GB/T 23406-2009 肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法

ICS67.050

B45

中华人民共和国国家标准

GB/T23406—2009

肠衣中硝基咪瞠类药物及其代谢物

残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

Determinationofresiduesofnitroimidazolesandtheirmetabolitesincasing—

LC-MS/MSmethod

2009-03-28发布2009-07-01实施

发布

GB/T23406—2009

前言

本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：陈惠兰、丁涛、沈崇铉、张晓燕、杨雯筌、张玲、蔡宝亮、蒋原、陶宏锦。

T

GB/T23406—2009

肠衣中硝基咪□坐类药物及其代谢物

残留量的测定液相色谱■质谱/质谱法

1范围

本标准规定了肠衣中甲硝哩（简称MN乙下同）及其代谢物1-（2-轻乙基）-2-轻甲基-5-硝基咪卩坐（简

称MNZOH,下同），二甲硝咪哩（简称DMZ,下同）及其代谢物2-轻甲基-1-甲基-5-硝基咪睦（简称

HMMNI,下同），异丙硝哩（简称IP乙下同）及其代谢物2-（2-轻异丙基）-1-甲基-5-硝基咪哩（简称

IPZOH）,洛硝哒卩坐（简称RN乙下同）残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。上述硝基咪哩类药物中

英文名称、结构式、CAS号和相对分子质量参见附录A。

本标准适用于肠衣中硝基咪醴类药物及其代谢物残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD）

3方法提要

试样加入相应内标后用乙酸乙酯提取硝基咪卩坐类药物及其代谢物，蒸干提取溶液，利用液相色谱-

串联质谱仪测定，梯度洗脱，内标法定量。

4试剂和材料

除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇：HPLC级。

4.2乙酸乙酯。

4.3乙酸钱：HPLC级。

4.4同位素内标：DMZ-D,JPZOH-D,.HMMNI-D,,纯度$98%。

4.5MNZ、MNZ（）H、DMZ、HMMNI、IPZ、IPZ（）H和RNZ标准品：纯度》98%。

4.6MNZ、MNZ（）H、DMZ、HMMNI、IPZ、IPZ（）H和RNZ标准储备溶液：1.Omg/mL。准确称取适

量的MNZ、MNZOH.DMZ.HMMNI,IPZ,IPZOH和RNZ标准品（4.5）,用甲醇（4.1）配成1.0ing/rriL

的标准储备液，储备液贮存在4C冰箱中，可保存6个月。

4.7DMZ-D,.IPZOH-D,和HMMNI-D内标储备溶液：100Mg/mL0称取适量的DMZ-D、IPZ（）H-D和

HMMNI-D；.内标物（4.4）,用甲醇（4.1）配成100Mg/mL储备液，储备液贮存在4C冰箱中。

4.8DMZ-D,JPZOH-D,和HMMNI-D：,内标工作溶液：1“g/mL。取适量内标储备液（4.7）用甲醇

（4.1）稀释成1“g/mL工作溶液，内标工作溶液在4C保存。

4.9MNZ、MNZ（）H、DMZ、HMMNI、IPZ、IPZ（）H和RNZ标准工作溶液：用甲醇（4.1）分别配成浓度

范围为1ng/mL〜50ng/mL标准工作溶液，其中内标溶液浓度为50ng/mL,现配。

4.10甲醇-水（2+8,体积比）：量取20mL甲醇（4.1）于80mL水中，混合均匀。

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GB/T23406—2009

5仪器

5.1液相色谱-质谱/质谱仪（串联四极杆）：配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.01g和0.1mg各一台。

5.3旋转蒸发仪或相当者。

5.4涡旋混匀器。

5.5真空泵：真空度不低于80kPao

5.6离心机转速不低于2500r/mino

5.7移液器5mL9200fzL0

5.8离心管50mL,具塞。

5.9滤膜：有机,0.45Mmo

6试样的制备与保存

6.1试样的制备

将实验室样品均质粉碎均匀，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品袋中，密封，并做上标

记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化。

6.2试样的保存

将试样于冷冻状态下保存。

7测定步骤

7.1提取

准确称取10g（精确到0.01g）试样，置于50mL具塞离心管中，准确加入3种内标混合溶液（4.8）

50/aLo加入10mL乙酸乙酯（4.2）,混合30s,2500r/min离心3min,取上层乙酸乙酯到50mL玻璃

试管中，再加入10mL乙酸乙酯（4.2）,重复上述提取步骤，合并提取液，40C水浴旋转蒸发干。甲醇-

水（4.10）1.0mL定容，过滤到进样瓶中，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.2测定

7.2.1参考液相色谱条件

a）色谱柱：Go（封端），3（um,150mmX2.0mm（内径）或相当者；

b）流动：甲醇+乙酸钱溶液（5mmol/L）；

c）流速：0.20mL/min；

d）梯度洗脱程序:参见附录B；

e）柱温：室温；

f）进样量：25ptL。

7.2.2串联质谱条件

参见附录C。

7.3液相色谱-串联质谱测定

7.3.1定性测定

进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留吋间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图

中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超

过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表1定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差

相对离子丰度>50%>20%〜50%>10%〜20%<10%

允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%

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GB/T23406—2009

7.3.2定量测定

标准工作溶液(4.9)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以标准与内标物峰面积比值为纵

坐标,工作溶液浓度(ng/mL)为横坐标，绘制标准工作曲线(1ng/mL〜50ng/mL),用标准工作曲线对

样品进行定量，样品溶液中标准的响应值均在仪器测定的线性范围内。其中DMZ-D:i作为MNZ.DMZ

和MNZOH内标使用；HMMNI-D：＜作为HMMNI和RNZ内标使用；IPZOH-D,作为IPZ和IPZOH

内标使用。在上述色谱条件下，其相应的标准物质和内标离子流色谱图参见附录D。

7.4平行试验

按以上(7.1-7.3)步骤，对同一试样进行平行试验测定。

7.5空白试验

除不称取试样外，均按上述(7.1-7.3)步骤进行。

8结果计算

结果按式(1)计算：

AxXCs/T\

5=卞話(1)