JJF 1836-2020 微量分光光度计校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范

JJF1836—2020

微量分光光度计校准规范

CalibrationSpecificationforMicro-spectrophotometers

2020-07-02发布2021-01-02实施

国家市场监督管理总局发布

JJF1836—2020

微量分光光度计校准规范

CalibrationSpecification

JJF1836—2020

forMicro-spectrophotometers

归口单位：全国生物计量技术委员会

主要起草单位:中国计量科学研究院

上海市计量测试技术研究院

博奥生物集团有限公司

本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释

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本规范主要起草人:

高运华（中国计量科学研究院）

许丽（上海市计量测试技术研宄院）

武利庆（中国计量科学研究院）

王东（博奥生物集团有限公司）

梁文（上海市计量测试技术研究院）

李宝连（博奥生物集团有限公司）

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目录

弓I胃II

J范围1

2弓耐#1

3紐1

4.2

5.2

5.1校准用标准物质及试剂2

6校准项目和校准方法2

61示值误差2

6.23

63线性和线性范围3

7校准结果表达“4

8复校时间间隔4

附录A示值误差结果的不确定度评定模型5

附录B校准原始记录参考格式8

附录C校准证书（内页)参考格式9

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引

本规范起草中参考了UG178-2007《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程》、

GB/T26810-2011《可见分光光度计》，依据JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》

的要求编制

本规范为首次发布。

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微量分光光度计校准规范

1范围

本规范适用于微量分光光度计的校准，对于其它类型的分光光度计仪，可参照本规

范执行。

2引用文件

本规范引用了下列文件：

JJG178-2007《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程》

GB/T26810-2011《可见分光光度计》

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范：凡是不注日期的引用文件，

其域新版本适用于本规范。

3概述

微量分光光度计体积小，样品用量少〜2)pL,由光源、单色器、吸收池、检

测器以及信号指示系统五个部分组成。原玫是基于物质对不同波长光的选择性吸收和朗

伯-比尔（Lambert-Beer)定律对物沾迸行定量分析和定性鉴别，常用于核酸，蛋白定性

定量分析以及菌液浓度的定量。

朗伯-比尔（Lambert-Beer)定律的数学表达式为：

A=-l(///〇)—-\^T-klc

式中：

A:物质的吸光度

/〇:入射的单色光强度

/:透射的单色光强度

r:物质的透射比

々：物质的吸光系数

/:被分析物质的光程

C:物质的浓度

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检测时，用移液器将（1〜2)ML样品滴加到检测平台上，仪器自动完成测试，显

示吸光度值，给出样品（核酸、蛋白和荧光染料）定性和定量结果。

4计量特性

4.1示值误差

4.2重复性

4.3线性和线性范围

5校准条件

仪器使用允许的环境条件，温度：（15〜35)°C、相对湿度：（10〜80)%RH，校准过

程中测量并记录环境的温度、相对湿度。

5.1校准用标准物质及试剂

5.1.1校准用标准物质

校准时应采用有证标准物质，包括：DNA标准物质，其特性量值（10〜2000)n/ML.

相对扩展不确定度Sl〇%(A=2);RNA标准物质（10〜2000)n/ML,相对扩展不确定度£10%

(又二2)或蛋白质标准物质（50〜2000)n/ML，相对扩展不确定度$10%U二2)。

5.1.2试剂

电阻率达到18Mf>cm(25°C)的蒸馏水或三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸（TE)缓

冲溶液等，用于校准时仪器空白校准用。

5.1.3移液器

规格：M大童程2^L、2.5HL、10HL，需检定合格。

6校准项目和校准方法

6.1示值误差

选择DNA或RNA或蛋白质含fi标准物质，用仪器自动设定的光程在仪器上分别测定

260nm、280nm处吸光度值及对应的含量值，记录260nm(DNA或RNA)处或280nm(蛋白

质）处3次含量值的算术平均数与标准值之差，按式（1)计算其示值误差。

2

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式（1)

式中：

SK示值误差(n/^L)；

X。标准(n/^L)；

X,测定值（n/pL)；

n测定次数。

6.2重复性

选择DNA或RNA，蛋白质含量标准物质，用仪器自动设定的光程在仪器上分別测定

260nm、280nm处吸光度值及对应的含量值，记录260nm(DNA或RNA)处或280mn(蛋白

式（2)

s标准偏差；

^6次含量测定值的算术平均值：

Xi每次的含量测定值；

〃测定的次数；

/测定的序号，^=1〜6。

6.3线性和线性范围

选择不同含量的DNA标准物质，浓度范网在（10〜2000)n/pL及合适浓度的RNA

或蛋白质标准物质，至少5个浓度梯度，用仪器自动设定的光程在仪器上测定（260mn

处和280mn处）空白和各标准物质的吸光度对应的含量值，每个浓度水平重复测定3次，

3

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计算其平均值。以系列标准物质的标称值和对应的吸光度值做标准曲线，按公式（3)

计算其相关系数r，根据测量结果与标准物质标准值的一致程度，给出其线性范围。

ftu

，，-

N

式（3)

(n\

,Z^2

Yx2,_|yy2,-i

trnN

\)vJ

式中：

相关系数；

标准物质的标称值;

Y对应的吸光度值;

N测量次数。

7校准结果表达

校准记录应尽可能详尽地记载测量数据和计算结果，推荐的校准记录格式见附录B。

微量分光光度计测量结果的测量不确定以Vi按JJF1059.1的要求评定，不确定度评定实

例见附录A。经校准的微量分光光度计应出具校准证书，校准证书应符合IFF1071-2010

屮5.12的要求。

8复校时间间隔

根据实际使用情况，用户可內行确定仪器复校时间间隔，建议不超过1年。

4

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附录

附录A

示值误差结果的不确定度评定模型

A.1、数学模型

n

SKX〇

n式（1)

式中：

级不值误差（n/pL);

X。标准值(n/)；

X,测定值(n/nL);

n测定次数。

A.2、不确定度来源\

(1)重复性引入的不确定度。

(2)标准物质引入的不确定度。

A.3、不确定度分量的计算

(1)重复性《,($)

用重复性实验数据计算标准偏差SD,测屋;数据及计算结果见表A.1。

表A.1重复性引入的不确定度ng/pL

标称标准测量值平均

SD

值值1234567值

1010.710.79.810.510.110.310.810.410.40.4

100103.998.299.799.3103.1102.9104.6103.1101.32.6

500508.1515.3512.4519.7510509.3512.8510513.23.8

100010481073.210691070.810911083.81082.7109]10788.7

200021632036.32042.32044.22042.32046.62053.42042.320445.7

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(2)标准物质引入的不确定度。

标准物质引入的不确定度由标准物质证书得到，,,/A，大二2，见表A.2。

表A.2标准物质引入的不确定度

扩展不确定度标准不确定度

标称值（n/|iL)特性量值（n/pL)

(n/pL)(n/pL)

1010.70.80.4

100103.99.64.8

500508.14925

1000104810854

2000216319095

A.4标准不确定度一览表

标准不确定度一览表见表A.3。

表A.3标准不确定度一览表

54

100008.7

20005.795

A.5、合成标准不确定度

合成标准不确定度用公式w(AC)=+计算得到，结果见表A.4。

A.6、扩展标准不确定度

扩展不确定度用公式t/=2W(AC)计算得到，结果见表A.4。

6

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表A.4合成和扩展不确定度结果

标称浓度合成不确定度扩展不确定度包含因子

Uk

u(AC)(n/pL)

(ng/pL)

100.61.2x10。2

1005.51.lxlO12

50024.75-OxlO12

100054.71.lxlO22

200095.21.9xl〇22

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附录B

校准原始记录参考格式

送检单位:_________校准日期：____________年________月_日

仪器名称:_________制造厂：___________________________________

型号:_________出厂编号：____________________________________

证书编号：____________________________

环境温度：______°C相对湿度：________%

1.仪器外观

2、示值误差、重复性和线性测试数据

标准物标准123备注

质值测景值ODifi测量值OD值测量值ODfft

\

线性范[f彳在0ng/|iL

-lOOng/pL的仪器，

采用此组数据汁兑

示值误差和重复性

线性范[f彳在0ng/|iL

-2000ng/ML的仪器，

采用此组数据i：十兑

示值误差和重复性

校准员:核验员:

8

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附录C

校准证书(内页)参考格式