YC/T 382-2010 烟草及烟草制品 质体色素的测定 高效液相色谱法

ICS65.160

X87

备案号:—

304392011

中华人民共和国烟草行业标准

/—

YCT3822010

烟草及烟草制品质体色素的测定

高效液相色谱法

ㅤㅤㅤㅤ

——

TobaccoandtobaccoroductsDeterminationoflastidiments

pppg

Hiherformanceliuidchromatorahmethod

gpqgpy

2010-12-27发布2011-01-15实施

国家烟草专卖局发布

/—

YCT3822010

烟草及烟草制品质体色素的测定

高效液相色谱法

1范围

本标准规定了烟草及烟草制品中质体色素的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于烟草及烟草制品中表所列质体色素的测定。

1

表1适用于本标准的质体色素及对应检测限和定量限单位为微克每克

质体色素检测限定量限

新黄质0.180.60

紫黄质0.160.53

叶黄素0.070.23

叶绿素b0.290.97

叶绿素a0.170.57

胡萝卜素

-0.130.43

β

ㅤㅤㅤㅤ

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/分析实验室用水规格和试验方法

GBT6682

/烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法

YCT31

3原理

(),

用90%丙酮水溶液体积比超声萃取试样过滤后使用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定萃

,。

取液中的质体色素从而计算得出试样中各质体色素的含量

4试剂与材料

,。/。

除特殊要求外均应使用分析纯试剂水应符合GBT6682中一级水的要求

,。

4.1乙腈色谱纯

,。

4.2异丙醇色谱纯

,。

4.3丙酮纯度≥99.0%

(),。

4.4新黄质标准品CHO纯度≥95%

40584

(),。

4.5紫黄质标准品CHO纯度≥95%

40564

(),。

4.6叶黄素标准品CHO纯度≥95%

40562

1

/—

YCT3822010

(),。

叶绿素标准品纯度

4.7aCHMNO≥95%

5572g45

(),。

叶绿素标准品纯度

4.8bCHMNO≥95%

5570g46

(),。

胡萝卜素标准品纯度

4.9-CH≥97%

β4056

:()。

4.10萃取溶液90%丙酮水溶液体积分数

4.11标准溶液

4.11.1标准储备液

):()、(),,

标准储备液分别称取新黄质标准品紫黄质标准品精确至转移

aa1mg4.44.50.1mg

,(),/

至同一10mL棕色容量瓶中用萃取溶液4.10定容至刻度配制成浓度约为100mL的

μg

混合标准储备液。

):()、()、

标准储备液分别称取叶黄素标准品叶绿素标准品叶绿素标准品

bb1mg4.6a4.7b

(),,,()

4.8精确至0.1mg分别转移至不同的10mL棕色容量瓶中用萃取溶液4.10定容至刻

,/。

度配制成浓度约为100mL的单一标准储备液

μg

):(),,

标准储备液称取胡萝卜素标准品精确至0.1m置于50mL棕色容量瓶

cc2.5mgβ-4.9g

,(),/。

中用萃取溶液4.10定容至刻度配制成浓度约为50mL的单一标准储备液

μg

,。

以上标准储备液在-40℃避光条件下可贮存有效期为一个月

4.11.2工作标准溶液

)、)、),

分别移取标准储备液标准储备液标准储备液于容量瓶中用萃

a1mLb1mLc2mL10mL

(),。,/、

取溶液4.10定容至刻度配制成一级混合标准溶液然后逐级稀释得到浓度分别约为10.0mL

μg

/、/、/、/、/和/的七级工作标准溶

5.0mL2.50mL1.00mL0.50mL0.25mL0.10mL

μgμgμgμgμgμg

。/,/。

液对叶绿素再增加配制两个浓度水平的标准溶液

a50.0mL25.0mL

μgμg

ㅤㅤㅤㅤ

5仪器

5.1低温冷冻干燥机。

,。

粉碎机配目筛网

5.240

,。

5.3分析天平感量0.0001g

5.4超声波振荡器。

5.50.45m有机相滤膜。

μ

,。

5.6烘箱鼓风式

,、、。

5.7高效液相色谱仪具有柱温箱梯度洗脱功能紫外检测器

6试样制备

/。()

调制后烟叶和卷烟制品按YCT31制备试样田间新鲜烟叶应使用低温冷冻干燥机5.1在

,。

下冻干后进行粉碎过目筛后筛下物为待测试样

-50℃48h40

按照/测定试样水分含量。

YCT31

7分析步骤

7.1仪器准备

。。

按照制造商操作手册运行液相色谱仪所采用色谱条件应能使各质体色素与其他物质完全分离

,:

以下液相色谱仪分析条件可供参考采用其他条件应验证其适用性

2

/—

YCT3822010

———,,(),;

推荐色谱柱150mm×3.9mmi.d.固定相CNOVA-PAK填料粒度4m

18μ

———流动相:

●:;

溶剂A异丙醇

●:,();

溶剂乙腈溶液体积分数

B80%

●

:。

梯度洗脱按表所示线性梯度洗脱

2

表2流动相的梯度条件

时间流动相A流动相B

min%%

00100

401000

———流速:/;

0.5mLmin

———柱温:;

30℃

———进样量:;

10L

μ

———:,。

检测波长叶绿素检测波长其他物质检测波长448nm

a428nm

分析时间约为46min。

标准溶液()和典型烟草样品色谱图参见附录B。

4.11

7.2标准曲线的制作

(),,

对工作标准溶液4.11.2进行色谱测定以各质体色素浓度与各组分响应峰面积绘制标准曲线工

ㅤㅤㅤㅤ

2

,。,

作曲线应为线性关系相关系数R应不小于0.99其浓度范围应覆盖预计检测到的样品含量如样品

,。,。

检测浓度超出检测标准曲线范围可对样品适当稀释后进样采用保留时间定性外标法定量

7.3样品测定

(),,,

称取2g试样新鲜烟叶约0.2g精确至0.1mg置于50mL三角瓶中加入25mL萃取溶液

(),。(),

4.10超声萃取20min取出后静置至室温取适量萃取液用有机滤膜5.5过滤滤液装入2mL棕

,。

色样品瓶中进行高效液相色谱分析

8结果计算

():

以干基计的质体色素含量按式计算得出

1

/()…………()

X25cm1w1

=-

式中:

———,(/);

X质体色素含量单位为微克每克μgg

———,(/);

c萃取液中质体色素含量单位为微克每毫升μgmL

———,();

m试样质量单位为克g

———样品的含水率,。

w%

,/。。

结果以两次平行测定结果的平均值表示精确至0.01μgg平行测定的相对偏差应小于10%

9回收率和精密度

本方法的回收率和精密度试验研究结果参见附录A。

3

/—

YCT3822010

10测试报告

测试报告应说明:

———识别被测试样需要的所有信息;

———参照本标准所使用的试验方法;

———,;

测定结果包括各单次测定结果及其平均值

———与本标准规定的分析步骤的差异;

———试验日期;

———检测人员。

ㅤㅤㅤㅤ

4

/—

YCT3822010

附录

A

()

资料性附录

方法的回收率和精密度

A.1回收率

回收率试验结果见表A.1。

表A.1回收率试验结果

原含量高浓度水平中间浓度水平低浓度水平

质体色素

/%%%

μgg

新黄质10.9397.8100.0102.6

紫黄质15.6898.9103.2107.6

叶黄素50.3298.4100.498.3

叶绿素b130.92106.8109.4110.9

叶绿素a274.6299.1106.296.8

胡萝卜素

β-47.8696.5101.5103.5

ㅤㅤㅤㅤ

A.2精密度

精密度试验结果见表A.2。

表A.2精密度试验结果

试验次数新黄质紫黄质叶黄素叶绿素b叶绿素a胡萝卜素

β-

152.21/79.90/247.03/637.15/1309.77/234.88/

μggμggμggμggμggμgg

254.38/77.39/254.35/652.57/1465.43/235.63/g

μggμggμggμggμggμg

356.25/78.19/251.85/657.15/1353.27/245.75/

μggμggμggμggμggμgg

454.38/78.12/258.83/661.25/1370.28/236.63/

μggμggμggμggμggμgg

556.13/78.43/245.83/664.96/1366.81/243.56/

μggμggμggμggμggμgg

RSD3.01%1.17%2.12%1.65%4.15%2.08%

5

/—

YCT3822010

附录

B

()

资料性附录

色谱图示例

,,

按照本标准所规定方法对标准溶液和试样萃取液进行液相色谱分析所得到色谱图见图B.1~

图B.5。

ㅤㅤㅤㅤ

图B.1标准溶液色谱图

()

图B.2典型烟草样品白肋烟青烟叶萃取液中质体色素色谱图

6

/—

YCT3822010

()

图B.3典型烟草样品烤烟青烟叶萃取液中质体色素色谱图

ㅤㅤㅤㅤ

()

图B.4典型烟草制品混合型卷烟萃取液中质体色素色谱图

/—0

YCT38220101

0

2

—

2

8

3

/

T

C

Y

()

图B.5典型烟草制品烤烟型卷烟萃取液中质体色素色谱图

ㅤㅤㅤㅤ

·

1550662-21825