DB15/T 2855-2023 马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程

ICS65.020.01

CCSB31

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2855—2023

马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程

CodeofpracticeforqPCRdetectionofditylenchusdestructor

2023-01-28发布2023-02-28实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2855—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、中国农业大学、鄂尔多斯市农牧技术推广中心、内

蒙古自治区农牧业技术推广中心、鄂托克前旗农牧业技术推广中心。

本文件主要起草人：席先梅、张力群、霍宏丽、陈伟、苗春乐、融晓君、路奇、尤俊文、张晓霞、

贺小勇、孔庆全、张冬梅、田晓燕。

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DB15/T2855—2023

马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程

1范围

本文件规定了利用qPCR检测技术对马铃薯腐烂茎线虫检测的试剂、仪器、样品处理、DNA提取、结

果记录和样品保存等内容。

本文件适用于土壤和马铃薯植物样品中腐烂茎线虫的qPCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T1121.1土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和储存

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

腐烂茎线虫ditylenchusdestructor

腐烂茎线虫属于线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernrntea）、垫刃目（Tylenchida）、粒科

（Anguinidae）、茎线虫属（Ditylenchus），是危害马铃薯的重要病原线虫，可引起马铃薯叶片黄化、

萎蔫、块茎干腐等症状，导致减产和品质降低。参见附录A。

定量PCRquantitativePCR

定量PCR技术（quantitativePCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入可与靶标DNA结合的荧光基团，

依据荧光信号的强度对扩增产物进行实时监测，从而实现对初始靶标DNA模板量进行定量分析的技术。

根据荧光信号来源可分为染料法和探针法。

4试剂和仪器

试剂

4.1.1除特别规定外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定。

4.1.2土壤提取缓冲液：1MTris-HCl，0.1MEDTA，1.5MNaCl，2%CTAB，0.1MNaH2PO4/Na2HPO4，

pH=8.0。

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4.1.3CTAB缓冲液：2%CTAB，1.4MNaCl，0.1MTris-HCl，0.02MEDTA，pH=8.0。E缓冲液：10

mMTris-HCl，1mMEDTA，pH=8.0。

4.1.4TE缓冲液：10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH=8.0。

4.1.5其他试剂包括Tris饱和酚（pH=7.8），氯仿，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，20%SDS，rTaqDNA

聚合酶（5U/μL）及其缓冲液，25mM氯化镁（MgCl2）溶液，dNTPs溶液（含dATP,dTTP,dCTP,dGTP

各2.5mM），0.1%牛血清蛋白（bovineserumalbumin，BSA）。

仪器

超微量分光光度计，真空抽干仪，普通天平（感量0.01g），高速离心机，4℃冰箱，医用冰箱（-

20℃），超低温冰箱（-80℃），制冰机，水浴锅，涡旋振荡仪，磁力搅拌器，高压灭菌锅，