GB/T 33249-2016 纳米技术 活细胞内金纳米棒含量测定 消光光谱法

ICS71.040.50

G80

中华人民共和国国彖标准

GB/T33249—2016

纳米技术活细胞内金纳米棒含量测定

消光光谱法

Nanotechnology—Quantificationofgoldnanorodsinlivingcells—

Extinctionspectroscopy

2016-12-13发布2017-07-01实施

GB/T33249—2016

目次

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引言n

1范围1

2规范性引用文件1

3术语和定义1

4基本原理1

5仪器设备2

6制备2

7测量方法3

8细胞内金纳米棒的计算3

9不确定度来源4

10测量结果4

附录A（资料性附录）金纳米棒制备实例5

附录B（资料性附录）活细胞内金纳米棒定量测定实例6

附录C（资料性附录）不确定度评定示例8

附录D（资料性附录）用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）对消光光谱法进行验证9

附录E（资料性附录）消光光谱法测定活细胞内金纳米棒含量的测试报告格式10

参考文献11

GB/T33249—2016

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刖吕

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由中国科学院提出。

本标准由全国纳米技术标准化技术委员会(SAC/TC279)归口。

本标准起草单位：中国医学科学院基础医学研究所、国家纳米科学中心。

本标准主要起草人:许海燕、吴哓春、张卫奇、纪英露、温涛。

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GB/T33249—2016

引言

金纳米棒是由金原子构成的棒状纳米结构。由于具有独特的物理化学性质，金纳米棒应用于生物

医学检测、生物医学成像、肿瘤光热治疗和药物递送等方面。当金纳米棒应用于上述生物医学领域时，

细胞内金纳米棒的含量是一个十分关键的指标，可以定量地反映其进入细胞的效率，对于新型纳米载体

和造影剂的设计具有参考价值。

本方法基于金纳米棒的消光特性，应用消光光谱法快速测定金纳米棒在活细胞内的含量，同时还可

以获得金纳米棒在细胞内的聚集状态信息。

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GB/T33249—2016

纳米技术活细胞内金纳米棒含量测定

消光光谱法

1范围

本标准规定了采用紫外/可见/近红外消光光谱法测定活细胞内金纳米棒含量的方法。

本标准适用于定量测量活细胞内金纳米棒结构的含量，定量测量活细胞内其他棒状贵金属纳米结

构的含量亦可参照本标准执行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T24369.1—2009金纳米棒表征第1部分:紫外/可见/近红外吸收光谱方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

消光光谱extinctionspectrum

待测物质浓度和消光池厚度不变时，消光度（或消光度的任意函数）对应波长（或波长的任意函数）

的曲线。

注：修改GB/T9721—2006,定义3.2。

3.2

表面等离激元共振surfaceplasmonresonance；SP

当入射电磁波照射到金属表面上时，金属中的自由电子在电场的驱动下相对于正离子的晶格以一

定的频率发生相干振荡。

[GB/T24369.1—2009,定义3.2

3.3

金纳米棒goldnanorods（AuNRs）

由金元素构成的纳米尺度的棒状颗粒，其在一个维度上的尺度与其他两个维度之比均大于lo在

尺度较小的两个维度上的尺寸应介于1nm〜100nm之间。

4基本原理

金纳米棒表面等离激元共振具有两个特征消光带，根据紫外/可见/近红外吸收光谱方法（见

GB/T24369.1—2009）得到金纳米棒的消光光谱图，见图la）,其中横向等离激元共振峰（1）在480nm〜

600nm之间，其峰面积与金纳米棒的浓度正相关;纵向表面等离激元共振峰（2）位于近红外光谱区，其

峰位由金纳米棒的轴比、形状和外部介电环境决定。体外活细胞的磷酸盐缓冲液（PBS）悬液对峰1无

1

GB/T33249—2016

影响[图lb）ni|线a],计算时作为背景曲线扣除后，就获得了细胞内金纳米棒的消光光谱。PBS和聚集

状态基本上都不影响峰1。通过计算扣除背景后的横向表面等离激元共振峰面积得到细胞中的金纳米

棒含量。

MK/nn

a）金纳米棒水溶胶的消光光谱b）人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）摄取金纳米棒

前（曲线a）、后（曲线b）的消光光谱

说明：

实线曲线a;

虚线曲线b;

1——横向等离激元共振峰;

2——纵向等离激元共振峰。

图1金纳米棒的消光光谱

5仪器设备

具有测量消光光谱测量功能的酶标仪，波长扫描范围：400nm〜999nm0使用前对酶标仪进行

校准。

6制备

6.1金纳米棒的制备

金纳米棒的制备实例参见附录Ao

6.2PBS缓冲液

称取8gNaChO.2gKC1J.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,加超纯水定容至1000mL0所用试

剂均为分析纯。

6.3细胞悬液

与金纳米棒孵育后，贴壁细胞用常规胰酶消化，非贴壁细胞直接室温离心，弃上清液。收获的细胞

加入适量PBS缓冲液洗涤3遍，用于细胞计数和后续的测定。

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