DB6111/T 172-2021 猕猴桃病毒鉴定技术规程

ICS65.020

CCSB16

DB6111

杨凌农业高新技术产业示范区地方标准

DB6111/T172—2021

猕猴桃病毒鉴定技术规程

Technicalstandardforvirusidentificationinkiwifruitseedlings

2021-10-22发布2021-11-01实施

杨凌示范区市场监督管理局发布

DB6111/T172—2021

前  言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。

本文件由西北农林科技大学提出。

本文件由杨凌示范区农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：西北农林科技大学、陕西省农村科技开发中心。

本文件起草人：赵磊、徐明、刘佩、吴云锋、雷玉山。

本文件由西北农林科技大学和陕西省农村科技开发中心负责解释。

联系人：赵磊

联系方式：18792627895

联系地址：杨凌示范区邰城路3号

I

DB6111/T172—2021

猕猴桃病毒鉴定技术规程

1范围

本文件规定了猕猴桃病毒鉴定技术的术语和定义、检测对象、取样部位、抽样、鉴定方法和判定规

则。

本文件适用于杨凌示范区猕猴桃母本树、猕猴桃苗木的病毒鉴定。环境相似的猕猴桃产区可参照执

行。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猕猴桃母本树stockplantofkiwifruit

提供猕猴桃种条或建外植体所需要幼嫩枝条的猕猴桃母株。

3.2

猕猴桃苗木Kiwifruitseedling

经扦插、嫁接、组培等方式繁育的猕猴桃种苗。

3.3

逆转录-聚合酶链式反应Reversetranscription-polymerasechainreaction（RT-PCR）

提取猕猴桃检材的总RNA，以其中的mRNA为模板，利用逆转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为

模板进行聚合酶链式反应。

4检测对象

猕猴桃主要病毒：

a)猕猴桃病毒A（ActinidiavirusA,AcVA）；

b)猕猴桃病毒B（ActinidiavirusB，AcVB）；

c)猕猴桃病毒C（ActinidiavirusC，AcVC）；

d)猕猴桃褪绿环斑相关病毒（Actinidiachloroticringspot-associatedvirus,AcCRaV）；

1

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e)黄瓜花叶病毒（cucumbermosaicvirus,CMV）；

f)苹果茎沟病毒（applestemgroovingvirus,ASGV）；

g)马铃薯X病毒（potatovirusX,PVX）；

h)柑橘叶斑驳病毒（citrusleafblotchvirus，CLBV）；

i)猕猴桃病毒1（Actinidiavirus1，AcV-1）；

j)猕猴桃褪绿环斑病毒(Actinidiayellowingringspotvirus,AYRSpV）；

k)猕猴桃黄化病毒1（Actinidiayellowingvirus1,AcYV1）；

l)猕猴桃黄化病毒2（Actinidiayellowingvirus2,AcYV2）；

m)猕猴桃种传潜隐病毒（Actinidiaseed-bornelatentvirus,ASbLV)。

4.1抽样

4.1.1猴桃母本树

每株均需检测。

4.1.2出圃苗木

采用5点取样法随机抽取。1万株以内抽检100株（含1万株）；1万株～10万株（含10万株），首个1

万株抽100株，之后每增加1万株增检50株，不足1万株按1万株计；超过10万株，第1万～10万株按上述

方法抽样，之后每增加1万株增检20株，不足1万株按1万株计。

5取样部位

生长季节取幼嫩叶片放置于自封袋内，4℃保存不超过24h或放置于-80℃长期保存备用；休眠季

节剪下枝条，撕开表皮用小刀刮取1g左右韧皮部组织，立即使用或放置于-80℃保存备用。

6鉴定方法

6.1双抗体夹心酶联免疫法（DAS-ELISA法）

详见附录A。

6.2逆转录-聚合酶链式反应法（RT-PCR法）

详见附录B。

7判定规则

酶联免疫检测或RT-PCR检测呈阳性反应的判定为携带病毒。脱毒母本树带毒率为0、出圃苗木带毒

率≤3.0%判定为合格苗木。

2

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AA

附录A

（规范性附录）

双抗体夹心酶联免疫检测法（DAS-ELISA法）

A.1溶液配制

A.1.1所用化学试剂均为分析纯级规格，用水为蒸馏水。

A.1.2抽提缓冲液

抽提缓冲液的配制见表A.1。

表A.1抽提缓冲液的配制

质量

药品名称

g

三羟甲基氨基甲烷(Tris)60.50

氯化钠（NaCl）8.00

聚乙烯吡咯烷酮（PVP）,MW4000020.00

聚乙二醇（PEG）