DB33/T 2024-2017 人体毛发中苯丙胺类兴奋剂、吗啡、6—单乙酰吗啡和氯胺酮的检测方法

ICS13.310

A92

DB33

浙江省地方标准

DB33/T2024—2017

人体毛发中苯丙胺类兴奋剂、吗啡、6－单

乙酰吗啡和氯胺酮的检测方法

DeterminationofAmphetamines,Morphine,6-MonoacetylmorphineandKetaminein

humanhair

2017-02-20发布2017-03-20实施

浙江省质量技术监督局发布

DB33/T2024—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由浙江省公安厅提出并归口。

本标准起草单位：浙江迪恩生物科技股份有限公司，浙江省公安厅禁毒总队，舟山市公安局刑事科

学技术研究所。

本标准主要起草人：高颖，林步算，郝云彬，缪敏红，梁力珲，周联盟，姜锋，汪衍明，周志刚，

帅大尧，刘伟。

1

DB33/T2024—2017

人体毛发中苯丙胺类兴奋剂、吗啡、6－单乙酰吗啡和氯胺酮

的检测方法

1范围

本标准规定了人体毛发中苯丙胺（AMP）、甲基苯丙胺（MAMP）、3,4-亚甲二氧基苯丙胺（MDA）、

3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺（MDMA）、吗啡（MOR）、6－单乙酰吗啡（MAM）和氯胺酮（KET）的

检测方法。

本标准适用于人体毛发中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙

胺、吗啡、6－单乙酰吗啡和氯胺酮的定性定量分析。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

分子马达MolecularMotor

ATP酶分子马达生物传感器。

第一法分子马达法

4原理

毛发中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺、吗啡、6－单乙

酰吗啡和氯胺酮和抗体以及预包被的分子马达通过单链连接，分子马达转动时负载越大转速越慢，加入

显色剂后，分子马达转速越快颜色越深，样本颜色与其所含毒品的含量呈负相关。

5试剂和材料

5.1除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682规定的二级水。

5.2吗啡类检测试剂盒、苯丙胺类检测试剂盒、氯胺酮检测试剂盒，包括分子马达检测板，苯丙胺、

甲基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺、吗啡、6－单乙酰吗啡和氯胺酮标准

2

DB33/T2024—2017

溶液，抗体，溶解液，清洗液，裂解液，缓冲液，显色剂，启动液，终止液。以上试剂均置于4℃冰箱

保存。

6仪器和设备

6.1分子马达分析仪：检测波长260nm～630nm。

6.2分析天平：感量0.1mg。

6.3恒温水浴锅。

6.4计时器。

6.5温度计。

6.6量筒：500mL。

6.7烧杯：1000mL。

6.8移液器：200μL，1mL，10mL。

7分析步骤

7.1毛发样品采集

贴根（紧贴头皮）剪取头顶后部（枕骨部位）的头发，所采头发平放于清洁纸袋或铝箔袋中，标记

发根位置，头发经纸和铝箔包裹和折叠后，置于纸袋中。记录个体信息、用药史、长度特征以及其他特

殊处理情况。

采样示意图见附录A。

7.2测定步骤

7.2.1样品提取

称取5.0mg剪碎至1mm的头发样品（7.1）置于洁净容器中，加入500μL裂解液（5.2）95℃水浴

（6.3）5min。水浴结束后加入500μL缓冲液（5.2），混匀，待测。

7.2.2样品测定

本步骤需在室温（22℃～25℃）下进行。

将除裂解液和缓冲液外所有试剂（5.2）从冷藏环境中取出，置于室温放置60min，注意每种液体

试剂使用前均须摇匀。

分别向分子马达检测板（5.2）中加标准品（5.2）或样本（7.2.1）、启动液（5.2）和抗体（5.2）各

50µL/孔，放置15min。

将板内液体甩干后加入洗涤液（5.2）250µL/孔，振荡后甩干微孔中液体，重复3次。立即向板中

加入显色液（5.2）100µL/孔，放置10min，加入终止液（5.2）100µL/孔，混匀，置于分子马达分析仪

（6.1）中测定，5min内检测完成。

8结果计算

标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值除以空白样品的吸光度值，再乘

3

DB33/T2024—2017

以100%，即公式（1）：

A

E100%……………….（1）

A0

式中：

E—百分吸光度值，%；

A—标准液或样品液吸光度值；

A0—0标准液吸光度值。

以百分比吸光度值为纵坐标，以标准液浓度数值为横坐标，建立标准曲线。从标准曲线上读取待测

液百分比吸光度值所对应的目标物浓度，再乘以其相应的稀释倍数，即为样品中毒品代谢物的浓度。

9结果判定

当毛发取样量为5mg时，吗啡类检测试剂盒检测结果小于10ng/mg，可判为阴性，大于10ng/mg时，

判为可疑，需用第二法或第三法确认；苯丙胺类检测试剂盒检测结果小于8ng/mg，可判为阴性，大于8

ng/mg时，判为可疑，需用第二法或第三法确认；氯胺酮检测试剂盒检测结果小于15ng/mg，可判为阴

性，大于15ng/mg时，判为可疑，需用第二法或第三法确认。

第二法气相色谱－质谱联用法

10原理

人体毛发中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺、吗啡、6-

单乙酰吗啡和氯胺酮经甲醇提取并衍生后，利用气相色谱-质谱联用仪测定，特征碎片离子定性，外标

法定量。

11试剂和材料

11.1原则

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

11.2试剂

11.2.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

11.2.2丙酮（CH3COCH3）：色谱纯。

11.2.3乙腈（CH3CN）：色谱纯。

11.2.4乙酸乙酯（CH3COOC2H5）：色谱纯。

11.2.5十二烷基磺酸钠（C12H25SO3Na）。

11.2.60.1g/100mL十二烷基磺酸钠水溶液：称取0.10g十二烷基磺酸钠（11.2.5）用水溶解并定容至

100mL容量瓶，摇匀后备用。

4

DB33/T2024—2017

11.2.7三氟乙酸酐（C4F6O3）。

11.2.8N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（C8H18F3NOSi2）。

11.3标准品

苯丙胺（CAS：300-62-9）、甲基苯丙胺（CAS：33817-09-3）、3,4-亚甲二氧基苯丙胺（CAS：4764-17-4）、

3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺（CAS：42542-10-9）、吗啡（CAS：57-27-2）、6－单乙酰吗啡（CAS：2784-73-8）

和氯胺酮（CAS：6740-88-1）标准品：纯度≥99%。

11.4标准溶液制备

11.4.1苯丙胺类兴奋剂标准储备溶液（1mg/mL）：分别精密称取苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲二

氧基苯丙胺和3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺标准品各0.01g（精确至0.01mg）于10mL常量瓶中，用甲

醇溶解并定容至刻度，置于-18℃冰箱保存。保存期为1年。

11.4.2吗啡和6－单乙酰吗啡标准储备液（1mg/mL）：分别精密称取吗啡和6－单乙酰吗啡标准品

各0.01g（精确至0.01mg）于10mL常量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于-18℃冰箱保存。保

存期为1年。

11.4.3氯胺酮标准储备液（1mg/mL）：精密称取氯胺酮标准品0.01g（精确至0.01mg）于10mL

常量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于-18ºC冰箱保存。保存期为1年。

11.4.4苯丙胺类兴奋剂混合标准工作液：分别吸取适量体积的苯丙胺类兴奋剂标准储备液（11.4.1），

用甲醇稀释，配成浓度分别为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的

系列标准工作溶液。置于4℃冰箱保存，保存期为1个月。

11.4.5吗啡和6－单乙酰吗啡混合标准工作液：分别吸取适量体积的吗啡和6－单乙酰吗啡标准储备

液（11.4.2），用甲醇稀释，配成浓度分别为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、

500ng/mL的系列标准工作溶液。置于4℃冰箱保存，保存期为1个月。

11.4.6氯胺酮标准工作液：分别吸取适量体积的氯胺酮标准储备液（11.4.3），用甲醇稀释，配成浓

度分别为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的系列标准工作溶液。

置于4℃冰箱保存，保存期为1个月。

12仪器和设备

12.1气相色谱-质谱联用仪，配有电子轰击源（EI）

12.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

12.3离心机：最大转速10000r/min。

12.4涡旋混合器。

12.5旋转蒸发仪。

12.6氮吹仪。

12.7移液器。

5

DB33/T2024—2017

12.8恒温水浴锅。

12.9超声波清洗机。

12.10具塞玻璃试管：10mL。

13分析步骤

13.1毛发样品采集

见7.1。

13.2毛发洗涤

取毛发（13.1）样品依次用0.1%十二烷基磺酸钠溶液（11.2.6）10mL、水（11.1）和丙酮（11.2.2）

10mL振荡洗涤一次，晾干后清洁无污染的剪刀剪成约1mm段，密封于洁净纸袋或铝箔袋中并标识，

将毛发样品置于避光阴凉处保存中。

13.3提取

取20.0mg（精确至0.1mg）毛发样品（13.2），置于10mL具塞玻璃试管（12.10）中。加入2.0mL

甲醇（11.2.1）60℃水浴超声3h，4000r/min离心5min，转移上清液至另一离心管中，重复上述提取步

骤一次，合并上清液，40℃氮气吹干。

按以上操作处理三份试样，一份用于检测苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基苯丙胺、3,4-亚甲

二氧基甲基苯丙胺，一份用于检测吗啡和6－单乙酰吗啡，一份用于检测氯胺酮。

13.4衍生

13.4.1苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基苯丙胺和3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺

离心管残渣（13.3）中加入250μL乙酸乙酯（11.2.4）和250μL三氟乙酸酐（11.2.7）置于60℃

保温30min，冷却置室温后40℃氮气吹干，加入500μL乙酸乙酯（11.2.4），取2μL进气相色谱-质

谱联用仪分析。

标准曲线衍生：取苯丙胺类兴奋剂混合标准工作液（11.4.4）各250μL，40℃氮气吹干后按照上述

同样步骤操作。

13.4.2吗啡和6－单乙酰吗啡

离心管残渣（13.3）中加入250μL乙腈和250μLN,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（11.2.8）

置于60℃保温30min，冷却置室温后40℃氮气吹干，加入500μL乙腈溶解，取2μL进气相色谱-质

谱联用仪分析。

标准曲线衍生：取吗啡和6－单乙酰吗啡混合标准工作液（11.4.5）各250μL，40℃氮气吹干后按

照上述同样步骤操作。

注：衍生过