DB35/T 1327-2013 番鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法

ICS07.080

B41

DB35

福建省地方标准

DB35/T1327—2013

番鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法

2013-02-20发布2013-05-20实施

福建省质量技术监督局发布

DB35/T1327—2013

目次

前言................................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3方法原理..........................................................................1

4实验室准备........................................................................1

5实验室条件........................................................................2

6操作程序..........................................................................2

7分析判定..........................................................................2

8样品无害化处理....................................................................3

附录A（规范性附录）试剂的配制......................................................4

附录B（资料性附录）番鸭呼肠孤病毒S1基因序列.......................................6

参考文献.............................................................................7

I

DB35/T1327—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。

本标准由福建省农业厅提出并归口。

本标准由福建省农业科学院畜牧兽医研究所负责起草。

本标准主要起草人：林锋强，陈少莺，胡奇林，陈仕龙，王劭，程晓霞，朱小丽，李兆龙，黄冬菊，

陈建翊。

II

DB35/T1327—2013

番鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了应用RT-PCR方法检测番鸭呼肠孤病毒的材料准备、操作方法、结果判定及样品无害

化处理。

本标准适用于番鸭呼肠孤病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3方法原理

将番鸭呼肠孤病毒RNA基因逆转录为互补DNA，以此为模板，利用番鸭呼肠孤病毒（muscovyduck

reovirus，MDRV）S1基因序列（见附录B）设计的一对引物,进行PCR特异性扩增，扩增与预期大小300bp

相符的片段，对病毒核酸进行定性。

4实验室准备

4.1微量移液器

4.2高速冷冻离心机

4.3聚合酶链式反应仪

4.4电泳仪

4.5凝胶成像系统

4.6PBS(0.01mol/LpH7.2)

配制方法按附录A中A.2进行。

4.7TRIzol试剂

4.8三氯甲烷（分析纯）

4.9异丙醇（分析纯）

4.10无水乙醇（分析纯）

4.1150×TAE缓冲液

配制方法按附录A中A.3进行。

1

DB35/T1327—2013

4.12电泳级琼脂糖

配制方法按附录A中A.4进行。

4.13AMV反转录酶

4.14RNA酶抑制剂

4.15TaqDNA聚合酶

4.16SYBR荧光染料

配制方法按附录A中A.5进行。

4.17上样缓冲液

配制方法按附录A中A.6进行。

4.18灭菌双蒸馏水

配制方法按附录A中A.7进行。

4.19MgCl2溶液

4.205×反转录反应缓冲液

配制方法按附录A中A.8进行。

4.21Random9mers

配制方法按附录A中A.9进行。

4.222.5mmoLdNTPs

配制方法按附录A中A.10进行。

4.2310×PCRBuffer

配制方法按附录A中A.11进行。

4.24引物

配制方法按附录A中