DB15/T 3259-2023 羊肝细胞体外培养技术规程

ICS65.020.30

CCSB44

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内蒙古自治区地方标准

DB15/T3259—2023

羊肝细胞体外培养技术规程

Thecodeofpracticeoncellsoflambhepaticinvitroculture

2023-12-15发布2024-01-15实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T3259—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧业科学院提出。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。

本文件主要起草人：孙海洲、桑丹、金鹿、刘秀梅、张春华、杨鼎、张崇志、李胜利、王博、萨初

拉、刘威、宝华、胡晓晓、李文婷、付乐。

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DB15/T3259—2023

羊肝细胞体外培养技术规程

1范围

本文件规定了羊肝细胞体外培养技术规程的程序确立、工作区条件和方法。

本文件适用于羊的肝细胞体外培养。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

肝细胞体外培养invitrocultureofhepaticcells

以羊肝脏组织为材料，经体外培养、分离出呈圆球形、分散状态细胞的过程。

4设施设备

工作区应包括准备室、缓冲间、无菌室及细胞保存室。

无菌室应配备超净工作台、紫外灯、酒精灯、二氧化碳培养箱等相关设备。

细胞保存室应配备冰箱、超低温冰箱和液氮罐等设备。

5方法

试剂与溶液配制

5.1.1如无特别说明，所用试剂均为分析纯。

5.1.2本标准所用水，一律应符合GB/T6682中三级水。

5.1.3磷酸氢二钠、氯化钠、盐酸、氯化钙、氯化钾、氢氧化钠、磷酸氢二钾、氢氧化钾、葡萄糖、

乙二胺四乙酸二钠、地塞米松、罗斯韦尔公园纪念研究所1640培养基（RPMI1640）、4-(2-羟乙基)-1-

哌嗪乙磺酸（HEPES）、磷酸盐缓冲溶液（PBS）、胎牛血清、胰岛素、青霉素、链霉素、Ⅳ型胶原酶及

0.4%台盼蓝溶液。

5.1.4肝素钠：将1g肝素钠溶解于20mL水中，用0.22µm滤膜过滤除菌，分装并保存于-20℃冰

箱中备用。

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DB15/T3259—2023

5.1.5Ⅳ型胶原酶：准确称取50mg的Ⅳ型胶原酶粉末溶解于1mL的基础培养液中，用0.22µm滤

膜过滤除菌，即可配制成50g/L的Ⅳ型胶原酶，配置完成后立即使用。

5.1.6双抗：准确称取1g链霉素和0.625g青霉素，充分溶解于200mL的水中，用0.22µm滤膜

过滤除菌，分装并保存于-20℃冰箱中备用。

5.1.7胰岛素母液：50mg胰岛素溶解于20mL浓度为0.01mmol/L的盐酸溶液中，配制成4.36mol/L

×10-4mol/L的胰岛素母液，用0.22µm滤膜过滤除菌，分装并保存于-80℃冰箱中备用。

5.1.8Percoll细胞分离液：取27mLPer