NY/T 562-2002 动物衣原体病诊断技术

ICs11.220

s41

中华人民共和国农业行业标准

NY/T5622002

动物衣原体病诊断技术

Diagnostictechniquesforanimalchlamydiosis

2002一08一27发布2002一12一01实施

中华人民共和国农业部发布

491

NY/T562-2002

前言

衣原体病是由衣原体感染引起的一类具有公共卫生意义的自然疫源性疾病11前己发现鸭、火鸡、

鸡、鸽、鹅等140余种禽鸟和数十种哺乳动物，如绵羊、山羊、牛、耗牛、马、骡、驴、猪、犬、猫、兔、豚鼠、小

鼠等可被衣原体感染，表现不同症状或呈亚临床经过

衣原体病病畜禽对人类的健康构成直接威胁，人与病畜禽接触，往往会被感染，表现感冒样症状、眼

疾和孕妇流产等因此加强对本病的口岸检疫具有十分重要的公共L?生学意义

衣原体属包括:鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsiltaci)、反色动物衣原体((Chlamydiapean-um)、沙眼衣

原体(Chlamydiatrach(,matis)和肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)，这4种衣原体具有共同的特异性

属抗原引起动物衣原体病的病原主要为鹦鹉热衣原体和反当动物衣原体，而沙眼衣原体感染猪一般呈

隐性经过

在80年代，衣原体病补体结合试验(CF)操作规程和间接血凝试验I(HA)操作规程已被分别纳人

农业部颁布的动物检疫规程，多年来被广泛地用于畜禽衣原体病监测和诊断

本标准的附录A、附录B,附录C、附录E和附录F为规范性附录，附录D为资料性附录

本标准由农业部畜牧兽医局提出

本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位中国农业科学院兰州兽医研究所。

木标准主要起草人:邱昌庆、高双娣、周继章、FKI礼{。

NY/'r562-2002

动物衣原体病诊断技术

1范围

本标准规定了补体结合试验(CF)的直接法与间接法和间接血凝试验CIIIA)技术

本标准的直接补体结合试验(T)CF)适用于猪以外的哺乳动物和鹦鹉、鸽(老龄鸽除外)衣原体病的

进出境检疫和定性诊断间接补体结合试验(ICF)适用于禽鸟(鹦鹉、鸽除外，但包括老龄鸽)和猪衣原

体病的进出境检疫和定性诊断;IHA试验适用于动物衣原体病的产地检疫、疫情监测和流行病学调杳。

2补体结合试验(CF)

2.1材料准备

2.1.1器材:12mmX37mm试管、试管架、水浴箱、U型96(8X12)孔微量滴定板、生理盐水。

2.1.2补体:商品补体，按说明书使用和保存，试验前对供试补体需经补体效价滴定。补体效价滴定方

法见附录Ae

2.1.3溶血素:试验前对供试溶血素需经效价滴定。溶血素效价滴定见附录ti

2.1.4100绵羊红细胞悬液，制备方法见附录Co敏化红细胞制备见第A.2章。

2.1.5被检血清，应无溶血、无腐败(可加入。.010n硫柳汞或0.2Y,叠氮钠防腐)，试验前需灭能。不同

畜禽血清灭能的温度和时间见附录D,

2.1.6标准抗原和标准阳性、阴性血清(抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录E)，指示血清”。

2.2操作方法

2.2.1直接补体结合试验(DCF)(包括试管法和微量法)

2.2.1.1试管法

按表1的程序操作。试验要同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、抗原对照、溶血素对

照和生理盐水对照

2.2.1.2微f法

用U刑96孔反应板，按表2的程序操作。试验同时设抗补体对照、阳性血清对照、阴性血清对照、

抗原对照、溶血素对照和生理盐水对照。

2.2-1.3DCF试验结果判定

在最后一次37C水浴30min后，立即进行试验结果判定。

表1直接补体结合试验(试管法)单位为毫升

被检血清对照

阳性生理

下丁可丽蔺可一RA订}{生理

成分试验管抗补体抗原溶血素效价

杭补体{_}}抗原!浴血萦}

血清盐水

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I:aI:8I:16I:321:64一1:42工作量t:42上作量

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血清(〕.10.10.10.10.1(10一.e〔41)

上。’‘

)I指示血清与该抗原相应的哺乳动物抗休

Nv/T5622002

表1(续)单位为毫升

十卜十+

表2直接补体结合试验(微t法)单位为微升

被检血清各项对照

阳性阴性生理

成分试验孔抗补体抗原溶血素效价

血清血清盐水

1:81:161:321:641:1281:42工作量1‘飞2仁作量

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2单位

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判定个不个不补纬叩%75%全溶血全溶血全不全溶血全溶血全溶血全不1:32

洛血溶血溶血溶血洛血落血洛血

2.2.1.3.1各组对照为如下结果时试验方成立，否则应重复试验:

被检血清杭补体对照:完全溶血(一)。

阳性血清加抗原对照:完全抑制溶血(+++十)。

阴性血清加抗原对照:完全溶血(一)。

抗原杭补体对照完全溶血(一)。

溶血素对照:完全溶血(一)。

19几

NY%T5622002

生理盐水对照:完全不溶血(十++十)

2.2.1.3.2判定标准:

a)兔血清:

被检血清效价斗1:16(++)判为阳性。

被检血清效价<1‘8(+)判为阴性

被检血清效价-1:16(+)或1:8(+十)判为可疑;重复试验仍为可疑，则判为阳性

b)绵羊、山羊、牛、幼龄鸽、鹦鹉等血清:

被检血清效价李1:8(++)判为阳性

被检血清效价镇1:4(+)判为阴性。

被检血清效价!1:8(+)或1，4(4-+)判为可疑;重复试验仍为可疑，则判为阳性。

2.2.2问接补体结合试验(1CF)(包括试管法和微量法)

2.2.2.1试管法

按表3的程序操作。

2.2.2.2微f法

按表4的程序操作

2.2.2.3结果判定

最后次‘37〔水浴30min后，立即判定。

2.2.2.3.1对照试验为如下结果时试验方可成立.否则应重复试验

被检血清抗补体对照:完全溶血(一)

阳性血清加抗原加指示血清:完全溶血(一)。

阴性血清加抗原加指示血清:完全抑制溶血(++++)

抗原抗补体对照:完全溶血(一)

2.2.2.3.2判定标准:

)鸭血清:

被检血清效价)1:16(++)判为阳性。

被检血清效价(I:8(+)判为阴性

被检血清效价=1:l6(+)或1:8(+-+-)判为可疑;重检仍为可疑判为阳性

b)猪、鸡、鹤鹑等血清

被检血清效价}1:8(++)判为阳性。

4(+)判为