DB15/T 2073-2021 动物垫料中单核细胞增生李斯特氏菌检测

ICS07.100.99

CCSB41

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2073—2021

动物垫料中单核细胞增生李斯特氏菌检测

DetectionofListeriamonocytogenesinanimalpadding

2021-01-25发布2021-02-25实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2073—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由中华人民共和国呼和浩特海关提出并归口。

本文件起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关、内蒙古农业大学、鄂尔多斯市动物疫病预防控制

中心、内蒙古自治区农牧业科学院。

本文件主要起草人：赵治国、郭晓宇、张晓东、敖威华、王海艳、崔强、陈林军、延涵、靳木子、

李军燕、罗晓平。

I

DB15/T2073—2021

动物垫料中单核细胞增生李斯特氏菌检测

1范围

本文件规定了动物垫料中单核细胞增生李斯特氏菌的分离鉴定定性检测法。

本文件适用于动物垫料中单核细胞增生李斯特氏菌定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T33682基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则

SN/T1538.1培养基制法指南第1部分：实验室培养基制法质量保证通则

SN/T1538.2培养基制法指南第2部分：培养基性能测试实用指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

动物垫料animalbedding

用于吸收动物排泄物，使动物保持舒适生活环境的铺垫物。

注：包括动物笼内非直接与动物机体接触的铺垫物。

4设备和材料

4.1冰箱：2℃～5℃。

4.2恒温培养箱：30℃±1℃，36℃±1℃。

4.3均质器。

4.4振荡器。

4.5电子天平：感量0.1g，0.0001g。

4.6全自动微生物生化鉴定系统。

4.7飞行时间质谱仪。

4.8二级生物安全柜。

4.9光学显微镜。

4.10pH计。

4.11微量移液器。

1

DB15/T2073—2021

4.12无菌锥形瓶：500mL，250mL。

4.13无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

4.14无菌培养皿：15mm×90mm。

4.15无菌试管：18mm×180mm。

4.16无菌量筒：250mL，1000mL。

4.17无菌棉签。

4.18无菌镊子。

4.19无菌剪刀。

4.20无菌勺。

4.21无菌玻片。

4.22无菌接种环。

5培养基和试剂

5.1实验用水：符合GB/T6682的要求。

5.2含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):见附录A中A.2。

5.3HalfFraser肉汤和Fraser肉汤:见附录A中A.3。

5.4牛津琼脂:见附录A中A.4。

5.5革兰氏染液:见附录A中A.5。

5.6SIM动力培养基:见附录A中A.6。

5.7缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P试验用]:见附录A中A.7。

5.85%~8%羊血琼脂:见附录A中A.8。

5.9糖发酵培养基（木糖和鼠李糖）：见附录A中A.9。

5.10过氧化氢试剂:见附录A中A.10。

5.11无菌生理盐水:见附录A中A.11。

5.12李斯特氏菌显色培养基。

5.13生化鉴定试剂盒。

5.14革兰氏阳性菌生化鉴定卡。

5.15飞行时间质谱仪靶板。

5.16单核细胞增生李斯特氏菌标准菌株ATCC19111或CMCC54004，或其他等效标准菌株。

6检验程序

单核细胞增生李斯特氏菌检验程序见图1。

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DB15/T2073—2021

样品制备

检样25g（mL）+225mLHalfFraser肉汤，均质

30℃±1℃,24h±2h

0.1mL培养物匀液+10mLFraser肉汤

30℃±1℃,24h±2h

李斯特氏菌显色平板牛津琼脂平板

36℃±1℃,24h～48h

接种木糖、鼠李糖，36℃±1℃,24h±2h；

并在TSA-YE平板上划线，36℃±1℃,18h±24h

木糖-，鼠李糖+

鉴定

结果报告

图1单核细胞增生李斯特氏菌检验程序

7操作步骤

7.1取样

7.1.1取样原则

应遵循随机性、代表性的原则。取样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。

7.1.2样品处理

7.1.2.1颗粒状或粉末样品

对送检样品包装内不同部位样品进行随机多点取样至少250g，充分混匀后称取25g颗粒状或粉

末状垫料样品，加入225mLHalfFraser肉汤，充分振摇或均质1min～2min，置30℃±1℃培养

3

DB15/T2073—2021

24h±2h预增菌。

7.1.2.2平面样品

无菌操作将灭菌规格板（5cmÍ5cm）放在平面垫料表面，用浸有无菌稀释液（磷酸缓冲液或生理

盐水）的棉拭子，在规格板内来回均匀涂抹整个方格3次，并随之转动棉拭子，然后用灭菌剪刀剪去

棉拭子与手接触的部分，将棉拭子头置入装有25mL无菌稀释液的无菌锥形瓶中，根据样品面积大小

重复取样1～4个规格板面积，相应地将棉拭子头置入25mL～100mL的无菌稀释液中，充分振摇制成

样品原液（1mL原液对应的样品面积为1cm2），取样量见表1。取25mL样品原液加入225mLHalfFraser

肉汤，充分振摇或均质1min～2min，置30℃±1℃培养24h±2h预增菌。

表1不同面积平面类垫料样品取样量

样品面积取样量