DB12/T 952-2020 猪粪中抗生素残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法

ICS65.202.30

B45

DB12

天津市地方标准

DB12/T952—2020

猪粪中抗生素残留量检测方法

液相色谱-质谱/质谱法

Thedeterminationmethodofantibioticresiduesinpigmanurebyliquid

chromatography-massspectrometry

2020-08-18发布2020-10-01实施

天津市市场监督管理委员会发布

DB12/T952—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。

本标准起草单位：农业农村部环境保护科研监测所、天津农学院。

本标准主要起草人：支苏丽、张克强、周婧、刘海学、吴惠惠、杜连柱、阮蓉。

I

DB12/T952—2020

猪粪中抗生素残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了猪粪中抗生素检测的原理、试剂耗材、仪器设备、试样制备、检测步骤、结果计算和

精密度。

本标准适用于生猪养殖场畜舍内以及堆粪场粪便中土霉素、强力霉素、四环素、去甲基金霉素、磺

胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、洛美沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、二氟沙

星、氟罗沙星、奥比沙星、氟甲喹、西诺沙星和依诺沙星残留量的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T1896-2010兽药残留实验室质量控制规范

3原理

样品中抗生素残留物用甲醇-乙腈-柠檬酸缓冲溶液提取，用固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/

质谱测定，外标法定量。

4试剂材料

4.1水：GB/T6682规定的一级水。

4.2乙腈：色谱级。

4.3甲醇：色谱级。

4.4甲酸：色谱级。

4.5EDTA-McIlvaine缓冲液：称取柠檬酸12.9g，磷酸氢二钠5.45g，乙二胺四乙酸二钠37.2g，

溶于水中，并稀释至1L。

4.60.1%甲酸溶液：取甲酸（4.4）0.5mL溶于水稀释至500mL，当天配制。

4.7标准储备溶液：分别称取适量标准品（精确到0.00001g），分别用甲醇（4.3）溶解，配制成100

mg/L，置于冰箱-20℃保存，保质期6个月。

4.8标准工作溶液：准确称取抗生素标准储备液（4.7）适量，用甲醇水（v/v=50:50）配制成不同浓

度系列的混合标准工作溶液（用时现配）。

4.9OasisHLB固相萃取小柱或者相当：6mL，500mg。

4.10滤膜：0.22μm，有机系。

5仪器设备

1

DB12/T952—2020

5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。

5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。

5.3旋涡混匀器。

5.4超声波发生器。

5.5离心机：最大转速不低于5000r/min。

5.6移液器。

5.7固相萃取装置。

5.8氮气吹干仪。

5.9冷冻干燥器。

6试样制备

取适量样品，将充分的样品进行冷冻干燥并粉碎，粉碎后装入洁净容器，并于-18℃避光干燥保存。

7检测步骤

7.1提取

称取1.00g（精确到0.01g）干燥猪粪样于50mL离心管中，加入10mL乙腈-甲醇-EDTA-McIlvaine

缓冲液（1:1:2，v/v/v）混合液，涡旋1.0min，100Hz超声15min，4℃离心（10000r/min）15min，

将上清液吸取到烧杯中，再重复提取一次，将上清液合并，进行适当稀释至有机相低于10%。

7.2净化

首先用6mL甲醇和6mL水，依次活化固相萃取柱，将稀释过的上清液混匀，以大约1mL/min的速度

通过活化后的HLB固相萃取柱，待过完柱子后，用6mL水淋洗，真空抽干柱子，用6mL甲醇洗脱柱子（速

度控制在1mL/min左右）。将洗脱液于低于40℃下氮气吹干，用1.0mL甲醇:水（1:1，v/v，水含0.1%

甲酸）复溶，0.22μm有机滤膜过滤，用液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.3标准曲线绘制

在仪器的最佳条件下，经过上述优化的前处理方法提取得到空白粪样溶液，分别用甲醇:水=1:1溶

液稀释标准混合工作液，配制0、5、10、50、100、200、500、1000µg/L系列标准工作溶液，供液相色

谱-串联质谱测定。分别以目标抗生素定量离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐

标，绘制标准曲线。

7.4测定

7.4.1液相色谱参考条件

7.4.1.1色谱柱：C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒度1.8μm，或性能相当者。

7.4.1.2柱温：40℃。

7.4.1.3流动相：A组分是一级水（含0.1%甲酸）；B组分是乙腈。梯度洗脱程序见表1。

7.4.1.4