JJF 1665-2017 流式细胞仪校准规范

中华人民共和国国家计量技术规范

JJF1665—2017

流式细胞仪校准规范

CalibrationSpecificationforFlowCytometers

2017-11-20发布2018-02-20实施

国家质量监督检验检疫总局发布

JJF1665—2017

目录

引言

………………………(Ⅱ)

范围

1……………………(1)

引用文件

2………………(1)

术语

3……………………(1)

等量可溶性荧光分子

3.1………………(1)

概述

4……………………(1)

计量特性

5………………(1)

分辨力

5.1………………(1)

线性相关系数

5.2………………………(1)

检出限

5.3………………(1)

漂移

5.4…………………(1)

重复性

5.5………………(1)

示值误差

5.6……………(1)

校准条件

6………………(2)

环境条件

6.1……………(2)

标准物质和校准设备

6.2………………(2)

校准项目和校准方法

7…………………(3)

分辨力

7.1………………(3)

线性相关系数

7.2………………………(3)

检出限

7.3………………(4)

漂移

7.4…………………(4)

重复性

7.5………………(5)

示值误差

7.6……………(5)

校准结果表达

8…………(5)

复校时间间隔

9…………(6)

附录校准原始记录参考格式

A………(7)

附录校准证书内页推荐格式

B………(9)

附录示值误差校准不确定度评定示例

C……………(10)

Ⅰ

JJF1665—2017

引言

本规范主要参考了液体颗粒计数器和医药行业标准

JJG1061—2010《》YY/T0588—

流式细胞仪

2005《》。

本规范为首次发布

。

Ⅱ

JJF1665—2017

流式细胞仪校准规范

1范围

本规范适用于基于荧光检测原理的分析型流式细胞仪的校准其他类型的流式细胞

。

仪以下简称仪器可参照本规范执行

(),。

2引用文件

本规范引用了下列文件

:

国家计量校准规范编写规则

JJF1071—2010

生物计量术语及定义

JJF1265

凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本规范凡是不注日期的引用文

,;

件其最新版本包括所有的修改单适用于本规范

,()。

3术语

定义的及以下术语和定义适用于本规范

JJF1265。

等量可溶性荧光分子

3.1moleculesofequivalentsolublefluorochrome,MESF

颗粒发出的荧光信号强度相当的可溶性荧光素分子的物质的量浓度用于表示颗粒

。

发出的荧光信号强度

。

4概述

流式细胞仪由液流系统光学系统检测系统和分析系统四部分组成见图

、、(1)。

测量原理为鞘液和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束与水平方向的激光束垂直相

,

交染色的细胞受激光照射后发出荧光或产生散射光这些信号分别被光电倍增管荧光

,,

检测器和光电二极管散射光检测器接收经过计算机储存计算分析这些数字化信

,、、

息就可得到细胞的大小活性核酸含量酶和抗原的性质等物理和生化指标

,、、、。

5计量特性

分辨力

5.1

线性相关系数

5.2

检出限

5.3

漂移

5.4

重复性

5.5

示值误差

5.6

1

JJF1665—2017

图流式细胞仪组成示意图

1

6校准条件

环境条件

6.1

实验室环境应当满足仪器厂家的安装要求

:

环境温度

(15~30)℃;

相对湿度

≤70%。

标准物质和校准设备

6.2

标准物质

6.2.1

单一荧光强度的荧光微球标准物质

;

多重荧光强度混合荧光微球标准物质

;

计数荧光微球标准物质

;

淋巴细胞计数标准物质

。

校准时应采用有证标准物质相对扩展不确定度不超过k

,20%(=2)。

化学试剂

6.2.2

去离子水滤膜过滤

(18.2MΩ·cm,0.22μm);

磷酸钠缓冲液

0.1mol/LpH(7.2~7.4)。

校准设备

6.2.3

移液器量程级及以上校准设备需经检定合格

,(200~1000)μL,B。。

2

JJF1665—2017

7校准项目和校准方法

分辨力

7.1

仪器经预热进入正常工作状态在装有经过滤膜过滤的磷酸盐

,。0.5mL0.22μm

缓冲液的试管中移取单一荧光强度的荧光微球标准物质充分混匀后上机实

,0.5mL,

验记录前向角散射光和激发下两个荧光通道包括绿色荧光异硫氰

。488nm,(FITC

酸荧光素橙红色荧光藻红蛋白收集门内有效信号个按式计

)、(PE)。10000,(1)

算前向角散射光和两个荧光通道中校准微球峰宽的相对标准偏差以表示分

(RSD),

辨力

。

δ

RSD=μ×100%