DB42/T 800-2012 两系杂交水稻 品种纯度SSR检测方法

ICS65.020.20

B21

备案号：33041-2012DB42

湖北省地方标准

DB42/T800—2012

两系杂交水稻品种纯度SSR检测方法

Procedurefortestingseedpurityoftwo-linesystemhybridricebySSR

2012-01-12发布2012-05-04实施

湖北省质量技术监督局发布

DB42/T800-2012

目次

前言.....................................................................................................................................................................Ⅱ

1范围.................................................................................................................................................................1

2规范性引用文件.............................................................................................................................................1

3术语和定义.....................................................................................................................................................1

4原理.................................................................................................................................................................2

5核心引物确定原则.........................................................................................................................................2

6检测程序.........................................................................................................................................................2

7结果计算.........................................................................................................................................................3

附录A（资料性附录）NY/T1433-2007推荐的24对SSR引物序列..........................................................4

附录B（资料性附录）47对湖北省现有两系杂交水稻品种纯度SSR检测常用引物序列......................5

附录C（规范性附录）相关试剂配制...........................................................................................................7

I

DB42/T800-2012

前  言

本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由湖北省农业厅提出并归口。

本标准起草单位：湖北省种子管理局。

本标准主要起草人：周正明、谢建平、李彧、高明鑫、马磊。

II

DB42/T800—2012

两系杂交水稻品种纯度SSR检测方法

1范围

本标准规定了两系杂交水稻品种纯度SSR检测技术方法的术语和定义、原理、核心引物确定原则、

检测程序和结果计算。

本标准适用于品种真实性已经确认的两系杂交水稻品种纯度的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是

不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程发芽试验

NY/T1433-2007水稻品种鉴定DNA指纹方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

简单重复序列SSRsimplesequencerepeats

又称微卫星序列或串联重复序列，是由1-5个核苷酸为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp

的串联重复序列。

3.2

聚合酶链式反应PCRpolymerasechainreaction

一种用于在体外扩增DNA序列的技术程序。模板DNA经高温变性分解为两条单链，在适宜温度下，经

DNA聚合酶的催化作用，两条引物分别与DNA模板两条单链上的一段互补序列发生退火结合，然后在DNA

聚合酶的催化下以四种脱氧核苷三磷酸（dNTPdeoxyribonucleosidetriphosphate）为底物，引物延

伸合成DNA。如此变性分解、退火结合和延伸合成DNA反复循环，使位于引物序列之间的DNA片段呈几何

倍数扩增。

3.3

引物primer

具有游离的3’-OH末端及特定序列的寡核苷酸短片段，与DNA模板结合后启动PCR反应。

3.4

亲本种子parental

1

DB42/T800-2012

用于配制大田生产杂交种子的不育系和恢复系种子。

4原理

简单重复序列分布于水稻整个基因组，每个位点上重复单位的数目及重复单位的序列都可能不完全

相同，因而造成了对应座位上的多态性。由于每个简单重复序列两端的序列是高度保守的单拷贝序列，

因而可根据其两端的序列设计一对特异引物，利用PCR技术进行扩增，扩增产物利用电泳进行分离，分

析其长度多态性，达到区别不同于杂交种的目的。

5核心引物确定原则

在水稻基因组上选取多态性、稳定性、重复性等综合特性好的引物作为核心引物（推荐引物序列见

附录A、附录B）。其中附录A引自NY/T1433-2007水稻品种鉴定DNA指纹方法，附录B为湖北省现有两

系杂交水稻品种纯度SSR检测常用引物。

6检测程序

6.1样品数

从供检样品中随机取400粒种子按GB/T3543.4-1995《农作物种子检验规程发芽试验》标准中规定

的方法进行发芽，从发芽的幼苗中随机取192株幼苗进行