GB/T 23412-2009 蜂蜜中19种喹诺酮类药物残留量的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法

ICS67.050

B47OB

中华人民共和国国家标准

GB/T23412—2009

蜂蜜中19种唾诺酮类药物残留量的

测定方法液相色谱-质/质谱法

Determinationofresiduesof19quinolonesinhoney—

LC-MS/MSmethod

2009-03-28发布2009-07-01实施

发布

GB/T23412—2009

前言

本标准的附录A、附录E、附录C和附录D为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国江苏岀入境检验检疫局。

本标准主要起草人：沈崇饪、陈惠兰、丁涛、张晓燕、刘艳、张嬪、黄娟、蒋原、陶宏锦、沈东旭。

I

GB/T23412—2009

蜂蜜中19种唾诺酮类药物残留量的

测定方法液相色谱■质/质谱法

1范围

本标准规定了蜂蜜中恩诺沙星（简称ENR,下同），环丙沙星（简称CIP,下同），诺氟沙星（简称

NOR,下同），氧氟沙星（简称OFL,下同），双氟沙星（简称DIF,下同），噁座酸（简称（）X0,下同）、氟甲

座（简称FLU,下同），沙拉沙星（简称SAR,下同），司帕沙星（简称SPA,下同），丹氟沙星（简称DAN,

下同），氟罗沙星（简称FLE,下同），马波沙星（简称MAR,下同），伊诺沙星（简称ENO,下同）.奥比沙

星（简称（）RB,下同），毗哌酸（简称PIP,下同），培氟沙星（简称PEF,下同），洛美沙星（简称LOM,下

同），西诺沙星（简称CIN,下同）和荼喘酸（简称NAL,下同）19种座诺酮残留量的液相色谱-质/质

的测定方法。上述19种座诺酮类药物中英文名称、结构式、CAS号和相对分子质量参见附录A。

本标准适用于蜂蜜中座诺酮类残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987,（）D）

3方法提要

试样加入内标后，氢氧化钠溶液溶解蜂蜜样品，离子化的嗟诺酮类残留物经过阴离子交换固相萃取

柱富集净化，用液相色谱-质/质谱法测定，梯度洗脱，内标法定量。

4试剂和材料

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇：HPLC级。

4.2氢氧化钠。

4.3甲酸（85%）。

4.4阴离子交换柱（PAX）：60mg,3mL,或相当者。

4.5同位素内标：NOR-Ds：纯度》98%。

4.6ENR、CIP、N（）R、（）FL、DIF•HC1.SAR•HC1、SPA、DAN、（）X（）、FLU、FLE、MAR、EN（）、（）RB、

PIP、PEF、L（）、CIN和NAL标准品：纯度$99%。

4.7嗟诺酮类标准储备溶液：1mg/mLo准确称取适量的嗟诺酮类标准品（4.6）,用甲醇（4.1）配成

1.0mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4C冰箱中，可保存6个月。

4.8氛代诺氟沙星（N（）R-DJ内标储备溶液：100g/mL0称取适量的NOR-D5内标物（4.5）,用甲醇

（4.1）配成100g/mL储备液，储备液贮存在4C冰箱中。

4.9氛代诺氟沙星（N（）R-DJ内标工作溶液：1g/mL0取适量内标储备液（4.8）用甲醇（4.1）稀释成

1工作溶液，内标工作溶液在4C保存。

4.10座诺酮类标准工作溶液:用甲醇-水（2+8,体积比）分别配成浓度范围为1ng/mL-60ng/mL标

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GB/T23412—2009

准工作溶液,其中内标溶液浓度为50ng/mL,现配。

4.11氢氧化钠溶液（0.1mol/L）：取4g氢氧化钠，溶解于1L水中。

4.12甲酸-甲醇溶液（5+95,体积比）：取5mL甲酸（4.3）,溶解于95mL甲醇（4.1）中。

4.13甲醇-水（2+8,体积比）：量取20mL甲醇（4.1）于80mL水中，混合均匀。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.01g和0.1mg各一台。

5.3旋转蒸发仪。

5.4固相萃取装置。

5.5涡旋混匀器。

5.6真空泵：真空度不低于80kPa。

5.7滤膜：有机系,0.45mo

5.8离心管：50mL,具塞。

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

将实验室样品搅拌均匀，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品袋中，密封，并做上标记。

在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化。

6.2试样的保存

将试样于冷藏状态下保存（4C）。

7测定步骤

7.1提取

准确称取5g（精确到0.01g）试样，置于50mL具塞离心管中，准确加入1g/mL内标溶液（4.9）

50pL,加入5mL氢氧化钠溶液（4.11）,于涡旋混匀器上快速混合至蜂蜜完全溶解。依次用3mL甲醇

和3mL水活化固相萃取小柱（4.4）,将样品溶液转移到小柱上，依次用水、甲醇淋洗，弃去上述滤液。

用甲酸-甲醇溶液（4.12）3mL洗脱。40€水浴旋转蒸发至干，用甲醇-水（4.13）定容1.0mL,过

0.45的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。

7.2测定

7.2.1参考液相色谱条件

a）色谱柱:C18,3卩m,150mmX2.0mm（内径）或相当者；

b）流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液；

c）流速：0.20mL/min；

d）梯度洗脱程序:参见附录B；

e）柱温：室温；

f）进样量:25卩L。

7.2.2串联质谱条件

参见附录C。

7.3液相色谱-质/质谱测定

7.3.1定性测定

进行样品测定时,如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图

中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超

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GB/T23412—2009

过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差

相对离子丰度>50%>20%〜50%>10%〜20%<10%

允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%

7.3.2定量测定

标准工作溶液（4.10）在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以标准与内标物峰面积比值为纵

坐标,工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制标准工作曲线（1ng/mL〜60ng/mL）,用标准工作曲线对

样品进行定量，样品溶液响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，其相应的标准物质和

内标离子流色谱图参见附录Do

7.4空白试验

除不加入试样外，按上述（7.1〜7.3）步骥进行。

8结果计算

结果按式（1）计算：

“=£X叫

'xAsXin

式中：

5——样品中座诺酮的浓度，单位为微克每千克（g/kg）；

——样品中座诺酮的峰面积与相应内标峰面积比值；

>ns座诺酮的质量，单位为纳克（ng）;

As——标准品中座诺酮的峰面积与相应内标峰面积比值；

m样品质量，单位为克（g）。

9检测低限、回收率范围和精密度

本标准中19种座诺酮类检测低限均为1.0g/kg0

蜂蜜中座诺酮添加浓度及回收率范围（内标校正）的试验数据（"=10）：

添加水平为1.0（ug/kg,19种座诺酮回收率范围为71%〜118%；

添加水平为2.0卩g/kg,19种座诺酮回收率范围为71%〜117%；

添加水平为5.0卩g/kg,19种座诺酮回收率范围为70%〜117%。

在1.0“g/kg、2.0g/kg和5.0g/kg添加水平上，相对标准偏差（RSD）为4.2%〜10.9%。

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附录A