NY/T 539-2002 副结核病诊断技术

ICs11.220

B41

NY

中华人民共和国农业行业标准

NY/T539-2002

副结核病诊断技术

Diagnostictechniquesforparatuberculosis

2002一08一27发布2002门2一01实施

中华人民共和国农业部发布

Nv/T539-2002

前言

副结核病(paratuberculosis,lohne'sdisease)是由副结核分枝杆菌(mycobacteriaparatuberculosis)

引起的以反当动物为主的一种慢性、消耗性传染病，其临床症状以持续性腹泻和慢性消瘦为特征。该病

广泛地分布于世界各国，引起较大的经济损失。世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimal

Health(英),OfficeIntentionaldesEpizootic(法),OIE〕将其划为B类传染病，我国也将其划为II类传

染病。

副结核病潜伏期长，有的终生感染而不表现出临床症状。至目前为止，尚无治疗该病的有效方法，防

治该病的主要方法是监测、隔离和淘汰病畜。目前该病的检疫方法有细菌学检查和免疫学检查。后者主

要是包括皮内变态反应、琼脂扩散试验、间接红细胞凝集试验、淋巴细胞转化试验、补体结合反应和酶联

免疫吸附试验(ELISA)。本标准提出的补体结合反应、皮内变态反应和ELISA方法与OIE推荐的可选

择方法基本一致。

本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。

本标准由农业部畜牧兽医局提出。

本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位:吉林农业大学、吉林省兽医研究所。

本标准起草人:何昭阳、吴玉环、顾万钧、钱爱东。

NY/T539-2002

副结核病诊断技术

1范围

本标准规定了副结核病的诊断技术。

本标准的细菌学检查、皮内变态反应、补体结合反应适用于牛、羊、鹿等动物的副结核病诊断;

ELISA检疫方法适用于牛的副结核病诊断。

2细菌学检查

2.，材料准备

。.5%氢氧化钠液、水浴糟、离心机等。

抗酸染色法试剂:配制及染色方法见附录A,

2.2操作方法

取待检粪样(尽可能取带有粘液或血丝的粪便)15g-20g，加约3倍量的0.500氢氧化钠液，混匀，

55'C水浴乳化30min,以4层沙布过滤，取滤液1000r/min离心5min，去沉渣后，再以3000r/min

4000r/min离心30min，去上清，用沉淀涂片。也可以直肠刮取物、病变肠段粘膜直接涂片。火焰固定，

抗酸染色(见附录A)后镜检。

2.3结果判定

发现在细胞内有被染成红色、成丛排列的短杆菌即为细菌检查阳性(+)，否则判为细菌检查阴性

(一)。

3皮内变态反应试验

3.1材料准备

3.1.1器材

游标卡尺、灭菌的1mL注射器及针头、了5%酒精棉、记录本等。

3.1.2变应原

副结核分枝杆菌提纯蛋白衍生物(副结核PPD)或禽分枝杆菌提纯蛋白衍生物(禽结核PPD),

3.2操作方法

3.2.1将被检动物编号，在颈侧中三分之一处中部的健康皮肤处剪毛，直径约10cm，将注射部位的皮

肤用手捏起，以卡尺测量皮肤皱褶厚度并记录。局部消毒。

3.2.2将变应原以灭菌生理盐水稀释至。5mg/mL，与皮肤呈150^-200的角度进行皮内注射。注射后

注射部位应呈现绿豆至黄豆大小的小包。无论动物种类及大小一律皮内注射0.1mL。如注至皮下或溢

出，应于离原注射点8cm以远处补注一针，并在记录中加以说明。

3.2.3羊在尾根无毛的皱褶部进行皮内注射。

3.3结果判定

注射72h观察反应，检查注射部位有无热、肿、痛等炎性反应，并以卡尺测量注射部位的皮肤皱褶

厚度。

3.3.1判定标准如下:

a)变态反应阳性(十):局部有炎性反应，皮厚差)4mm.

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b)变态反应疑似士局部炎性反应不明显，皮厚差2.1mm-3.9mm

c)变态反应阴性(一)局部无反应或炎性反应不明显，皮厚差《2.0mm,

3.3.2羊有反应者(不论皮厚差大小和炎性反应轻重)判为变态反应阳性(+)，无任何反应者判为变态

反应阴性(一)

3.3.3变态反应疑似，应于3个月后复检，于注射部位对侧的相应部位进行皮内注射，72h后仍判为

变态反应疑似，则判为变态反应阳性。

4补体结合反应试验

4.1材料准备

4.1.1器材

12mmX37mm小试管、试管架、刻度吸管等。

4.1.2试剂

3%绵羊红细胞悬液:采集绵羊红细胞放于阿氏液中，4'C保存。使用时，以生理盐水洗涤3次，最后

一次要求2500r/min离心15min，弃上清得红细胞泥，以生理盐水配制成体积分数为3写的绵羊红细

胞悬液。

溶血素、补体、禽分枝杆菌提取的脂多糖抗原、标准阳性血清、标准阴性血清等。

4.2操作方法

4.2.1预备试验

4.2.1.1溶血素效价测定

取溶血素。.2mL(商品溶血素加有等量的甘油)，加人9.8mL生理盐水，即为1，100稀释，再按

表1进行稀释和表2进行溶血素效价测定。

表，溶血素稀释表单位为毫升

试管号123456789

稀释倍数1:10001:20001:30001-40001:50001，60001:70001.80001.9000

生理盐水912345678

1""100溶血素1

1:1000溶血素11111111

表2溶率紊效价测定表单位为毫升

123456789101112

试管号

试脸组对照组

稀释倍数1:10001:20001}30001:40001'"50001+60001:70001:80001:90001:1000

已稀释的榕血家0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1

1:40补体0.20.20.20.20.20.20.20.2