GB/T 13266-1991 水质 物质对蚤类(大型蚤)急性毒性测定方法

中华人民共和国国家标准

水质物质对蚤类(大型蚤)

GB/T13266一91

急性毒性测定方法

Waterquality-Determinationoftheacutetoxicity

ofsubstancetoDaphnia(Daphniamagnastraus)

本标准参照采用国际标准ISO6341-1982水《质—大璧蚤运动抑制的测定》。

本标准用大型蚤D〔aphniamagnastraus(CladoceraCrustacea)〕为试验生物。测定物质或废水的半

数抑制浓度，半数致死浓度(24h-EC50,24h-LC5。或48h-EC50,48h-LC50)，用于判断物质或废

水的毒性程度。

1适用范围

本标准适用于以下范围:

a.在试验条件下可溶的化学物质(包括工业原料和产品、食品添加剂、农药、医药等)。

b，工业废水。

c生活污水。

d地表水、地下水。

2原理

2.124h-EC50,48h-EC50

指在24或48h内百分之五十的受试蚤运动受抑制时被测物的浓度。

2.2运动受抑制(Immobilization)

反复转动试验容器,15s之内失去活动能力的大型蚤，被认为运动受抑制。即使其触角仍能活动，也

应算做不活动的个体。

2.324卜LC50,40h-LC50

指在24或48h内百分之五十的受试蚤死亡时被测物的浓度，以受试蚤心脏停止跳动为其死亡标

志。

3试验材料

3，试验生物为大型蚤(〔Daphniamagnastraus)(甲壳纲，枝角亚目)〕。

保持良好的培养条件，使大型蚤的繁殖被约束在孤雌生殖的状态下(见附录A),

选用实验室条件下培养3代以上的、出生6^-24h的幼蚤为试验蚤。试验蚤应是同一母体的后代。

3.2试验用水:

3.2.1配制人工稀释水为试验用水。新配制的标准稀释水pH为7.8士。2,硬度250士25mg/L(以

CaCO。计)Ca/Mg比例接近4:1,溶解氧浓度在空气饱和值的80%以上，并不含有任何对大型蚤有毒

的物质。

人工稀释水用电导率10p5/cm(1mS/m)以下的蒸馏水或去离子水(以下简称水)按下述方法配

蘸而而瘫1991-Q9下4I蔺-1992一Q$一Q1实施

GB/T13266一91

制。

氯化钙溶液

将11.76g氯化钙(CaC,t·2H20)溶于水中稀释至1L,

b.硫酸镁溶液

将4.93g硫酸镁(MgSO,·7H20)溶于水中稀释至11。

碳酸氢钠溶液

将2.59g碳酸氢钠(NaHC03)溶于水中稀释至1L,

d.氯化钾溶液

将0.25g氯化钾(KCl)溶于水中稀释至1L.

各取以上四种溶液25mL混合，稀释至1L.必要时可用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH值，使

其稳定在7.8士。.2。标准稀释水应容许大型蚤在其中生存至少48h，并尽可能检查稀释水中不含有任

何已知的对大型蚤有毒的物质。例如:氯、重金属、农药、氨或多氯联苯。

3.2.2如果所进行的试验需要使用其他稀释水或改变稀释水的pH，应在试验报告中注明所用稀释水

的性质。要求稀释水的硬度在150^-300mg/L(以CaCO3计)范围内，Ca/Mg比例接近4e1,pH不得低

于6.5或不得高于8.5，同一试验pH波动不得大于。.5.

3.3重铬酸钾(K2Cr30,)，分析纯。

4试验液的制备

4.1试验物质溶液的配制

4.1.1试验物质可以是可溶于水的固体、液体或气体，但要求组分一定，具有代表性、重复性。

4.1.2易溶于水的试验物质可直接加到稀释水里，也可以溶解在蒸馏水或去离子水中配成贮备液加人

到稀释水中配成试验液，每升稀释水中的贮备液要少于10m1。贮备液应当低温保存。

4.1.3难溶于水的物质，可用适当的方法，将其溶解和分散。包括使用超声波装置及其他低毒溶剂增

溶。如果使用溶剂，溶剂在试验液中的浓度不应超过。.5mg/L，并应在试验的同时设两个对照组，一组

用稀释水，另一组用最大浓度的溶剂。

4.2工业废水试验液的制备

4.2.1样品的采集及处理:采集废水样品时，应将采样瓶充满水样，不留空气。样品采集后应立即进行

试验。如果样品采集后6h之内不能进行试验，则必需将水样冷冻保存((0-4'C)，并应尽可能缩短水样

在试验前保存的时间。

4.2.2生产流程用水不稳定的工业废水.应在24h之内，每隔6h瞬时采样一次，分别测定每个样品，

求得其最大毒性。

4.2.3废水样品可以用稀释水稀释配成不同浓度的试验液。

5试验容器和仪器

5.1试验容器可采用100mL小烧杯或结晶皿等玻璃制品，加盖表面皿。为防止玻璃容器对试验物质

的吸附，试验前可用低浓度试验溶液浸泡一天。试验结束后立即倒空容器，刷洗、消除任何微量的试验

液

5.2量筒、容量瓶、移液管、吸管、玻璃缸、尼龙筛网等器皿。

5.3溶解氧测定仪、pH计、温度计、电导仪。

6·环境条件

6.1试验温度要求基本稳定，变化不超过士I'C试验前的培养温度要求与试验温度基本一致。毒性试

验在20士1℃或25士1℃下进行。

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6.2实验在没有对大型蚤有害的气体、粉尘的大气条件下进行。

6.3试验在自然光照或相当于自然光照下进行(避免阳光直射)每天光照lo.h左右。

6.4大型蚤在试验前应与试验条件一致的环境中驯养7^-10d,

6.5试验操作及试验过程中蚤类不能离开水，转移时要用玻璃滴管。

了预试验

了.1正式试验之前，为确定试验浓度范围，必须先进行预备试验。预备试验浓度间距可宽一些(如。.1,

1,10)每个浓度至