WS/T 569-2017 疟原虫检测 血涂片镜检法

ICS11.020

C62

WS

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T569—2017

疟原虫检测血涂片镜检法

Microscopicexaminationofbloodfilmsformalariaparasites

2017-08-01发布2018-02-01实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布

WS/T569—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准起草单位：海南省疾病预防控制中心、江苏省寄生虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心

寄生虫病预防控制所、云南省寄生虫病防治所、海南省农垦总局医院。

本标准主要起草人：王善青、高琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李雨春、刘莹、欧

阳范献。

I

WS/T569—2017

疟原虫检测血涂片镜检法

1范围

本标准规定了血涂片镜检法检测疟原虫的技术规范。

本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原虫的显微镜检测。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

疟原虫Plasmodiumspp

疟原虫是一类单细胞、寄生性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。寄生于人体的疟原虫主

要有恶性疟原虫（Plasmodiumfalciparum）、间日疟原虫（Plasmodiumvivax）、三日疟原虫（Plasmodium

malariae）和卵形疟原虫（Plasmodiumovale）等。

2.2

血涂片bloodfilms

将血液涂制于载玻片上制成的涂片。供显微镜疟原虫检查用的血涂片包括厚血膜涂片和薄血膜涂片

两种。

3仪器和器材

3.1生物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×目镜）。

3.2计数器。

3.3载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）。

3.4推片。

3.5血片染色架。

3.6血片干燥架。

3.7玻片盒。

3.8染色盘和染色缸。

4试剂和材料

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4.1吉氏染色原液。

4.2pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。

4.3甲醇（分析纯）。

4.4香柏油或专用浸油（折射率≥1.5）。

4.5二甲苯（分析纯）。

4.675%酒精。

4.7一次性采血针。

4.8一次性手套。

5检测步骤

5.1血涂片的制作

5.1.1采血部位及取血方法

经75%乙醇消毒采血部位，待干后，用一次性采血针在耳垂或指端扎刺取血，婴儿可从拇趾或足跟

扎刺取血。取1张已消毒推片，用拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片左下角刮取血液4μL～5μL用于

制作厚血膜，再用该端中部刮取血液1μL～1.5μL用于制作薄血膜。

5.1.2厚血膜制作

取1张载玻片，将推片左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左，由里向外划圈涂成直径0.8cm～1.0cm

的圆形厚血膜,厚度以1个油镜视野内可见到5个～10个白细胞为宜。

5.1.3薄血膜制作

用干棉球抹净推片左下角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之

间向两侧扩展至约2cm宽时，使2张玻片保持25°～35°，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。每张载玻片

上1个厚血膜和1个薄血膜（参见附录A）。

5.1.4编号

血膜制好后水平放置，充分干燥后，用铅笔在玻片一侧毛玻璃上或在薄血膜上编号。

5.2固定与溶血

5.2.1薄血膜固定

将薄血膜一端朝下呈45°，用棉签蘸取甲醇溶液，均匀轻抹于薄血膜表面，避免碰触厚血膜。

5.2.2厚血膜溶血

在干燥的厚血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟，待血膜呈浅灰色，倾去溶血液。

厚血膜制作后1d内染色无需溶血，超过1d的应溶血。

5.3吉氏染色

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5.3.1吉氏染液的配制（参见附录B）

吉氏染液包括吉氏染液原液和吉氏染液工作液。吉氏染液原液由5g吉氏粉加250mL甘油充分研磨后

加入250mL甲醇配制。吉氏染液原液在避光条件下可长期保存。常用的吉氏染液工作液包括2%，3%和

10%浓度三种，分别由吉氏染液原液和pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）按比例配制。吉氏染液工作液只能

使用时新鲜配制。

5.3.2单张血涂片染色（参见附录C）

单张血涂片吉氏染色常用于临床疟疾患者的显微镜疟