)357.1(6)161.1(20)

7倍他米松2.26392.1999393.2(130)355.0(4)146.8(24)

8地塞米松2.42392.1999393.2(130)355.0(4)146.8(24)

9氟米松2.36410.1905411.2(120)253.0(10)121.1(34)

10倍氯米松3.15408.1704409.2(110)391.1(6)146.9(30)

11曲安奈德3.81434.2105435.2(110)33&9(10)396.9(10)

12氟氢缩松3.55436.2261437.2(160)120.8(40)180.9(30)

13曲安西龙双醋酸酯4.60478.2003479.2(140)321.0(10)440.9(4)

14泼尼松龙醋酸酯4.79402.2042403.2(110)146.8(24)384.9(6)

15氟米龙4.35376.2050377.2(110)27&9(10)320.9(8)

16氢化可的松醋酸酯4.66404.2200405.2(150)309.1(12)120.8(34)

17地夫可特5.35441.2151442.2(180)123.9(50)141.9(36)

18氟氢可的松醋酸酯4.95422.2105423.2(160)23&9(22)120.9(36)

19泼尼松醋酸酯5.64400.1886401.2(120)295.0(8)146.8(24)

20可的松醋酸酯5.75402.2042403.2(160)162.8(24)343.0(16)

21甲基泼尼松龙醋酸6.42416.2199417.2(110)399.2(6)253.2(18)

22倍他米松醋酸酯6.50434.2105435.2(110)309.0(8)337.0(8)

23布地奈德7.88430.2355431.2(110)413.1(6)146.9(30)

24氢化可的松丁酸酯7.23432.2512433.2(140)120.8(24)345.0(8)

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