DB35/T 1555-2016 水仙黄条病毒、水仙花叶病毒和水仙潜隐病毒 多重RT-PCR 检测方法

ICS65.020.01

B16

DB35

福建省地方标准

DB35/T1555—2016

水仙黄条病毒、水仙花叶病毒和水仙潜隐病毒

多重RT-PCR检测方法

MultiplexRT-PCRMethodofNarcissusyellowstripevirus,Narcissusmosaicvirusand

Narcissuslatentvirus

2016-04-06发布2016-07-06实施

福建省质量技术监督局发布

DB35/T1555—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》给出的规则编写。

本标准由福建出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：福建出入境检验检疫局、福建农林大学。

本标准主要起草人：沈建国、高芳銮、金晶、李敏、虞赟、陈细红、陈寿铃。

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DB35/T1555—2016

水仙黄条病毒、水仙花叶病毒和水仙潜隐病毒多重RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了水仙黄条病毒、水仙花叶病毒和水仙潜隐病毒的多重RT-PCR检测方法。

本标准适用于水仙鳞球茎、植株中水仙黄条病毒、水仙花叶病毒和水仙潜隐病毒的多重RT-PCR检测。

2规范性文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样方法

SN/T2964植物病毒检测规范

SN/T3457植物病毒分子生物学检测规范

3有害生物基本信息

参见附录A。

4原理

水仙黄条病毒、水仙花叶病毒和水仙潜隐病毒分子生物学特性是多重RT-PCR检测的主要依据。

5仪器设备和主要试剂

5.1仪器设备

高速冷冻离心机、电子天平（1/1000g）、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、-20℃低温冰箱和-80℃

超低温冰箱、凝胶成像分析系统、pH计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、超净工作台

等。

5.2主要试剂

多重RT-PCR检测试剂见附录B。

6抽样和样品制备

6.1抽样

抽样方法按照SN/T2122中规定执行，尽可能抽取有病毒危害症状的材料，水仙黄条病毒、水仙花

叶病毒和水仙潜隐病毒的危害症状描述参见附录A。

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6.2样品制备

分别按照有症状和无症状进行样品制备，具体方法按照SN/T2964和SN/T3457中规定执行。

7多重RT-PCR

具体方法见附录B。

8序列测定

PCR产物纯化、回收后，进行克隆、测序，或者直接测序。利用美国国立生物技术信息中心（NCBI）

网站上的BLAST软件把测序所得到的核苷酸序列与已知的相应病毒序列进行比对，同源性达到95%以上，

则判定为该病毒序列。

9结果判定

9.1当RT-PCR检测结果呈阳性，测定的序列为水仙黄条病毒序列，则判定为检出水仙黄条病毒。

9.2当RT-PCR检测结果呈阳性，测定的序列为水仙花叶病毒序列，则判定为检出水仙花叶病毒。

9.3当RT-PCR检测结果呈阳性，测定的序列为水仙潜隐病毒序列，则判定为检出水仙潜隐病毒。

9.4当RT-PCR检测结果呈阴性，则判定为未检出对应目的条带大小的病毒。

10结果判样品保存

经检测，结果判定为阳性的样品应保存在-20℃或-80℃冰箱中，并作好登记和标记工作，以备复

核用。

11记录

记录好各项实验数据，包括样品来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经

手人和实验人员的签字。分子生物学检测结果保留电泳照片，序列测定结果保留测序报告图。

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附录A

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