DB50/T 1363-2023 水质 四环素类抗生素的测定 液相色谱—串联质谱法

ICS13.060.01

CCSZ10

DB50

重庆市地方标准

DB50/T1363—2023

水质四环素类抗生素的测定

液相色谱—串联质谱法

2023-02-20发布2023-04-20实施

重庆市市场监督管理局发布

DB50/T1363—2023

目  次

前  言.............................................................................................................................................................II

1范围.................................................................................................................................................................1

2规范性引用文件.............................................................................................................................................1

3术语和定义.....................................................................................................................................................1

4方法原理.........................................................................................................................................................1

5干扰与消除.....................................................................................................................................................1

6试剂和材料.....................................................................................................................................................1

7仪器和设备.....................................................................................................................................................2

8样品.................................................................................................................................................................2

9分析步骤.........................................................................................................................................................3

10结果计算与表示...........................................................................................................................................5

11精密度和正确度...........................................................................................................................................6

12质量保证和质量控制...................................................................................................................................7

13废弃物的处理...............................................................................................................................................7

附录A（规范性）方法的检出限和测定下限...........................................................................................8

附录B（资料性）方法的精密度和正确度...............................................................................................9

I

DB50/T1363—2023

前  言

本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由重庆市生态环境监测中心提出。

本文件由重庆市生态环境局归口并组织实施。

本文件主要起草单位：重庆市生态环境监测中心。

本文件主要起草人：张晓岭、郑璇、李新宇、张文斌、邹家素、李莉、李晓、张君、蹇川、刘敏、

汪小艳、邹素兰、郭志顺、孙静、熊强、刘海立、肖霏。

II

DB50/T1363—2023

水质四环素类抗生素的测定液相色谱—串联质谱法

1范围

本文件规定了液相色谱-串联质谱法对水中5种四环素类抗生素进行测定的方法。

本文件适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中四环素、土霉素、金霉素、甲烯土霉素、强

力霉素等5种四环素类抗生素的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

HJ91.1污水监测技术规范

HJ91.2地表水环境质量监测技术规范

HJ164地下水环境监测技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法原理

水中的四环素类抗生素经固相萃取柱富集，用液相色谱-串联质谱分离检测。根据保留时间和特征

离子峰定性，内标法定量。

5干扰与消除

金属离子与目标化合物能形成络合物，使固相萃取效率降低，可向水样中加入乙二胺四乙酸二钠抑

制络合物的形成。

6试剂和材料

警告：本方法所使用的有机溶剂对人体健康有害，试剂配制和样品前处理过程应在通风橱内进行，

操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服。

6.1除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的超纯水。

6.2氢氧化钠（NaOH）：分析纯。

6.3盐酸（HCl）：1mol/L，分析纯。

6.4甲醇（CH3OH）：农残级或等同规格。

1

DB50/T1363—2023

6.5甲酸（HCOOH）:色谱纯或等同规格。

6.6乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）：分析纯。

6.7甲酸溶液（0.1%）：取1ml甲酸（6.5）溶于1000ml实验用水中。

6.8甲酸/甲醇溶液：取95ml甲酸溶液(6.5))和5ml甲醇（6.4）混合，摇匀。

6.9标准贮备液：ρ=1.00g/L

可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%，用甲醇（6.4）溶解，

贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。

6.10混合标准中间液：ρ=100μg/ml

移取适量5种四环素类抗生素标准贮备液（6.9）按需要用甲醇（6.4）稀释，中间液于-10℃以下冷

冻、避光保存不超过1个月。

6.11混合标准使用液：ρ=1.00μg/ml（参考浓度）

将四环素类抗生素混合标准中间液（5.7）按需要用甲醇（5.1）稀释，-10℃以下冷冻、避光保存不

超过4天。。

6.12内标贮备液：ρ=1.00g/L

内标:四环素-D6（Tetracycline-D6）。可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质溶于甲醇（6.4）。

贮备液在-10℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。

6.13内标中间液ρ=100μg/ml

将内标贮备液（6.12）按需用甲醇（6.4）稀释，-10℃以下冷冻、避光保存不超过1个月。

6.14内标使用液：ρ=10.0μg/ml（参考浓度）

将内标中间液（6.13）按需要用甲醇（6.4）稀释，-10℃以下冷冻、避光保存不超过4天。

6.15固相萃取柱：

填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或同等柱效的萃取柱，规格为6ml/150mg。

6.16滤膜：0.22μ和0.45μm玻璃纤维聚膜或其他材质等效滤膜。

6.17氮气：纯度≥99.99%。

6.18氩气：纯度≥99.99%。

7仪器和设备

7.1液相色谱/串联质谱仪：配有电喷雾离子化源(ESI)。

7.2色谱柱：C18柱或等效反相高效液相色谱柱，参考规格为100mm×2.1mm1.9µm。

7.3浓缩装置：K-D浓缩器或氮吹浓缩仪等性能相当的设备。

7.4固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。

7.5一般实验室常用仪器。

8样品

8.1采集与保存

参照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相关规定采集样品于4000ml磨口棕色玻璃瓶中，水样应充满采样

瓶，不留液上空间。

样品采集后应尽快进行分析。如暂不能分析，应在0℃～4℃避光保存，2天内完成萃取，4天内完

成分析。

8.2样品制备

2

DB50/T1363—2023

将固相萃取柱（6.15）固定在固相萃取装置(7.4)上，分别用10ml甲醇(6.4)和10ml实验用水活化，

保证小柱柱头浸润。水样经0.45μm滤膜(6.16)过滤，取1000ml水样，加入1gNa2EDTA（6.6），用氢

氧化钠（6.2）和盐酸（6.3）调节pH值为至6.0，水样以低于10ml/min（约3滴/秒～4滴/秒）的流速通过

小柱，用10ml实验用水洗涤小柱，用氮气（6.17）吹干小柱，再用10ml甲醇(6.4)洗脱，收集洗脱液于

洁净试管中，洗脱液经浓缩装置（7.3）浓缩至干，加入内标使用液（6.14）5.00μl，用甲酸/甲醇溶液

（6.8）定容至1ml，经0.22μm滤膜（6.16）过滤，置于样品瓶中，待测。

当样品体积为1000ml，浓缩后定容体积为1.0ml，进样体积为10μl，5种四环素的检出限为2ng/L，

测定下限为8ng/L，详见附录A。

8.3空白样品的制备

以实验用水代替样品，按照样品制备（8.2）相同操作步骤，制备直接进样法空白样品。

9分析步骤

9.1仪器参考条件

9.1.1液相色谱分析条件

流动相A：甲酸溶液(6.7)，流动相B：甲醇（6.4），梯度洗脱程序见表1，流速：250.0μl/min；柱

温：35℃；进样量：10μl；具体参数见表1。

表1液相色谱流动相梯度洗脱程序

时间流动相A流动相B

min%%

0.00955

1.50955

2.003565

7.506535

8.00955

10.00955

9.1.2质谱分析条件

正离子模式：ESI

喷雾电压(sprayvoltage)：3000V

毛细管温度：350℃

鞘气(N2)流速：45L/min

辅助气(N2)流速：15L/min

碰撞气(Ar)压力：200mPa

选择反应监测(SRM)，具体参数见表2。

3

DB50/T1363—2023

表2目标化合物的选择反应监测条件

母离子子离子碰撞能量锥孔电压

序号化合物

m/zm/zeVV

451.1416.1a2179

1四环素-D6

451.1433.0579

445.1410.0a1782

2四环素

445.1428.01982

461.1426.0a1873

3土霉素

461.1443.1573

479.1461.8a2080

4金霉素

479.1444.11880

443.2201.0a3080

5甲烯土霉素

443.2426.11880

445.1410.0a1782

6强力霉素

445.1428.11982

注：a为定量子离子

9.1.3仪器调谐

按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱-串联质谱仪进行仪器质量数和灵敏度校正，

以确保仪器处于最佳测试状态。

在仪器使用过程中，如发现仪器质量数出现明显偏差或灵敏度大幅度下降时，应立即对仪器重新进

行质量数和灵敏度校正。

9.2校准

9.2.1标准曲线的绘制

取一定量四环素类混合标准使用液（6.11）于甲酸/甲醇溶液（6.8）中，制备至少5个浓度点的标准

系列，5种四环素类抗生素的质量浓度均分别为2.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、

100.0μg/L（此为参考浓度），于每毫升标准系列中加入5.00μl内标使用液（6.14），使内标的质量浓度

为50.0μg/L，贮存在棕色进样小瓶中，待测。

由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，以标准系列溶液中目标组分的浓度为横坐标，以其对

应的峰面积（或峰高）与内标物峰面积(或峰高)的比值和内标物浓度的乘积为纵坐标，建立校准曲线。

如式（1）:

yaxb..............................................................................(1)

式中：

x——目标组分浓度的数值，单位为微克每升（μg/L）；

y——目标组分和内标物的峰面积（或峰高）比值与内标物浓度乘积的数值；

a——校准曲线斜率的数值；

b——校准曲线截距的数值。

9.2.2标准参考谱图

4

DB50/T1363—2023

在本标准推荐的仪器参考条件下，目标化合物的提取离子流色谱图见图1。

RT:0.00-10.50

5.45NL:2.72E6

100

TICF:+cESISRMms2

80443.175

[200.995-200.997,

60426.112-426.114]MS

40