DB36/T 1904-2023 实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法

ICS65.020.30

CCSB44

DB36

江西省地方标准

DB36/T1904—2023

实验动物支原体荧光定量PCR检测方法

Laboratoryanimal—real-timequantitativePCRmethodforexaminationof

mycoplasma

2023-12-11发布2024-06–01实施

江西省市场监督管理局发布

DB36/T1904—2023

目次

前言.............................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语和定义........................................................................1

4缩略语............................................................................2

5设备和材料........................................................................2

6试剂..............................................................................2

7检测流程..........................................................................2

8结果判定..........................................................................4

附录A（规范性附录）溶液配制方法....................................................5

附录B（规范性附录）荧光定量PCR的引物与探针........................................7

附录C（规范性附录）荧光定量PCR检测方法............................................8

参考文献..........................................................................9

I

DB36/T1904—2023

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江西省卫生健康委员会提出并归口。

本文件起草单位：江西省职业病防治研究院。

本文件主要起草人：肖芳平、张陆兵、周银平、熊莉娟、万筱荣、贾菠、刘欢、罗勇兵、谢金明、

周剑、李银才。

II

DB36/T1904—2023

实验动物支原体荧光定量PCR检测方法

1范围

本文件规定了实验动物支原体荧光定量PCR检测的术语和定义、缩略语、设备和材料、试剂、检测

流程和结果判定等内容。

本文件适用于小鼠、大鼠中支原体的检测，饲养环境中支原体的检测参照执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，

仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于

本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB14922实验动物微生物、寄生虫学等级及监测

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

GB/T39760实验动物安乐死指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

支原体mycoplasma

支原体属于柔膜体纲，支原体目，支原体科，大小介于病毒和细菌之间，约0.1μm~0.6μm，没有细

胞壁，仅有三层结构且富含胆固醇的细胞膜。大多数的支原体都具有种属特异性。

3.2

荧光定量聚合酶链式反应real-timequantitativepolymerasechainreaction;real-timePCR

在常规PCR的基础上，在反应体系中加入一对特异性引物和一条特异性探针，探针两端分别标记一

个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR

扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，淬灭作用消

失，荧光信号产生并被检测仪器接受。随着PCR反应的循环进行，PCR产物与荧光信号的增长呈对应关

系，通过检测荧光信号对核酸模板进行检测。

3.3

Ct值cyclethresholdvalue

1

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荧光定量PCR反应中每个反应管内的荧