GB/T 31806-2015 马铃薯V病毒检疫鉴定方法

JCS65.020.01

n16GB

中华人民共和国国家标准

GB/T31806-2015

马铃薯V病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofPotatovirusV

2015-07”03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局

发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T31806-2015

目。吕

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由全罔植物柿疫标准化技术委员会CSAC/TC271）提Lil并归口。

水标准I&iii：单位：中间检验检疫科学研究院、中华人民共和同云南山人挠检验检疫局．

小；标准主要起草人：很村t芬、东受、马沽、岱i宫、怅7j(江、孔君、销梅lj.:.•

GB/T31806-2015

马铃薯V病毒检疫鉴定方法

1范围

本标附规定了植物检疫小马铃带.y病毒的检疫鉴定方法。

本标准适阳于马铃薯块茎、组培苗等；繁殖材料小马铃薯V病毒的柿疫鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于水；文件的121用是必不可少的．凡是注川剧的号｜用文件．仅注1:1期的版本适用于本文

件。凡是不注门期的11ffl文竹..:t主力支新版本（包括所行的修改单〉适用于本文件。

SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样

3仪器设备及试荆

3.1仪器设备

酣标仪、天平（感量1/10000g）、pJI计、微茧榨？｜机、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、电泳栖、

凝脏成像系统、隔离泪室、恒泪水浴、低洒冰箱等。

做盘移液器（2µL,10µL.20µL.1001~L.2001.d,.J000µL）、酶联板、研钵、离心管、花盆、灭菌

土练。

3.2试剂

酶联免疫吸附测定试剂见附录B.RT-PCR检测试齐｜！见附录c.实时荧光RT-PCR检测试剂见

附录DJ.t：二物学测定试剂参见附录E。

4抽样与样品制备

4.1抽样

抽样按照SN/T2122的规定进行。

4.2马铃薯块茎样品的制备

将马铃薯块主播子灭曲土中．子25℃生长jf：进行症状观察。待长出约10片叶后将表现症状的植

株编号，米表现症状的植株分组(10株为一组）井编号。采集Ill唱片用于酶联免疫测定、RT-PCR检测、实

时荧光RT白PCR检测及他物学测定。

4.3组培苗样品制备

将每瓶组培由中的每个植株都进行采样．每jffi组站曲所采样品作为一个）JD样样品用于酶联免疫测

定、RT-PCR检测、实时荧光RT-PCR检测及生物学测定。

CB/T31806一2015

5检测方法

5.1酶联免疫吸附测定

见附录队

5.2RT-PCR检测

儿｜咐求C。

5.3实时荧光RT-PCR检测方法

见附录D。

5.4生物学测定

参见附录E。

6结果判定

样品经酶联免疫I强附活！lj定；f＇］阴性与x:wr-PCR检测为阴性或实u才荧光RT-PCR检部Jj:;J-1阴性，多ljllfr待

检样品不携带马轮聘V病毒．

样品经酶联免疫吸附测定为阳性.RT-PCR检测或实时荧／（；RT-PCR检测为阳性．即可判断待检

样品携带马铃薯V病毒。必要时可进行生物学测定。

7样品保存与结果记录

7.1样品保存

经检测确定携带马铃薯V病毒的样品应在合适的条件下保存．块茎可在4℃保存6个月．组楼前

司在一20。C或－80℃冰箱小保存1年．做好标记和登记工作。

7.2结果记录

究整的记录包括：样品的来源、时间、地点、方法和结果等，并应有经手人和｜实验人员的答字。酣联

测定应有酶联板反应的原始数据，RT”PCR检测应有电泳结果图片，实时荧光RT-PCR检测应有反应

原始数据．生物学淑I~~应有鉴别字守主的症状照片。

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GB/T31806-2015

附录A

（资料性附录〉

马铃薯V病毒相关资料

A.1背景资料

A.1.1基本信息

：学：名：Potatovi,’usv.缩写：PVV。

分类地位：马铃薯Y病毒科（Pοtyviγidαe），马铃薯Y病毒属（Potyvirus）。

A.1.2方法原理

根据马铃蒋V病报与抗体之间的特异性反应．对植物样品进行凹，IS八检测；根据读病毒核酸的序

列进行PCH特异性检测．迦过电泳条带大小进行结果判定；根据该病毒核酸序列设计特异性引物和荧

光探针，通过检测的荧光信号进行结果判定。条件允许的情况下．根据马铃薯V病毒佼染奇主的挤状

特点．进行生物学检测。

A.2寄主范围

马铃薯V病毒自然侵染仅限马铃薯。

A.3f斋害症状

侵染的槌株叶片灰内．新生nt变小．轻度相fJIJ.可能发展为花叶利坏死斑。

A.4分布地区

分布于嗨岱、法li<I、荷兰和英间。

A.5传播方式

t:f虫传播．传播马铃薯V病毒的如虫种类为Myzusρersical!、Bracityeαudushelichrysi、Macrosi­

ρhumeuρhorbiae、Rhoραlosiρho11i11uslatysiρ＂IJll。

A.6粒体形态

线状粒体．直径11nm~13nm.主体长皮为760nm。

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CB/T31806一2015

附录B