DB5333/T 12.5-2018 兰坪乌骨绵羊养殖技术规范第5部分：胚胎移植技术

ICS65.020.30

B43

DB

怒江州地方标准

DB5333/T12.5—2018

兰坪乌骨绵羊养殖技术规范

第5部分：胚胎移植技术

2018-06-20发布2018-09-20实施

怒江傈僳族自治州质量技术监督局发布

DB5333/T12.5—2018

前  言

《兰坪乌骨绵羊养殖技术规范》分为以下6个部分：

——第1部分：品种；

——第2部分：区域布局；

——第3部分：饲养管理；

——第4部分：饲草加工调制技术；

——第5部分：胚胎移植技术；

——第6部分：产品质量。

本部分为DB5333/T12的第5部分。

本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

本标准由云南省兰坪县兰坪乌骨绵羊养殖农业标准化示范区项目领导小组提出。

本标准由怒江州质量技术监督局归口。

本标准主要起草人：洪琼花、李俊东、李东江、权国波、张兴仁、和四池、李庆亮、张韩。

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兰坪乌骨绵羊养殖技术规范

第5部分：胚胎移植技术

1范围

本标准规定了兰坪乌骨绵羊术语和定义、胚胎移植的基本原则、供体羊、供体羊的超排与配种、胚

胎回收、胚胎质量鉴定、供受体羊的同期发情处理、胚胎移植、妊娠受体羊的饲养管理。

本规范适用于兰坪乌骨绵羊的超数排卵及胚胎移植的各个环节。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T826绵羊胚胎移植技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1供体羊

提供卵子或胚胎的优秀繁殖母羊。

3.2受体羊

接受胚胎（移植）的母羊。

3.3同期发情

使用外源激素来调控一群母羊的发情时间，使之在预定的时间内集中发情并排卵。

3.4超数排卵（简称超排）

在母羊发情周期的适当时间，使用外源激素诱导更多的卵泡正常发育，并多排卵。

3.5胚胎移植

将受精卵（胚胎）移植到受体子宫角内。

4胚胎移植的基本原则

4.1胚胎供体与受体在分类学上属于同一物种。

4.2胚胎发育阶段与受体母羊发情时间上的一致性,即供、受体母羊发情时间相差不超过24小时。

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4.3胚胎发育阶段与受体生殖道解剖位置的一致性,即从供体母羊输卵管收集到的胚胎应移植到受体

供体羊的选择与饲养管理

5供体羊

5.1供体羊的选择

5.1.1供体羊应符合兰坪乌骨绵羊的典型特征，谱系清楚，遗传性稳定，种用价值高。

5.1.2体质健壮，膘情中等。

5.1.3繁殖机能正常、无遗传和传染性疾病。

5.1.4年龄在2岁～6岁。

5.2供体羊的饲养管理

5.2.1单独组群，专人管理。

5.2.2保持饲养环境稳定，避免应激反应，期间不得任意变换草料和管理程序。

5.2.3加强饲养，在优质牧草地放牧，补充高蛋白、维生素和矿物质，并供给盐和清洁的饮水，保证

正常的营养平衡。

5.2.4参照NY/T826-2004绵羊胚胎移植技术规程，详细记录羊只的饲喂方式、饲料配方，以及疾病

诊治、驱虫羊只的年龄、胎次、体重、上次发情时间、上次产羔时间、断奶时间、上次冲胚时间等情况。

5.2.5注射维生素A、D、E合剂，促发情、提高妊娠免疫。

6供体羊的超排与配种

6.1超排处理

6.1.1超排激素

FSH（促卵泡素）、PGF2a、CIDR（孕酮阴道栓）、PMSG（孕马血清）。

6.1.2超排方法

6.1.2.1FSH+PG法

在自然发情周期的任意一天给母羊埋置孕酮阴道栓，第11天开始采用递减法每天早晚各注射一次

FSH，连续注射4天，在第5次注射FSH时，同时肌注PGF2α。

6.1.2.2FSH+PMSG法

在自然发情周期的任意一天给母羊埋置孕酮阴道栓，第11天开始采用递减法每天早晚各注射一次

FSH，连续注射4天，在第1次注射FSH时，同时注射PMSG300IU。

6.2发情鉴定

在注射第七针FSH的同时撤除孕酮阴道栓，FSH注射完毕，随即每天早晚用试情公羊（带试情布或结

扎输精管）对超排供体羊进行试情，以母羊站立接受试情公羊爬跨作为发情的标准。

6.3配种

供体母羊发情后，每日上、下午各配种一次，直至发情结束。

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7胚胎回收

7.1采卵（胚胎）时间

以供体母羊发情日为0天，在5.5～7天或2～3天用手术法分别从子宫和输卵管回收胚胎或受精卵。

7.2采卵（胚胎）前的准备

7.2.1手术室设置及要求

在手术室内设专门套间，作为胚胎操作室。手术室要求洁净明亮，光线充足、无尘、地面用水泥或

砖铺成，配备照明用电。室内温度应保持在20～25℃。手术室定期用3～5%煤酚皂溶液喷洒消毒，手术

前用紫外灯照射1～2小时，手术过程中不能随意开启门窗。

7.2.2回收胚胎所需主要器械

羊胚胎移植主要器械与设备见附录C。

7.2.3回收胚胎所需药品

新洁尔灭、静松灵、0.9%生理盐水、酒精、碘酒、青霉素、链霉素等。

7.2.4冲胚液的配制

基液：杜氏磷酸缓冲液（PBS），配方见附录A。也可用进口PBS粉配制。冲胚液：含1%FCS（胎犊牛

血清）或CS（犊牛血清）的PBS液。

7.3采卵（胚胎）步骤

7.3.1供体羊准备

7.3.1.1停食

供体羊手术前应停食24～48小时，可供给适量饮水。

7.3.1.2供体羊的保定和麻醉

供体羊仰放在手术保定架上，四肢固定。按每公斤体重0.03～0.05ml2%静松灵肌注麻醉。

7.3.1.3手术部位及消毒

手术部位一般选择乳房前肢中线部（在两条乳静脉之间）或腹中浅的两侧均可。用电剪或毛剪剪去

术部毛，刮净毛茬，分别用清水和消毒液清洗局部，然后由里向外涂以2%～4%的碘酒，待干后再用75%

的酒精棉脱碘。盖上创巾，使预定的切口暴露在创巾开口的中部。

7.3.2术者的准备

术者应将指甲剪短，并锉光滑，穿清洁手术服、戴工作帽和口罩。术者将手指尖到肘部先后在温水、

0.1%的新洁尔灭液中浸洗5分钟，双手消毒后，要保持供手姿势，避免与未消毒过的物品接触，一旦接

触，即应重新消毒。

7.3.3手术法回收卵（胚胎）

7.3.3.1组织分离

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避开较大血管和神经、切口边缘与切面整齐、切口方向与组织走向尽量一致、依组织层次分层切开、

切口长约5厘米。

7.3.3.2切开皮肤

用右手的食指和拇指在预定切口的两侧将皮肤撑紧固定，右手用餐刀式执刀，由预定切口起点至终

点一次切开，使切口深度一致，边缘平直。

7.3.3.3切开皮下组织

皮下组织用执笔式执刀法切开，切时可先切一小口，再用外科剪刀剪开。

7.3.3.4切开肌肉

7.3.3.5用钝性分离法。按肌肉纤维方向用刀柄刺开一小切口，然后将刀柄末端或用手指伸入切口，

沿纤维方向整齐分离开，避免损伤肌肉的血管和神经。

7.3.3.6切开腹膜

先用镊子提起腹膜，在提起部位作一切口，然后用另一只手的手指深入腹膜，用外科剪将腹膜剪开。

术者将食指及中指由切口伸入腹腔，在骨盆腔、膀胱周围触摸子宫角，并将卵巢、子宫引出切口外，记

录两侧卵巢黄体和滤泡数。

7.3.3.7止血

毛细血管出血用沙布轻压出血处即可，小血管用止血钳止血，较大血管除用止血钳夹住暂时止血外，

必要时还需用缝合线结扎止血。

7.3.3.8采卵（胚胎）方法

7.3.3.8.1输卵管法

供体羊发情后2～3天从输卵管采集2～8细胞胚胎，进行鲜胚移植。方法：将冲卵管一端由输卵管伞

部的喇叭口插入，约2～3厘米深，另一端接集卵皿，用注射器吸取37℃的冲卵液5～10ml，在子宫角靠

近输卵管的部位，将针头朝输卵管方向扎入，一人操作，一只手的手指在针头后方捏紧子宫角，另一只

手推注射器，冲卵液即由宫管结合部流入输卵管，经输卵管流至集卵皿。此法优点是卵的回收率高，冲

卵液用量小，检卵省时间。缺点是容易造成输卵管，特别是伞部的粘连。

7.3.3.8.2子宫法

在超排母羊发情后5.5～7天从子宫采集桑椹胚至扩张囊胚，胚胎可用于鲜胚移植、冷冻、分割及其

它研究。方法：用带胶管的肠钳夹在一侧子宫角基部，冲卵针头（钝形）从子宫角尖端插入，当确认针

头在管腔内，进退通畅时，把冲卵液缓慢注入子宫腔，待子宫角适度膨胀后，用子宫导卵管从子宫角基

部导入子宫腔，导卵管另一端接平皿，同时轻轻挤压子宫角前端，将冲卵液导出，每侧子宫角需要约30ml

冲卵液。另一侧子宫角用同样方法冲洗。子宫法对输卵管损伤较小，尤其不涉及伞部，但卵回收率较输

卵管法低，用液较多，检卵较费时。